張府君，馮貞，王?；?，程永杰，王丕明

1.山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西 太原 030031；2.山西省食品藥品檢驗(yàn)所，山西 太原 030006

近年來(lái)，隨著人們安全意識(shí)的不斷提高，藥品中的添加劑的問(wèn)題備受矚目。而含有蛋白質(zhì)、糖類等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的中藥口服液體制劑，因其藥品中的營(yíng)養(yǎng)成分極易引起微生物的生長(zhǎng)和繁殖，防腐劑的加入恰好能有效抑制微生物的生長(zhǎng)與繁殖，從而延長(zhǎng)保存時(shí)間。為了患者用藥的安全性，不僅有必要控制中藥口服液體制劑中防腐劑的使用及用量，還要篩查有無(wú)他類防腐劑的非法添加，對(duì)保障臨床用藥安全具有重要意義。[1]

消栓口服液收載于2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》一部中的成方制劑，由黃芪、當(dāng)歸、赤芍、地龍、川芎、桃仁、紅花等七味中藥組成，具補(bǔ)氣活血通絡(luò)功效，常用于中風(fēng)氣虛血瘀癥[2]。在消栓口服液的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中有加入防腐劑苯甲酸鈉及加入量的描述，但沒(méi)有收載相應(yīng)的檢查方法[3]。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)同時(shí)測(cè)定中藥口服液體制劑中的6種防腐劑，分別為標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定加入的苯甲酸以及其他5種要篩查的他類常見(jiàn)防腐劑，包括山梨酸鉀、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯。

1 儀器、試劑與試藥

1.1 儀器與試劑

Waters Alliance E2695高效液相色譜系統(tǒng)；乙腈為色譜純，乙酸銨為分析純，水為純化水。

1.2 試藥

對(duì)照品：苯甲酸、山梨酸鉀、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯6種對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。苯甲酸對(duì)照品(批號(hào)：100419-201703，99.9%)、山梨酸鉀對(duì)照品(批號(hào)：101075-201602，99.7%)、羥苯甲酯對(duì)照品(批號(hào)：100278-201705)、羥苯乙酯對(duì)照品(批號(hào)：100847-201604，99.9%)、羥苯丙酯對(duì)照品(批號(hào)：100444-201403，99.6%)、對(duì)羥基苯甲酸丁酯對(duì)照品(批號(hào)：110792-200503)。

樣品：31批次消栓口服液均為市售。

陰性樣品：取消栓口服液處方中各藥味，模擬2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》一部消栓口服液項(xiàng)下[制法]，制備，即得。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取苯甲酸對(duì)照品、羥苯甲酯對(duì)照品、羥苯乙酯對(duì)照品、羥苯丙酯對(duì)照品、對(duì)羥基苯甲酸丁酯各10 mg，分別置25 mL量瓶中，加甲醇適量使溶解后，定容，搖勻，備用；另取山梨酸鉀對(duì)照品10 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇適量使溶解后，定容，搖勻，備用。

精密量取上述苯甲酸對(duì)照品溶液10 mL、山梨酸鉀對(duì)照品溶液1 mL及其余4種對(duì)照品溶液各5 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度配制在以上濃度，進(jìn)樣10 μL，峰面積較適中，易于檢出和判斷(見(jiàn)圖1)。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密量取樣品原液1 mL，加水稀釋至10 mL，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照品的制備 按消栓口服液處方比例和制備工藝，取處方中各藥材模擬2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》一部消栓口服液項(xiàng)下的[制法]，自制不含防腐劑的消栓口服液陰性樣品，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(色譜柱規(guī)格為5 μm，4.6 mm×250 mm)；流動(dòng)相：以A為乙腈，B為0.02 mol·L-1乙酸銨溶液，進(jìn)行梯度洗脫[1]，梯度程序0～30 min，流動(dòng)相A為4%～85%，流動(dòng)相B為96%～15%；柱溫35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm，同時(shí)用PDA監(jiān)測(cè)，波長(zhǎng)掃描范圍190～400 nm。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖及光譜圖

2.3 專屬性實(shí)驗(yàn)

陰性供試品溶液的制備：取自制陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備，即得。

結(jié)果：陰性樣品色譜中檢出與苯甲酸對(duì)照品、山梨酸鉀對(duì)照品保留時(shí)間相近的色譜峰，但其紫外光譜不一致(見(jiàn)圖2)。

故本法可用于苯甲酸、山梨酸鉀、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯6種防腐劑的檢查。

2.4 檢出限的確定

采用陽(yáng)性供試品溶液，逐步稀釋后進(jìn)樣，目前較為通行的是目視法來(lái)確認(rèn)，即色譜峰高約為保留時(shí)間附近一段基線波動(dòng)范圍的2～3倍時(shí)，認(rèn)為此時(shí)的進(jìn)樣量為在此方法下該物質(zhì)的最小檢出限。同上述方法逐步稀釋后進(jìn)樣，確認(rèn)檢測(cè)的6種物質(zhì)的檢出限(見(jiàn)表1)。

圖2 陰性供試品色譜圖及光譜圖

對(duì)照品名稱檢出限/μg·mL-1對(duì)照品名稱檢出限/μg·mL-1苯甲酸1.8山梨酸鉀0.43羥苯甲酯0.84羥苯乙酯0.85羥苯丙酯0.91對(duì)羥基苯甲酸丁酯1.0

2.5 樣品篩查

依法對(duì)7個(gè)企業(yè)的31批次樣品進(jìn)行篩查，結(jié)果均未檢出與除苯甲酸以外5種對(duì)照品保留時(shí)間及紫外光譜圖均相一致的非法添加物(見(jiàn)圖3)；31批次樣品中苯甲酸含量結(jié)果，均符合規(guī)定(見(jiàn)表2)?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》2015年版四部中規(guī)定了合劑中根據(jù)需要可加入適宜的附加劑，并且規(guī)定了苯甲酸的用量不得超過(guò)0.3%，(其鉀鹽、鈉鹽的用量分別按酸計(jì))。合劑系指飲片用水或其他溶劑，采用適宜的方法提取制成的口服液體制劑(單劑量灌裝者也可稱“口服液”)[4]。

圖3 供試品溶液色譜圖及光譜圖

所建立的方法陰性無(wú)干擾，專屬性、耐用性及檢出靈敏度均好，可用于消栓口服液中非法添加防腐劑物質(zhì)的檢查[5]。

苯甲酸對(duì)照品進(jìn)樣量為10 μL，含量為88.711 2 μg·mL-1。

表2 31批次樣品中苯甲酸含量

3 討論

本文建立了一種同時(shí)測(cè)定中藥口服液體制劑中6種防腐劑的高效液相色譜法，可為中藥口服液體制劑中防腐劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)在進(jìn)行陰性樣品制備時(shí)，處方中桃仁屬于種子類中藥，因?yàn)橛行┓N子類中藥存放時(shí)間長(zhǎng)也有可能會(huì)分解出苯甲酸成分，但是即使有苯甲酸成分，實(shí)驗(yàn)測(cè)出來(lái)的量也比標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定低很多，可以忽略為沒(méi)有干擾。同時(shí)，要求選購(gòu)陰性藥材時(shí)，注意各藥味的質(zhì)量必須符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。