張秀義， 許浩然， 景衛(wèi)革， 孫亞東， 孫秀娟， 何士杰

承德市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科(河北承德 067000)

細(xì)胞周期調(diào)控基因突變導(dǎo)致細(xì)胞正常增殖調(diào)節(jié)失控及抗凋亡功能異?？哼M是發(fā)生腫瘤的重要原因，細(xì)胞自噬(autophagy)是與細(xì)胞凋亡相似的生物學(xué)過程，是細(xì)胞內(nèi)折疊錯誤、老化的蛋白質(zhì)及受損、失去作用的細(xì)胞器在溶酶體內(nèi)降解的過程[1]?，F(xiàn)代研究顯示自噬作為一種細(xì)胞內(nèi)大分子物質(zhì)的降解通路，對細(xì)胞生存起多種作用：(1)細(xì)胞內(nèi)異常的細(xì)胞器和蛋白質(zhì)通過自噬過程降解，防止有毒或致癌因子引發(fā)細(xì)胞癌變。(2)細(xì)胞癌變初期，自噬可降解細(xì)胞內(nèi)大分子物質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞提供營養(yǎng)物質(zhì)，促進其生長及轉(zhuǎn)移。(3)腫瘤過度活躍時，又會發(fā)生自噬性凋亡，抑制腫瘤生長。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin，PI3K/Akt/mTOR)信號通路是重要的自噬信號調(diào)節(jié)通路，磷酸化的mTOR(p-mTOR)是通路活化的生物學(xué)標(biāo)志[2]。自噬相關(guān)基因Beclin1是自噬過程中最重要的正調(diào)節(jié)因子，主要誘導(dǎo)自噬的啟動[3]。微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3)是唯一定位于自噬泡內(nèi)膜的自噬相關(guān)蛋白，主要促進自噬小體的成熟，其表達水平可反映細(xì)胞自噬的強弱。既往研究顯示p-mTOR、Beclin1及LC3通過調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬活性，在多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。肺癌是目前中國病死率最高的惡性腫瘤，非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)占肺癌的絕大多數(shù)，探討p-mTOR、Beclin1及LC3蛋白在NSCLC中表達及相關(guān)性的研究較少，本研究應(yīng)用免疫組化方法測定三者在NSCLC中的表達水平，分析其表達與臨床病理特征是否存在相關(guān)性，探討細(xì)胞自噬在NSCLC發(fā)病中的作用機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集承德市中心醫(yī)院于2017年3月到2018年3月行外科手術(shù)治療的NSCLC病例96例(患者術(shù)前均未進行化療、放療及其他抗腫瘤治療，所有病例資料均真實、完整)，其中女34例，男62例，年齡48～75歲，平均(61.4±8.34)歲。手術(shù)切除標(biāo)本證實有鱗狀細(xì)胞癌病例50例，腺癌病例46例；其中低中分化癌病例58例，高分化癌病例38例；無周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例56例，存在周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例40例。NSCLC多發(fā)生于支氣管黏膜上皮及肺泡上皮，本實驗設(shè)正常支氣管和肺泡雙正常對照組，標(biāo)本取自肺癌同側(cè)遠(yuǎn)端距離腫塊3～5 cm的支氣管及肺泡正常組織，其中支氣管黏膜標(biāo)本60例，肺泡標(biāo)本64例。本研究獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，病理切片經(jīng)病理科醫(yī)師診斷證實。

1.2 主要試劑 兔抗人p-mTOR、Beclin1及LC3單克隆抗體單克隆抗體購自美國Cell Signaling Technology公司，免疫組化試劑盒及DAB試劑盒購自丹麥 Dako公司。

1.3 方法

1.3.1 常規(guī)組織學(xué)處理 組織標(biāo)本經(jīng)甲醛溶液浸泡、固定，石蠟包埋、切片，HE染色。根據(jù)2004 版WHO肺癌組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)判定腫瘤組織學(xué)分類，根據(jù)患者臨床資料確定臨床病理特征。

