王歲歲，張汆，戚良號(hào)，楊杰，袁懷波，*

（1.合肥工業(yè)大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，安徽 合肥 230000；2.滁州學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，安徽 滁州 239000；3.淮南湖鑫水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，安徽 淮南 232000）

芡實(shí)是睡蓮科芡屬一年生水生草本植物[1]。芡實(shí)種仁和種皮中經(jīng)分離得到的幾種單體化合物如黃酮[2]、腦苷脂[3]、生育酚聚合物[4]、環(huán)二肽[5]通常被認(rèn)為具有抗氧化[6-7]、調(diào)節(jié)血脂、降低血糖等多種藥理活性[8-9]。

高血脂癥俗稱(chēng)“高血脂”，又稱(chēng)血脂異常[10]。目前臨床治療高血脂癥有他汀類(lèi)、貝特類(lèi)等藥物，因其具有較好的降總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）作用，成為目前臨床應(yīng)用最好的降脂藥物[11]。但他汀類(lèi)藥物本身具有副作用，尤其與貝特類(lèi)藥物聯(lián)用時(shí)，作用更甚[12]。因此，開(kāi)辟新的降脂途徑是當(dāng)前醫(yī)藥研究人員迫切需要解決的熱點(diǎn)問(wèn)題[13]，但至今尚無(wú)突破性進(jìn)展。本研究以芡實(shí)殼及芡實(shí)種仁為基礎(chǔ)材料制備芡實(shí)超微粉，考察芡實(shí)超微粉對(duì)高脂小鼠的血脂調(diào)節(jié)作用。為芡實(shí)超微粉在高血脂癥患者飲食輔助治療應(yīng)用中提供重要的參考價(jià)值，對(duì)控制高血脂癥的發(fā)病率及促進(jìn)芡實(shí)資源的深度開(kāi)發(fā)有著重要意義[14]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

SPF 級(jí)小鼠、普通飼料：常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司；芡實(shí)：淮南湖鑫水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司；高脂飼料：合肥工業(yè)大學(xué)食品與生物工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)室制備；生理鹽水、苦味酸、辛伐他汀片、冰醋酸等：上海生物工程有限公司；總膽固醇、總甘油三脂、高密度、低密度脂蛋白膽固醇、Bradford 法蛋白檢測(cè)、總超氧化物歧化酶、丙二醛、肝酯酶測(cè)定試劑盒：南京建成科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

SL-150 型高速多功能粉碎機(jī)：浙江省永康市松青五金廠；羅氏血糖儀：羅氏生物股份有限公司；752 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海光譜儀器有限公司；SC-3614型低速離心機(jī)：安徽中科佳學(xué)儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 高脂飼料制備及高血脂癥小鼠模型的建立

高脂飼料：15%蔗糖，10%豬油，3%蛋黃，72%普通飼料。

25 ℃恒溫條件下，60 只 ICR 雄鼠（20±5）g，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后將小鼠隨機(jī)分為6 組，每組10 只。隨機(jī)選取一組為正常組，即空白對(duì)照組，喂養(yǎng)普通飼料，余下5 組均給予高脂飼料喂養(yǎng)。

1.3.2 小鼠分組及芡實(shí)超微粉的灌胃

芡實(shí)經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后再用200 目篩過(guò)濾，使其為超微粉形態(tài)。

造模成功后分組，第一組為正常組：普通飼料，每日灌胃等量生理鹽水；第二組為高脂模型對(duì)照組：高脂飼料，不進(jìn)行灌胃；第三組為陽(yáng)性對(duì)照組：高脂飼料，每日灌胃辛伐他丁溶液3.33 mg/（kg·d）；第四、五、六組分別為芡實(shí)超微粉低、中、高劑量組：高脂飼料，分別每日灌胃芡實(shí)超微粉溶液500、1 000、2 000 mg/（kg·d）。灌胃時(shí)間為6 周，飲水均為純凈水[15]。

1.3.3 小鼠體重及空腹血糖的測(cè)定

從適應(yīng)性喂養(yǎng)開(kāi)始，每隔一周對(duì)小鼠稱(chēng)重并記錄。尾靜脈取血測(cè)定小鼠血糖，分3個(gè)階段收集，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后為初始血糖，灌胃3 周后為治療中期血糖，灌胃6 周后為治療后血糖。

1.3.4 小鼠血清和肝組織的采集

灌胃處理6 周后，用鑷子對(duì)眼球進(jìn)行摘除，取血0.8 mL 左右，靜置 30 min，3 000 r/min 離心 15 min，吸取上清液，在-20 ℃中保存。將小鼠脫頸致死，取出小鼠肝臟，稱(chēng)重并記錄數(shù)據(jù)。

