黃 垚 劉 燁

多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一種起源于骨髓漿細(xì)胞的惡性疾病，其發(fā)病率在血液系統(tǒng)惡性疾病中僅次于淋巴瘤，占全部惡性腫瘤的1%左右，多發(fā)病于老年人[1]。MM被認(rèn)為是起源于終末分化的B型淋巴細(xì)胞，患者的骨髓出現(xiàn)大量的異常漿細(xì)胞克隆性增殖，臨床表現(xiàn)多樣，早期表現(xiàn)無特異性，但是預(yù)后比較差，中位生存期在3年左右[2-3]。當(dāng)前MM的主要確診指標(biāo)包括骨髓細(xì)胞學(xué)檢查，但是最終確診需要影像學(xué)與血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合確診?，F(xiàn)代研究表明MM患者存在顯著的T細(xì)胞與B細(xì)胞免疫缺陷，特別是隨著B細(xì)胞向漿細(xì)胞的分化成熟，其過程中會丟失大多數(shù)的B系表達(dá)抗原及膜表面免疫球蛋白[4-6]。有研究認(rèn)為CD56、CD117分子在漿細(xì)胞上強(qiáng)表達(dá)，CD56、CD117可能成為MM單克隆抗體治療的潛在靶點[7-9]。隨著檢測技術(shù)的發(fā)展，流式細(xì)胞術(shù)可以準(zhǔn)確識別骨髓瘤細(xì)胞的免疫表型特點，有利于MM的診斷及微小殘留病變的檢測[10-11]。本文具體探討了CD56、CD117在多發(fā)性骨髓瘤中的表達(dá)及其與臨床病理特征的相關(guān)性，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2012年8月到2017年2月我院血液科診治的MM患者80例作為MM組，符合MM的診斷標(biāo)準(zhǔn)(骨髓中漿細(xì)胞增多>30%，活檢證實為漿細(xì)胞瘤，正常免疫球蛋白減少)，其中男性42例，女性38例；年齡最小28歲，最大78歲，平均年齡(67.13±4.28)歲；臨床分期：Ⅰ期40例，Ⅱ期20例，Ⅲ期20例；M蛋白類型：IgG型50例，IgA型10例，IgD型20例；輕鏈類型：Κ鏈50例，λ鏈30例；IgH重排：陽性15例，陰性65例。選取同期在我院進(jìn)行體檢的健康者80例作為對照組，均無腫瘤及自身免疫性疾病，其中男性40例，女性40例；年齡最小30歲，最大80歲，平均年齡(67.78±4.11)歲。2組入選者一般資料對比無顯著差異(P>0.05)。所有入選者均簽署知情同意書，本研究已通過醫(yī)院倫理委員會審批。

1.2 標(biāo)本采集與檢測

所有入選者均于清晨起床前空腹平臥位，采取靜脈血3～5 ml，乙二胺四乙酸EDTA抗凝。血標(biāo)本用PBS稀釋等量稀釋，然后加入3～5 ml淋巴細(xì)胞分離液，可形成清晰的界面，室溫下以2000 rpm，離心20 min。吸出白膜層，加入10倍體積的PBS洗滌2次，采用PBS調(diào)整細(xì)胞濃度至1×106個/ml，使用臺盼藍(lán)染色記數(shù)細(xì)胞活力。分為2管，每管取1×106細(xì)胞，一管為對照管，一管為檢測管。分別加入熒光標(biāo)記的CD56、CD117的抗體及對照抗體各20 μL，4 ℃暗室避光孵育30 min后，加入溶血素3 000 μl，混勻后室溫放置10 min，1 000 r/min離心5 min。PBS洗滌3次，用流式細(xì)胞儀以CellQuest軟件獲取和分析數(shù)據(jù)。

1.3 觀察指標(biāo)

記錄2組入選者的性別、年齡等指標(biāo)，記錄MM組患者的臨床分期、M蛋白類型、輕鏈類型、IgH重排等情況。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果以熒光強(qiáng)度<102為陰性，在102～103范圍內(nèi)為弱陽性，熒光強(qiáng)度在103～104范圍內(nèi)為強(qiáng)陽性，檢查結(jié)果以抗原表達(dá)>20%為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 2組CD56、CD117表達(dá)陽性率對比

觀察組的CD56、CD117表達(dá)陽性率分別為40.0%和30.0%，對照組分別為8.8%和10.0%，觀察組顯著高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 2組CD56、CD117表達(dá)陽性率對比(例，%)

2.2 CD56、CD117表達(dá)與多發(fā)性骨髓瘤的臨床病理特征的相關(guān)性

CD56、CD117的表達(dá)與多發(fā)性骨髓瘤的臨床分期、IgH重排、M蛋白類型、輕鏈類型顯著相關(guān)(P<0.05)，與患者年齡、性別無關(guān)(P>0.05)。見表2。

表2 MM患者中CD56、CD117表達(dá)與臨床病理特征參數(shù)的相關(guān)性(例，%)

2.3 相關(guān)性分析

在觀察組中，Spearman等級相關(guān)分析顯示CD56表達(dá)陽性率與CD117表達(dá)陽性率呈顯著正相關(guān)性(γ=0.644，P=0.000)。見表3。