1.3.2 免疫組織化學(xué)檢測 采用SP免疫組織化學(xué)法染色，DAB顯色，應(yīng)用已知p-mTOR、Beclin1及LC3蛋白為陽性的組織切片作陽性對照，采用PBS液代替一抗為陰性對照。

1.3.3 結(jié)果判定 采用光學(xué)顯微鏡雙盲法觀察染色后切片，p-mTOR、Beclin1及LC3蛋白均為細(xì)胞質(zhì)染色，每張切片隨機選取5個400倍視野，其中陽性結(jié)果判定以細(xì)胞著色強度及著色細(xì)胞數(shù)占觀察細(xì)胞總數(shù)百分比綜合判定，百分比取平均值：<5%判定為0分，6%～25%判定為1分，26%～50%判定為2分，≥51%判定為3分。著色強度：不著色判定為0分，淺黃色判定為1分，棕黃色為2分，黃褐色判定為3分。上述兩項得分相加，≤3分判定為陰性結(jié)果，>3分判定為陽性結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 Beclin1蛋白表達水平組間比較 Beclin1蛋白在NSCLC中陽性表達率為31.25%(30/96)，見圖1～4，肺泡及支氣管表達陽性率分別為75.0%(48/64)、66.67%(40/60)。Beclin1蛋白在NSCLC中表達陽性率顯著低于肺泡及支氣管中表達陽性率(2=29.418、18.723，P<0.01)。Beclin1蛋白在肺鱗癌中陽性表達率為32.0%(16/50)，顯著低于肺泡及支氣管中表達陽性率(2=21.079、13.115，P<0.01)。Beclin1蛋白在肺腺癌中的陽性表達率為30.43%(14/46)，顯著低于肺泡及支氣管中表達陽性率(2=21.612、13.677，P<0.01)。Beclin1蛋白在肺泡及支氣管中表達陽性率之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(2=1.044，P=0.307)。

圖1 肺鱗癌Beclin1蛋白陽性(HE, ×100)

圖2 肺鱗癌Beclin1蛋白陽性(HE, ×400)

2.2 p-mTOR蛋白表達水平組間比較 p-mTOR蛋白在NSCLC中陽性表達率為66.67%(64/96)，見圖5～8。肺泡及支氣管黏膜陽性表達率分別為10.94%(7/64)、18.33%(11/60)，p-mTOR蛋白在NSCLC表達陽性率顯著高于肺泡及支氣管中表達陽性率(2=48.316、34.554，P<0.01)。p-mTOR蛋白在肺鱗癌中表達陽性率為72.0%(36/50)，顯著高于肺泡及支氣管中表達陽性率(2=44.553、32.099，P<0.01)。p-mTOR蛋白在肺腺癌中陽性表達率為60.87%(28/46)，顯著高于肺泡及支氣管中表達陽性率(2=30.758、20.258，P<0.01)。p-mTOR蛋白在肺泡及支氣管中表達陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(2=1.365，P=0.243)。

圖3 肺腺癌Beclin1蛋白陽性(HE, ×100)

圖4 肺腺癌Beclin1蛋白陽性(HE, ×400)

圖5 肺鱗癌p-mTOR蛋白陽性(HE, ×100)

圖6 肺鱗癌p-mTOR蛋白陽性(HE, ×400)

圖7 肺腺癌p-mTOR蛋白陽性(HE, ×100)

圖8 肺腺癌p-mTOR蛋白陽性(HE, ×400)

2.3 LC3蛋白表達水平組間比較 LC3蛋白在NSCLC中表達陽性率為26.04%(25/96)，見圖9～12，肺泡及支氣管黏膜表達陽性率分別為81.25%(52/64)、80.0%(48/60)，LC3蛋白在NSCLC表達水平顯著低于肺泡及支氣管中表達陽性率(2=46.883、43.178，P<0.01)。LC3蛋白在肺鱗癌中表達陽性率為26.0%(13/50)，顯著高于肺泡及支氣管中表達陽性率(2=34.963、32.194，P<0.01)。LC3蛋白在肺腺癌中表達陽性率為26.09%(12/46)，顯著高于肺泡及支氣管中表達陽性率(2=33.473、30.81，P<0.01)。LC3蛋白在肺泡及支氣管中表達陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(2=0.031，P=0.86)。