1.3.5 小鼠血脂指標(biāo)的測(cè)定

小鼠血清TC、TG、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）的測(cè)定：取小鼠血清樣本，在4 ℃條件下融化，按試劑盒操作步驟進(jìn)行。

1.3.6 小鼠血清及肝組織樣本中相關(guān)酶類(lèi)的測(cè)定

組織勻漿的制備：準(zhǔn)確稱(chēng)取肝組織按重量（g）∶體積（mL）=1∶9 的比例加入生理鹽水，冰水浴條件下，機(jī)械勻漿，制備成10%的勻漿液，2 500 r/min～3 000 r/min離心10 min，取上清。

小鼠血清及肝組織中總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、肝酯酶含量的測(cè)定及小鼠肝組織中蛋白濃度的檢測(cè)：按試劑盒操作步驟，以血清和勻漿為樣本測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠體重的影響

芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠體重的影響見(jiàn)表1。

表1 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠體重的影響（±s，n=10）Table 1 The effect of ultrafine powder on body weight of mice（±s，n=10）

表1 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠體重的影響（±s，n=10）Table 1 The effect of ultrafine powder on body weight of mice（±s，n=10）

注：a 與正常組比較，差異顯著（p＜0.05）；A 與正常組比較，差異極顯著（p＜0.01）；b 與高脂模型比較，差異顯著（p＜0.05）。

體重/g灌胃前 灌胃后正常組 29.85±1.62 43.20±1.51b高脂模型組 29.37±2.46 48.37±1.76a陽(yáng)性對(duì)照組 3.33 30.04±1.94 40.53±0.42ab低劑量組 500 28.32±1.17 39.64±2.79ab中劑量組 1 000 29.37±1.52 38.16±1.73ab高劑量組 2 000 29.61±1.93 36.34±1.41Ab組別 灌胃劑量/[mg/（kg·d）]

由表1可知，灌胃前各組小鼠體重?zé)o顯著性差異（p＞0.05），灌胃6 周后，高脂模型組小鼠體重顯著高于正常組（p＜0.05），陽(yáng)性對(duì)照組和低、中、高劑量組小鼠體重均顯著低于高脂模型組（p＜0.05），且灌胃劑量越高，體重減輕效果越顯著，說(shuō)明芡實(shí)超微粉有降低高脂小鼠體重的作用，并且呈現(xiàn)一定程度的劑量依賴(lài)關(guān)系。

2.2 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響

芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響見(jiàn)表2，肝臟指數(shù)/%=肝臟質(zhì)量/小鼠體重×100。

表2 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響（n=10）Table 2 Effect of superfine powder on liver index in mice（n=10）

由表2所示，高脂模型組小鼠肝臟指數(shù)極顯著高于空白組（p＜0.01），與高脂模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、中、高劑量灌胃組小鼠肝臟指數(shù)顯著降低，說(shuō)明灌胃辛伐他丁起到了一定的保護(hù)高血脂癥小鼠肝組織正常脂肪代謝的作用，灌胃一定劑量的芡實(shí)超微粉也起到了延緩高血脂癥小鼠的肝指數(shù)增高的作用，并且灌胃芡實(shí)超微粉的劑量越高，肝指數(shù)降低越顯著，呈現(xiàn)了一定程度的劑量依賴(lài)關(guān)系。

2.3 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血糖水平的影響

芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血糖的影響見(jiàn)表3。

表3 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血糖的影響（n=10）Table 3 Effect of superfine powder on blood glucose in mice（n=10）

由表3可知，各組小鼠灌胃前的初始血糖水平無(wú)明顯差異（p＞0.05）；灌胃3 周后，高脂模型組小鼠血糖水平極顯著高于空白組（p＜0.01），并且陽(yáng)性對(duì)照組、低、中、高劑量灌胃組小鼠血糖水平也極顯著低于高脂模型組（p＜0.01）；灌胃6 周后，高脂模型組小鼠血糖水平顯著上升且顯著高于其余各組血糖水平，陽(yáng)性對(duì)照組、低、中、高劑量組小鼠血糖水平極顯著低于高脂模型組（p＜0.01）。由此可知，連續(xù)給予小鼠飼喂高脂飼料會(huì)顯著提高小鼠體內(nèi)血糖水平，給高血脂癥小鼠連續(xù)灌胃芡實(shí)超微粉會(huì)顯著降低其體內(nèi)血糖水平，且灌胃劑量越大，血糖降低效果越顯著，呈現(xiàn)了一定的劑量依賴(lài)性。