表3 MM組織中CD56與CD117的相關(guān)性/例

3 討論

MM是由單克隆的漿細(xì)胞異常增生所致的惡性疾病，以分泌異常單克隆免疫球蛋白的漿細(xì)胞在骨髓內(nèi)大量增生聚集，尿液、血中出現(xiàn)單克隆免疫球蛋白而正常免疫球蛋白受到抑制為特征[12-13]。MM的臨床治療比較困難，導(dǎo)致預(yù)后比較差，進(jìn)展期MM患者的中位存活期僅為6個月[14]。而常規(guī)化療的完全緩解率低于5%，有效率為不到50%，中位存活期一般在2年左右。雖然化療有一定的效果，但是可伴隨有腎功能衰竭、感染、出血，且停藥后復(fù)發(fā)率高[15]。分子生物學(xué)治療與免疫治療是延長MM患者緩解期、預(yù)防疾病復(fù)發(fā)的有效方法，通過檢測骨髓瘤細(xì)胞免疫表型，可為尋找單克隆抗體治療提供依據(jù)[16]。

MM患者瘤細(xì)胞表面抗原表達(dá)具有高度不均一，正常漿細(xì)胞與瘤細(xì)胞抗原表達(dá)差別很大，可過度表達(dá)CD56。CD117是由c-kit原癌基因編碼的跨膜酪氨酸蛋白激酶受體，配體為干細(xì)胞因子受體-配體結(jié)合后導(dǎo)致酪氨酸磷酸化，進(jìn)而激活控制細(xì)胞的信號傳導(dǎo)級聯(lián)系統(tǒng)，為此CD117的異常表達(dá)可能會改變傳導(dǎo)通路，持續(xù)作用于腫瘤形成的全過程[17]。本研究顯示觀察組的CD56、CD117表達(dá)陽性率分別為40.0%和30.0%，對照組分別為8.8%和10.0%，觀察組都顯著高于對照組(P<0.05)。也有研究檢測了48例初診MM患者、43例MM復(fù)發(fā)患者中惡性漿細(xì)胞CD117的表達(dá)情況，提出CD117的表達(dá)與MM活動狀態(tài)相關(guān)[18]。不過MM患者治療后免疫表型有改變，有研究顯示大約1/3的MM初診患者經(jīng)過治療后免疫表型發(fā)生改變，CD56、CD117、CD20、CD27的改變都在10.0%左右[19]。

MM的臨床特征是骨髓內(nèi)漿細(xì)胞惡性增生、異常免疫球蛋白大量生成與骨質(zhì)被破壞，在臨床上的誤診率接近50.0%。當(dāng)前MM的確診依據(jù)主要靠骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)和免疫蛋白電泳，其中骨髓形態(tài)學(xué)檢查是確診MM的主要方法，但是部分骨髓瘤細(xì)胞與正常漿細(xì)胞形態(tài)相似，臨床診斷困難。因此尋找到腫瘤細(xì)胞特異的免疫標(biāo)記不僅可以提供確診MM的佐證，還可有助于研究MM細(xì)胞的生物學(xué)特性，為尋找治療靶點提供依據(jù)。本研究顯示在觀察組中，隨著臨床分期增加、IgH重排陰性、IgD型、輕鏈λ鏈，CD56、CD117的表達(dá)陽性率顯著增加(P<0.05)，而與患者年齡、性別無關(guān)(P>0.05)。有研究認(rèn)為，CD56特異的表達(dá)于漿細(xì)胞，CD56介導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞的粘附，且CD56不會在骨髓造血前體細(xì)胞和淋巴細(xì)胞上表達(dá)[20]。也有研究在人骨髓瘤細(xì)胞系及MM患者骨髓中發(fā)現(xiàn)有部分細(xì)胞亞群不表達(dá)CD56，但是具有更強(qiáng)的克隆源性[21]。從機(jī)制上分析，在骨髓瘤細(xì)胞分化過程中，CD56可從細(xì)胞表面脫失，使骨髓瘤細(xì)胞不能與基質(zhì)細(xì)胞相互黏附而進(jìn)入血漿中，引起骨髓瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，播散。有研究結(jié)合DNA倍體、FISH檢測，多因素分析顯示CD117的表達(dá)明顯與MM患者的超二倍體及較少的易位相關(guān)，且總生存期相對縮短。另有研究表明，結(jié)合多發(fā)性骨髓瘤臨床分期，CD117表達(dá)差異有顯著性意義，隨疾病惡性程度增高，骨髓瘤細(xì)胞表面表達(dá)CD117增多[22]。本研究Spearman等級相關(guān)分析顯示觀察組的CD56表達(dá)陽性率與CD117表達(dá)陽性率呈顯著正相關(guān)性(γ=0.644，P=0.000)。不過骨髓瘤細(xì)胞表面抗原表達(dá)高度異質(zhì)，大部分初診的患者可以發(fā)現(xiàn)有異常表型，包括CD117、CD56的過表達(dá)[23]，特別是CD56可用來區(qū)別惡性和良性的漿細(xì)胞，但是骨髓瘤細(xì)胞CD56表達(dá)的缺失也可能與疾病更強(qiáng)的侵襲性和髓外浸潤相關(guān)[24]。

總之，CD56、CD117在MM患者中都呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，與患者的臨床分期、免疫特征等顯著相關(guān)，可作為MM免疫球蛋白分型的指標(biāo)。