圖9 肺鱗癌LC3蛋白陽性(HE， ×100)

2.4 NSCLC中Beclin1蛋白表達水平與腫瘤最大徑、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性 NSCLC中Beclin1蛋白表達水平與腫瘤最大徑、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，隨著腫瘤體積增大、分化程度下降及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Beclin1蛋白表達水平呈現(xiàn)下降趨勢，見表1。

圖10 肺鱗癌LC3蛋白陽性(HE, ×400)

圖11 肺腺癌LC3蛋白陽性(HE, ×100)

圖12 肺腺癌LC3蛋白陽性(HE, ×400)

2.5 p-mTOR蛋白表達水平與腫瘤分化程度及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性 p-mTOR蛋白表達水平與腫瘤分化程度及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，隨著腫瘤分化程度下降及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，p-mTOR蛋白表達水平呈升高趨勢，見表2。

2.6 LC3蛋白表達水平與腫瘤分化程度及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性 NSCLC中LC3蛋白表達水平與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，隨著腫瘤分化下降及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，LC3蛋白表達水平呈現(xiàn)下降趨勢，見表3。

2.7 NSCLC組織中Beclin1、LC3、p-mTOR蛋白表達水平的相關(guān)性 NSCLC組織中Beclin1與LC3蛋白表達水平呈正相關(guān)，見表4。p-mTOR與Beclin1表達水平呈負(fù)相關(guān)，見表5。p-mTOR與LC3表達水平呈負(fù)相關(guān)，見表6。

3 討論

細(xì)胞自噬是細(xì)胞器和大分子物質(zhì)降解的細(xì)胞程序性、非凋亡性死亡，通過降解自然衰老及因環(huán)境壓力受損的細(xì)胞器及長壽命、合成或折疊錯誤的蛋白質(zhì)，分解為小分子成分，實現(xiàn)受損細(xì)胞器自我修復(fù)、蛋白質(zhì)循環(huán)利用、加強蛋白質(zhì)檢驗點的檢查糾錯作用，穩(wěn)定基因組、保持細(xì)胞自穩(wěn)狀態(tài)。正常組織中自噬活性長期受到抑制，細(xì)胞自穩(wěn)及糾錯功能無法有效發(fā)揮，有害因素在細(xì)胞內(nèi)持續(xù)積累，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，因此保持基礎(chǔ)、適當(dāng)水平的自噬活性對生物體極其重要。在多種人類惡性腫瘤如乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)自噬正性調(diào)節(jié)因子缺失，而在腫瘤細(xì)胞中，大分子物質(zhì)通過自噬降解為小分子物質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞提供營養(yǎng)物質(zhì)，促進其生長，一旦出現(xiàn)自噬受抑，可觀察到由環(huán)境壓力導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡增多。可見自噬在對腫瘤起雙重作用，在正常組織中是對抗細(xì)胞癌變的防御機制，起抑癌作用，而對已經(jīng)惡變的組織，能使腫瘤細(xì)胞耐受嚴(yán)苛環(huán)境，起促癌作用。

表1 NSCLC中Beclin1表達水平與臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

表2 NSCLC中p-mTOR表達水平與臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

表3 NSCLC中LC3表達水平與臨床病理特征的關(guān)系例(%)

臨床病理資料例數(shù)LC3蛋白陽性表達2值P值性別0.0050.943 男6216(25.81) 女349(26.47)年齡0.8850.347 ≤60歲5011(22.00) >60歲4614(30.43)腫瘤最大徑0.4630.496 ≤3 cm4410(22.73) >3 cm5215(28.85)分化程度11.4140.001 低中分化588(13.79) 高分化3817(44.74)組織學(xué)類型00.992 鱗狀細(xì)胞癌5013(26.00) 腺癌4612(26.09)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9.1620.002 無5621(37.50) 有404(10.00)