2.4 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血脂水平的影響

芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清 TC、TG、HDL-C、LDL-C水平的影響見(jiàn)表4。

表4 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平的影響（±s，n=10）Table 4 Effect of superfine powder on levels of serum TC，TG，HDL-C and LDL-C in mice（±s，n=10）

表4 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平的影響（±s，n=10）Table 4 Effect of superfine powder on levels of serum TC，TG，HDL-C and LDL-C in mice（±s，n=10）

注：a 與正常組比較，差異顯著（p＜0.05）；b 與高脂模型比較，差異顯著（p＜0.05）。

組別 TC 含量 TG 含量 HDL-C 含量 LDL-C 含量正常組 4.42±0.35b 1.92±0.84b 5.43±0.32 1.12±0.35b高脂模型組 4.85±0.24a 2.75±0.53a 3.98±0.47a 1.98±0.69a陽(yáng)性對(duì)照組 4.07±0.31b 1.69±0.41b 5.21±0.17b 1.77±0.28b低劑量組 4.33±0.22 2.20±0.79b 4.87±0.28b 1.83±0.71中劑量組 3.75±0.73b 1.87±0.23b 5.18±0.91b 1.76±0.41b高劑量組 3.46±0.57b 1.73±0.45b 5.82±0.34b 1.50±0.18b

由表4可知，正常組小鼠TC、TG 都處于正常水平；模型組小鼠TC、TG 水平顯著高于正常組（p＜0.05），陽(yáng)性對(duì)照組、低、中、高劑量組小鼠 TC、TG 水平顯著低于模型組（p＜0.05）。模型組小鼠HDL-C 含量顯著低于正常組（p＜0.05），陽(yáng)性對(duì)照組、低、中、高劑量組小鼠HDL-C 含量顯著高于模型組。與空白組相比，模型組小鼠體內(nèi) LDL-C 顯著提高（p＜0.05），而中、高劑量組小鼠LDL-C 含量顯著低于模型組。以上表明，連續(xù)給予小鼠高脂飼料會(huì)顯著提高小鼠體內(nèi)血脂水平，辛伐他汀藥物能顯著改善小鼠高血脂癥狀，給予高血脂癥小鼠灌胃一定量的芡實(shí)超微粉會(huì)顯著降低其體內(nèi)血脂水平，且灌胃量越大，效果越明顯，呈現(xiàn)出一定的劑量正相關(guān)性。

2.5 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清及肝臟中總超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的影響

芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清及肝臟中T-SOD 活力的影響見(jiàn)表5。

表5 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清及肝臟中T-SOD活力的影響（±s，n=10）Table 5 Effect of superfine powder on T-SOD activity in serum and liver of mice（±s，n=10）

表5 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清及肝臟中T-SOD活力的影響（±s，n=10）Table 5 Effect of superfine powder on T-SOD activity in serum and liver of mice（±s，n=10）

注：a 與正常組比較，差異顯著（p＜0.05）；b 與高脂模型比較，差異顯著（p＜0.05）。

組別血清/（U/mL）肝臟/（U/mgprot）正常組 238.89±6.34b 101.44±5.27b高脂模型組 219.45±4.17a 83.93±2.62a陽(yáng)性對(duì)照組 232.24±5.87b 98.71±4.64b低劑量組 218.23±8.21 96.18±5.82中劑量組 235.47±4.75b 105.88±4.39b高劑量組 244.72±6.18b 107.91±8.14b

由表5可知，模型組小鼠T-SOD 活力顯著低于正常組（p＜0.05），中、高劑量組小鼠 T-SOD 活力顯著高于模型組（p＜0.05），說(shuō)明芡實(shí)超微粉對(duì)高血脂癥引起的T-SOD 活力下降具有明顯緩解作用。且灌胃芡實(shí)超微粉劑量越高，小鼠T-SOD 活力提升越顯著，以高劑量組最優(yōu)。

2.6 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清及肝臟中丙二醛（MDA）含量的影響

芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清及肝臟中MDA 含量的影響見(jiàn)表6。

表6 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清及肝臟中MDA含量的影響（±s，n=10）Table 6 Effect of superfine powder on MDA content in serum and liver of mice（±s，n=10）

表6 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清及肝臟中MDA含量的影響（±s，n=10）Table 6 Effect of superfine powder on MDA content in serum and liver of mice（±s，n=10）

