肖 虎， 馮 景， 糜 軍， 侯照遠(yuǎn)， 杜 穎

(1. 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，上海 200025； 2. 上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院南院檢驗(yàn)科，上海 201499)

近年來，全球肺癌發(fā)病率呈增長趨勢(shì)，在我國發(fā)病率和病死率均高居惡性腫瘤首位[1]，成為威脅人類健康的一大殺手。2008年全球肺癌患者男性5年生存率僅為6%～14%，女性僅為7%～18%[2]，由于大多數(shù)肺癌患者早期無明顯特殊的臨床癥狀，因而很多肺癌患者確診時(shí)已到中晚期，失去了手術(shù)的最佳時(shí)機(jī)，而其早期診斷進(jìn)行手術(shù)5年存活率可達(dá)80%，因此對(duì)肺癌早期診斷進(jìn)行基礎(chǔ)和臨床研究迫在眉睫[3]。目前，肺組織活檢是肺癌的診斷金標(biāo)準(zhǔn)，此方法為有創(chuàng)性操作，患者的接受度不高。血清腫瘤標(biāo)記物對(duì)肺癌的診斷及鑒別診斷具有一定的價(jià)值，但常見的血清腫瘤標(biāo)記物單項(xiàng)檢測(cè)靈敏度均未超過50%[4]。

血清同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)是甲硫氨酸(亦稱蛋氨酸)代謝過程中的中間產(chǎn)物，由細(xì)胞內(nèi)的甲硫氨酸脫甲基而成。目前已有研究證實(shí)Hcy的水平升高與多種疾病有關(guān)。肖瀅等[5]證實(shí)高血壓患者Hcy的水平升高會(huì)導(dǎo)致腎臟損傷；Wu等[6]認(rèn)為Hcy與惡性腫瘤存在相關(guān)性，Hcy水平能夠準(zhǔn)確反映腫瘤細(xì)胞的數(shù)量；喬蕊等[7]發(fā)現(xiàn)血清Hcy水平在結(jié)直腸癌、原發(fā)性肝細(xì)胞癌、乳腺癌、膀胱癌、腎癌、胃癌和食管癌等腫瘤中的升高具有普遍性。對(duì)于血清Hcy水平與肺癌的關(guān)系研究相對(duì)較少，本研究主要就Hcy在肺癌患者血清中的表達(dá)變化進(jìn)行深入探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2016年1月—2018年5月上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院南院收治的95例肺癌患者的相關(guān)資料，記為肺癌組。其中鱗癌25例，腺癌63例，腺鱗癌1例，小細(xì)胞癌6例；男60例，女35例；年齡48～91歲，平均(70.47±1.07)歲；TNM分期Ⅰ～Ⅲ期27例，TNM分期Ⅳ期68例。同時(shí)收集62例肺部感染患者納入肺部感染組，男40例，女22例；年齡50～90歲，平均年齡(68.81±1.44)歲。選擇同期體檢中心健康體檢者(排除高血壓、心臟病等疾病)62例納入對(duì)照組，男40例，女22例，年齡48～87歲，平均(67.52±1.04)歲。各組間年齡、性別構(gòu)成等一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。肺癌病例均明確病理分型。本研究經(jīng)上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院南院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施。

1.2 方法

Hcy的測(cè)定均以晨起空腹靜脈血3mL分離得到的血清為樣本，進(jìn)行檢測(cè)。肺癌組和肺部感染組均選取未經(jīng)過治療之前檢測(cè)的血清Hcy水平進(jìn)行分析。檢測(cè)儀器為Beckman Coulter AU5800(美國貝克曼庫爾特公司)，試劑為Hcy測(cè)定試劑盒(北京利德曼生物股份有限公司)，Hcy使用酶循環(huán)法檢測(cè)。所有的操作均按照說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 患者臨床資料比較

62例健康體檢者(對(duì)照組)、62例肺部感染者(肺部感染組)和95例肺癌患者(肺癌組)之間Hcy水平相比，肺癌組的血清Hcy水平[(14.67±0.62) μmol/L]高于肺部感染組[(13.01±0.51) μmol/L]和對(duì)照組[(11.47±0.19) μmol/L](均P<0.001)，見表1。

表1 3組患者臨床資料比較

組別對(duì)照組肺部感染組肺癌組n626295男/女40/2240/2260/35年齡/歲67.52±1.0468.81±1.4470.47±1.07Hcy/(μmol·L-1)11.47±0.1913.01±0.5114.67±0.62

2.2 不同分期肺癌組患者Hcy水平比較

95例肺癌患者中TNM分期Ⅳ期肺癌患者的血清Hcy水平[(15.89±0.80) μmol/L]顯著高于TNM分期Ⅰ～Ⅲ期肺癌患者[(11.59±0.50) μmol/L]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.56，P<0.0001)，圖1A。

2.3 不同分組研究對(duì)象Hcy水平變化情況

對(duì)照組和肺癌組之間的血清Hcy水平差異以及對(duì)照組和肺部感染組之間的血清Hcy水平差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0001，P=0.0056<0.05)，見圖1B、圖1C。肺癌組和肺部感染組相比，肺癌組的血清Hcy水平[(14.67±0.62) μmol/L]高于肺部感染組[(13.01±0.51) μmol/L]，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0594>0.05)，圖1D。

圖1 不同分組研究對(duì)象Hcy水平變化情況Fig.1 Changes in Hcy levels in different groups of subjectsA: TNM分期Ⅰ～Ⅲ期肺癌和Ⅳ期肺癌；B: 對(duì)照組和肺癌組；C: 對(duì)照組和和肺部感染組；D: 肺癌組和和肺部感染組