表4 肺癌組Beclin1及LC3表達相關(guān)性 例

表5 肺癌組Beclin1及p-mTOR表達相關(guān)性 例

表6 肺癌組LC3及p-mTOR表達相關(guān)性 例

LC3位于多種細(xì)胞信號傳導(dǎo)調(diào)節(jié)通路的中心位置，是唯一定位于自噬泡內(nèi)膜的自噬調(diào)節(jié)蛋白。當(dāng)細(xì)胞自噬啟動后，LC3前體(ProLC3)首先加工成LC3-Ⅰ，使其羧基末端的甘氨酸殘基暴露出來，并溶于細(xì)胞胞漿內(nèi)，然后與自噬泡膜表面的磷脂酰乙醇胺(PE)結(jié)合生成LC3-Ⅱ。當(dāng)細(xì)胞自噬過程進行到自噬泡即將閉合時，只有與PE結(jié)合狀態(tài)的LC3-Ⅱ定位于自噬泡膜上，并發(fā)揮調(diào)節(jié)功能，故細(xì)胞內(nèi)LC3-Ⅱ蛋白表達水平與自噬泡數(shù)量呈正相關(guān)，能直接反映自噬水平高低[4]，本實驗中所測定為LC3-Ⅱ水平。有研究表明，許多惡性腫瘤(胃癌、結(jié)直腸癌及宮頸癌)組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)LC3蛋白的異常表達[5-7]。

本實驗結(jié)果顯示NSCLC細(xì)胞中LC3的表達水平明顯低于癌旁組織，提示其mRNA 轉(zhuǎn)錄及其蛋白表達在NSCLC的表達水平腫瘤組織較正常組織降低，提示在NSCLC中自噬活性水平顯著下調(diào)，與卵巢癌、子宮頸癌、甲狀腺乳頭狀癌、胰腺癌、肝癌的相關(guān)研究結(jié)果一致[8-11]。

Beclin1基因是哺乳動物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的唯一的特異性自噬基因，其編碼蛋白與磷脂酰肌醇3激酶家族Ⅲ形成自噬體，介導(dǎo)其他自噬蛋白定位于吞噬泡，和它的上下游信號調(diào)節(jié)蛋白組成細(xì)自噬控制通路，在調(diào)節(jié)自噬活性、激活程序性細(xì)胞死亡過程中扮演重要角色，是重要的抑癌蛋白。研究證實Beclin1基因缺失及蛋白表達減少與腫瘤發(fā)生顯著相關(guān)，小鼠細(xì)胞Beclin1等位基因被敲除后，惡性病變概率明顯增加[12]，Beclin1+/-突變小鼠較野生型小鼠更容易發(fā)生肺癌、肝癌和淋巴癌[13]。人類多種惡性腫瘤存在Beclin1基因失表達，卵巢癌突變率最高達75%，乳腺癌突變率也高于50%，乳腺導(dǎo)管癌、胰腺癌及宮頸癌中編碼Beclin1蛋白的mRNA明顯減少，相應(yīng)蛋白表達水平也顯著降低[14]，乳腺癌細(xì)胞中穩(wěn)定超表達Beclin1可降低癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移能力[15]，應(yīng)用基因技術(shù)抑制Beclin1基因表達可導(dǎo)致舌鱗癌細(xì)胞的自噬水平下降，腫瘤生長加速。也有研究發(fā)現(xiàn)Beclin1在原發(fā)性肝癌中的表達水平明顯升高[16-17]，學(xué)者證實結(jié)直腸癌和胃癌組織中存在Beclin1過表達，而幾乎沒有或很少在正常胃及結(jié)直腸組織中表達[18]。不同部位腫瘤組織中表達水平存在明顯差異可能與Beclin對細(xì)胞自噬過程調(diào)整的雙重性有關(guān)。