注：a 與正常組比較，差異顯著（p＜0.05）；b 與高脂模型比較，差異顯著（p＜0.05）。

組別血清/（mmol/mL）肝組織/（mmol/mgprot）正常組 44.15±1.36b 1.17±0.21b高脂模型組 57.73±2.41a 2.83±0.19a陽(yáng)性對(duì)照組 50.18±1.84b 1.49±0.34b低劑量組 55.09±1.72 2.64±0.16中劑量組 53.47±2.08b 2.05±0.12b高劑量組 52.83±1.49b 1.68±0.42b

由表6可知，高脂模型組小鼠MDA 含量顯著高于正常組（p＜0.05），中、高劑量組小鼠 MDA 含量顯著低于高脂模型組（p＜0.05），說(shuō)明芡實(shí)超微粉對(duì)于高血脂癥引起MDA 含量升高具有明顯的緩解作用。且灌胃芡實(shí)超微粉劑量越高，小鼠MDA 含量降低效果，以高劑量組最優(yōu)。

2.7 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清及肝組織中肝酯酶（HL）濃度的影響

芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清及肝組織中肝酯酶（HL）濃度的影響見(jiàn)表7。

表7 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清及肝組織中肝酯酶（HL）濃度的影響（±s，n=10）Table 7 Effect of superfine powder on hepatic esterase（HL）concentration in serum and liver of mice（±s，n=10）

表7 芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠血清及肝組織中肝酯酶（HL）濃度的影響（±s，n=10）Table 7 Effect of superfine powder on hepatic esterase（HL）concentration in serum and liver of mice（±s，n=10）

注：a 與正常組比較，差異顯著（p＜0.05）；b 與高脂模型比較，差異顯著（p＜0.05）；B 與高脂模型組相比，差異極顯著（p＜0.01）。

組別血清/（mmol/mL）肝組織/（mmol/mgprot）正常組 218.41±4.32b 232.01±5.36b高脂模型組 174.54±5.21a 201.32±4.29a陽(yáng)性對(duì)照組 214.54±2.84b 223.34±3.48b低劑量組 195.67±4.61 211.03±3.31中劑量組 202.48±5.37b 230.95±5.16b高劑量組 218.39±4.69B 231.86±5.11B

由表7可知，模型組肝酯酶濃度顯著低于正常組（p＜0.05），陽(yáng)性對(duì)照組、中劑量組小鼠肝酯酶含量顯著高于模型組（p＜0.05），高劑量組小鼠肝酯酶含量極顯著高于模型組（p＜0.01）。說(shuō)明一定劑量的芡實(shí)超微粉能改善高血脂癥小鼠肝酯酶衰減的癥狀，且劑量越高，效果越顯著。

3 結(jié)論

經(jīng)過(guò)6 周的芡實(shí)超微粉灌胃處理后，高血脂癥小鼠的血清總膽固醇（T-CHO）、總甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量顯著降低，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量顯著上升，說(shuō)明芡實(shí)超微粉對(duì)改善高血脂小鼠的高血脂癥方面起到了很大作用。

經(jīng)過(guò)6 周灌胃后，高血脂癥小鼠的血清及肝組織中總超氧化物歧化酶（T-SOD）、肝酯酶（HL）含量顯著上升，丙二醛（MDA）含量顯著降低，說(shuō)明芡實(shí)超微粉能夠降低自由基數(shù)量，具有一定的抗氧化能力，且隨著灌胃芡實(shí)超微粉劑量的升高效果越顯著。

經(jīng)過(guò)六周的芡實(shí)超微粉灌胃后，高血脂癥小鼠的體重、肝臟指數(shù)及空腹血糖水平都有所降低，并且與芡實(shí)超微粉灌胃劑量成正比。小鼠肝組織的病變情況也隨灌胃芡實(shí)超微粉劑量的升高而減輕，說(shuō)明芡實(shí)超微粉可以有效改善高血脂小鼠的肝損傷。

綜上所述，芡實(shí)超微粉能夠改善高血脂癥小鼠的癥狀，能夠通過(guò)不同的途徑協(xié)同作用，對(duì)高血脂癥小鼠降低血糖、緩解肝損傷等都有著積極作用，具有顯著的降血脂療效，并呈現(xiàn)一定的灌胃劑量依賴(lài)性。

試驗(yàn)初步研究了芡實(shí)超微粉對(duì)小鼠降血脂的功效，發(fā)現(xiàn)芡實(shí)作為一種藥食兩用的植物具有良好的降血脂功能，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)芡實(shí)超微粉的研究還不夠深入，此領(lǐng)域具有很大的研究前景。在未來(lái)的研究中，我們將進(jìn)一步考察芡實(shí)超微粉的體內(nèi)降血脂機(jī)制及預(yù)防脂肪炎癥的相關(guān)機(jī)制。