3 討 論

目前對(duì)肺癌的診斷主要通過影像學(xué)檢查、病理學(xué)檢查和血液腫瘤標(biāo)記物。影像學(xué)檢查主要用于晚期肺癌診斷、分期、再分期、療效監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)估，對(duì)于早期的微小病變無法識(shí)別。病理學(xué)檢查作為腫瘤診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于腫瘤的診斷意義重大，但此方法為有創(chuàng)性操作，對(duì)患者傷害較大。血液腫瘤標(biāo)記物作為檢測(cè)腫瘤的一種重要手段，應(yīng)用已十分廣泛。目前常用的用于檢測(cè)肺癌的腫瘤相關(guān)標(biāo)記物主要有神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)、細(xì)胞角蛋白19片段(cytokeratin-19-fragment, CYFRA 21-1)、鱗狀細(xì)胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen, SCCA)、糖類抗原CA125(carbohydrate antigen 125, CA125) 、前胃泌素釋放肽(human pro-gastrin-releasing peptide, ProGRP)，主要用于監(jiān)測(cè)治療反應(yīng)和早期復(fù)發(fā)[8]。各種診斷方法都有其局限性，亟待尋找新的血液腫瘤標(biāo)記物來提高肺癌的診斷水平。

由于代謝的變化癌癥患者的氨基酸表達(dá)往往不同與正常人。Shingyoji等[9]通過對(duì)血漿游離氨基酸(plasma free amino acid, PFAA)譜的多重功能檢測(cè)，結(jié)果顯示血漿氨基酸分析有助于肺癌的早期發(fā)現(xiàn)。Maeda等[10]研究表明，血漿氨基酸分析可以做為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的潛在篩查工具。這些研究結(jié)果均提示氨基酸在肺癌患者體內(nèi)確實(shí)有代謝異常，表明氨基酸代謝過程中的某些物質(zhì)有可能成為肺癌診斷生物標(biāo)記物。

Hcy是甲硫氨酸(亦稱蛋氨酸)代謝過程中產(chǎn)生的一種含硫氨基酸。在代謝過程中部分Hcy通過維生素B12的輔助，葉酸提供甲基，在5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶(5，10-methylene-tetrahydrofolate reductase, MTHFR)的作用下重新合成甲硫氨酸。Hcy于血清中存在氧化型和還原型兩種形式[11]。正常機(jī)體存在少量Hcy，還原型僅占2%。如果輔因子葉酸和維生素B12缺乏，導(dǎo)致重新合成甲硫氨酸這一代謝過程受阻，引起血清中的Hcy升高[12]，影響細(xì)胞增殖，嚴(yán)重時(shí)會(huì)使細(xì)胞異常增殖，出現(xiàn)細(xì)胞癌變的可能性。

近年來，Hcy與腫瘤關(guān)系的臨床研究，國內(nèi)外均有文獻(xiàn)報(bào)道。Tastekin等[13]認(rèn)為患者Hcy的高水平與肺癌有關(guān)。Ozkan等[14]研究指出，肺癌患者血液中的Hcy水平顯著升高，可將Hcy作為一種肺癌的早期診斷標(biāo)記物，但是，Hcy水平的升高與肺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)沒有關(guān)系。夏紅安等[15]發(fā)現(xiàn)Hcy水平可用于非小細(xì)胞肺癌化療療效監(jiān)測(cè)。在基礎(chǔ)研究方面，喬蕊等[16]研究顯示，Hcy達(dá)到一定濃度時(shí)能夠促進(jìn)HepG2細(xì)胞和HT29細(xì)胞的增殖，表明Hcy有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖的潛能。

本研究收集的早期肺癌和中期肺癌患者數(shù)目較少，為了使結(jié)果更加可信，所以在分析血清Hcy水平與肺癌分期的相關(guān)性時(shí)，將早期肺癌和中期肺癌(TNM分期Ⅰ～Ⅲ期)患者合并為一組，與晚期肺癌(TNM分期Ⅳ期)患者進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)肺癌組血清Hcy水平明顯高于正常對(duì)照組，與既往研究均一致，但TNM分期Ⅳ期肺癌患者的Hcy水平明顯高于TNM分期Ⅰ～Ⅲ期患者，這一點(diǎn)與李艷等[17]的研究不太一致。這可能與所收集病例的構(gòu)成比不同有關(guān)。本研究收集的病例Ⅳ期患者占多數(shù)，與既有專家共識(shí)[8]中的信息一致，多數(shù)肺癌患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已到晚期。在臨床工作中有些肺部感染患者肺部的影像學(xué)改變與肺癌很難區(qū)分，所以本研究收集了肺部感染者的外周血清Hcy檢測(cè)結(jié)果與健康體檢者及肺癌患者進(jìn)行分析，以探究血清Hcy水平在肺癌和肺部感染中的鑒別診斷價(jià)值。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)肺癌患者和肺部感染者血清Hcy水平均顯著高于健康體檢者，但是肺癌患者和肺部感染者之間的血清Hcy水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此當(dāng)患者血清Hcy升高，影像學(xué)顯示肺部有陰影，考慮診斷為肺癌時(shí)首先要通過外周血細(xì)胞分析、超敏C反應(yīng)蛋白、降鈣素原等感染指標(biāo)排除肺部感染導(dǎo)致的肺部影像學(xué)改變。

總之，本研究表明血清Hcy水平與肺癌及肺癌的分期有關(guān)，但對(duì)肺癌與肺部感染的鑒別診斷無價(jià)值。由于本研究的樣本量較少，Hcy作為一種新的肺癌血清腫瘤標(biāo)記物，其應(yīng)用價(jià)值還需多中心、大樣本量進(jìn)一步研究證實(shí)。