本研究顯示Beclin1蛋白在NSCLC中表達顯著下降，提示其直接增強細(xì)胞自噬活性，是最重要的正向調(diào)控基因[19-20]，其基因雜合缺失及蛋白表達減少是正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的重要原因之一。既往實驗證實前列腺癌、乳腺癌及卵巢癌中均存在Beclin1單等位基因缺失突變[21-22]，本實驗結(jié)果與上述研究結(jié)果相一致，Beclin1蛋白在正常肺泡及正常支氣管中表達量高于肺癌標(biāo)本，而在肺泡和正常支氣管間表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明Beclin1在NSCLC中發(fā)揮抑癌作用，提示自噬活性在NSCLC中明顯降低，驗證了在NSCLC中，自噬體形成減少，自噬發(fā)生強度減弱。由于腫瘤細(xì)胞自噬功能下降、凋亡不足，導(dǎo)致異常細(xì)胞繼續(xù)存貨，異常細(xì)胞持續(xù)增加，最終出現(xiàn)腫瘤進展。

mTOR基因定位于人1號染色體短臂(1p36.3)。mTOR信號通路處于細(xì)胞生發(fā)、成長、蛋白質(zhì)合成及細(xì)胞遷移等信號調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的重要位置，參與核糖體合成、細(xì)胞程序性死亡、蛋白質(zhì)翻譯、基因轉(zhuǎn)錄起始及調(diào)控等重要細(xì)胞功能，能抑制細(xì)胞的凋亡、加快細(xì)胞周期的轉(zhuǎn)化、促進腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等。多種惡性腫瘤的發(fā)生均與mTOR信號通路的過度活化有關(guān)。研究顯示在前列腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌和胰腺癌中都可以檢測到mTOR的活化及過表達[23-26]。mTOR的磷酸化狀態(tài)(p-mTOR)被認(rèn)為是激活的mTOR, p-mTOR水平的高低能更敏感地反映mTOR通路的活化狀態(tài)。研究顯示p-mTOR在正常組織細(xì)胞中呈低表達，在大多數(shù)惡性腫瘤中呈異常的高表達，異常表達的p-mTOR顯著促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，且與腫瘤的臨床病理特征具有一定的相關(guān)性[27]。

本研究結(jié)果顯示，p-mTOR在肺癌中呈現(xiàn)異常高表達，而在正常肺泡及支氣管中低水平表達或不表達，提示在NSCLC中存在p-mTOR信號通路過度激活。分別檢測鱗癌及腺癌組織中兩種蛋白表達水平，均顯著高于對照組，提示p-mTOR在鱗癌和腺癌發(fā)病過程中存在相似的促癌機制。

本研究結(jié)果顯示LC3和Beclin1蛋白均在腫瘤組織分化尚可及尚未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時的表達水平較高，提示二者在腫瘤早期表達活躍，仍發(fā)揮一定的促進自噬作用，以抑制腫瘤進展，其表達水平隨腫瘤體積增大、分化惡化而下降，考慮持續(xù)基因低表達及蛋白缺失使腫瘤細(xì)胞自噬功能下降、凋亡不足，導(dǎo)致本應(yīng)該通過凋亡或自噬性死亡的細(xì)胞生長呈現(xiàn)無節(jié)制、不受控狀態(tài)，異常細(xì)胞持續(xù)累積，最終導(dǎo)致癌變。LC3和Beclin1在出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC病例中呈現(xiàn)明顯低表達，考慮肺癌局部浸潤及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與其低水平表達關(guān)系密切，提示其完全失活多發(fā)生在腫瘤晚期，逐漸喪失其抑癌功能，更具侵襲性和轉(zhuǎn)移能力，因而預(yù)后較差，與Thorburn等在NSCLC的研究結(jié)果一致[28]，進一步說明了LC3和Beclin1作為抑癌基因抑制肺癌的發(fā)生及發(fā)展，其低表達顯著增強肺癌細(xì)胞的侵襲能力，是NSCLC發(fā)展過程的重要晚期事件之一，其表達水平共同降低可作為預(yù)測NSCLC患者不良預(yù)后的危險因素。

研究證實p-mTOR在低分化胃癌表達水平明顯高于高分化胃癌[29]，朱倫等[30]證實在食管鱗癌中p-mTOR表達率隨癌組織分化程度升高而降低。本研究發(fā)現(xiàn)p-mTOR表達水平與腫瘤分化程度顯著相關(guān)，癌組織分化越好，p-mTOR表達水平越低，與現(xiàn)有研究結(jié)果相一致，提示p-mTOR正性調(diào)控腫瘤相關(guān)蛋白質(zhì)合成，與肺癌細(xì)胞增殖及惡性傾向密切相關(guān)。本研究證實p-mTOR表達水平越高，出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移概率越大，腫瘤臨床分期越靠后，預(yù)后越差，對判斷預(yù)后有重要意義。本研究顯示p-mTOR表達水平與NSCLC患者年齡、性別、組織學(xué)類型和腫瘤最大徑等均無相關(guān)性。

本研究發(fā)現(xiàn)在NSCLC中Beclin1和LC3蛋白表達正性相關(guān)，推測兩者作為細(xì)胞自噬調(diào)節(jié)通路的上下游靶點，在肺癌發(fā)生、浸潤及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮協(xié)同抑癌的作用，其同步低水平表達導(dǎo)致細(xì)胞自噬能力降低、內(nèi)環(huán)境自穩(wěn)能力障礙。腫瘤形成以后，Beclin1作為抑癌基因激活細(xì)胞自噬，LC3加快自噬小體成熟速度，二者共同促進持續(xù)、高水平激活的自噬活性導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生程序性死亡，從而產(chǎn)生抑癌作用；腫瘤細(xì)胞增殖失控導(dǎo)致其長期處于缺血、缺氧狀態(tài)，細(xì)胞內(nèi)有毒有害物質(zhì)大量堆積刺激腫瘤細(xì)胞的自噬活性持續(xù)升高，最終導(dǎo)致其發(fā)生自噬性細(xì)胞死亡。p-mTOR蛋白表達分別與Beclin1和LC3蛋白表達負(fù)性相關(guān)，p-mTOR在細(xì)胞自噬過程中具有門控作用，其活性是自噬體形成和成熟的關(guān)鍵。它在腫瘤細(xì)胞中通常被激活，是細(xì)胞自噬的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，細(xì)胞自噬的許多信號傳導(dǎo)通路都要經(jīng)過mTOR通路，故p-mTOR是細(xì)胞自噬最主要的抑制性因子。腫瘤形成以后， Beclin1、LC3的高表達促進自噬發(fā)生，mTOR陰性者對自噬的抑制作用減弱，二者所誘導(dǎo)的持續(xù)激活的自噬導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生自噬性細(xì)胞死亡，從而產(chǎn)生腫瘤抑制作用。在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中，mTOR、Beclin1可能通過不同的信號通路各自發(fā)揮其自噬調(diào)控作用。Beclin1基因通過結(jié)合Ⅲ型PI3K，促進自噬的發(fā)生，而mTOR受其上游的Ⅰ型PI3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控，抑制自噬活性，Beclin1過表達促進自噬的發(fā)生，mTOR被激活，抑制自噬活性，并且Beclin1過表達產(chǎn)生的自噬促進作用遠(yuǎn)大于mTOR過表達產(chǎn)生的自噬抑制作用。

自噬現(xiàn)象因細(xì)胞周圍環(huán)境不同、疾病發(fā)展的不同階段及給予不同的治療干預(yù)措施，會對細(xì)胞會產(chǎn)生不同影響：細(xì)胞自噬可降低DNA突變概率、促進細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤生成；在癌前病變期，自噬受到抑制，細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)無法維持，基因組錯誤率增加，致癌突變累積，正常細(xì)胞出現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化；腫瘤進展期對營養(yǎng)物質(zhì)需求增加，通過自噬彌補營養(yǎng)不足，保護癌細(xì)胞免受化療藥物的作用并延長腫瘤細(xì)胞生存時間，幫助其度過應(yīng)激狀況，使腫瘤細(xì)胞在惡劣環(huán)境中生存和發(fā)展。深入研究p-mTOR、Beclin1及LC3在肺癌演變過程中的作用機制，為NSCLC早期診斷及預(yù)后評價提供理論基礎(chǔ)，探索通過采用蛋白抑制劑靶向干預(yù)自噬，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬死亡，防止肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，為肺癌的早期預(yù)測及個性化治療提供新思路。