張夢,馬冬,袁騰,樊少蓓,郭穎,劉佳,李鷗
近年來宮頸癌的發(fā)病趨于年輕化,放化療及靶向藥物治療預(yù)后仍有約30%的患者出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移[1]。由于宮頸癌的發(fā)病機(jī)制不明確,因此宮頸癌的個體化治療仍難以實現(xiàn)。近年有研究發(fā)現(xiàn)非編碼微小RNA(MicroRNA, miRNA)與宮頸癌細(xì)胞凋亡、增殖、侵襲和血管生成等生物學(xué)過程密切相關(guān),被認(rèn)為是宮頸癌診斷、治療和預(yù)后評估的新靶點(diǎn)[2]。miR-135a-5p參與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[3-5],但其在宮頸癌中的研究未見報道。
GATA結(jié)合蛋白(GATA)3是GATA轉(zhuǎn)錄因子家族(GATA1~6)中的一員,它們以高親和力結(jié)合于共同序列(A/T)GATA(A/G),共有一個類固醇激素受體超家族的C4鋅指結(jié)構(gòu)DNA結(jié)合序列,定位于染色體10p15。生物信息學(xué)分析顯示miR-135a-5p與GATA3 3’非翻譯區(qū)(UTR)有結(jié)合位點(diǎn),提示miR-135a-5p可能通過靶向調(diào)節(jié)GATA3的轉(zhuǎn)錄活性而發(fā)揮作用。
信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)3是STAT家族中的一員,其在許多細(xì)胞進(jìn)程包括細(xì)胞生長、凋亡及癌變中起到關(guān)鍵作用。最新研究報道GATA3在某些輔助因子的協(xié)同作用下直接作用于STAT3的啟動子區(qū)從而抑制其轉(zhuǎn)錄活性[6]。因此推測miR-135a-5p、GATA3及STAT3三者之間可能通過某種作用機(jī)制共同參與了宮頸癌的發(fā)生及發(fā)展。本研究旨在檢測分析不同病理類型宮頸組織及細(xì)胞系中miR-135a-5p、GATA3及STAT3的表達(dá)變化及相互關(guān)系,以期為宮頸癌的靶向治療提供實驗依據(jù)。
選取2014年9月—2017年9月唐山市工人醫(yī)院收治的155例宮頸手術(shù)標(biāo)本,包括宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN組)81例,其中CINⅠ組39例,平均年齡為(44.5±3.1)歲;CINⅡ~Ⅲ組42例,年齡(43.7±6.2)歲;宮頸鱗癌(cervical squamous cell carcinoma, CSCC)37例為宮頸癌組(CSCC組),年齡(45.3±4.2)歲;選取同期因良性子宮疾病行全子宮切除術(shù)的患者37例為正常對照組,年齡(46.7±2.6)歲。四組患者年齡比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.168, P>0.706)。CIN組及CSCC組納入標(biāo)準(zhǔn):(1)臨床資料完整;(2)病理明確診斷為CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ或?qū)m頸鱗癌;(3)術(shù)前未接受過放、化療。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)術(shù)前3月內(nèi)曾行宮頸治療,如陰道用藥、激光治療等;(2)患者為妊娠狀態(tài);(3)同時合并其他婦科惡性腫瘤,如子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌等;(4)同時合并其他臟器腫瘤,如腸道、乳腺腫瘤等。正常對照組納入標(biāo)準(zhǔn):(1)因子宮良性疾病行全子宮切除術(shù)者;(2)宮頸薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查未見非典型鱗狀細(xì)胞或癌細(xì)胞。排除標(biāo)準(zhǔn)與CIN組及CSCC組相同。所有標(biāo)本均經(jīng)本院病理科主任醫(yī)師證實,且取材前均未行放、化療或免疫治療。標(biāo)本收集后于本院中心實驗室-80℃冰箱保存。CSCC組(37例)患者按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2009年的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期:Ⅰ期27例,Ⅱa期10例;病理分級按2003年WHO標(biāo)準(zhǔn)分為:高分化26例,中低分化11例。本研究經(jīng)唐山工人醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號:15070),所有患者均知情同意。
1.2.1 體外細(xì)胞培養(yǎng) 正常人宮頸上皮細(xì)胞(HcerEpic)和人宮頸癌細(xì)胞株HeLa、SiHa細(xì)胞均由河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院腫瘤研究所饋贈,分別以含10%胎牛血清RPMI1640培養(yǎng)基、5%CO2、37℃恒溫培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng),細(xì)胞密度為4×104/L,取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實驗。HEK-293A細(xì)胞由河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院腫瘤研究所饋贈,高糖伯克改良伊格爾培養(yǎng)基+10%胎牛血清,5%CO2、37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
1.2.2 主要試劑 TRIzol試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、Real-time PCR反應(yīng)試劑盒及Lipofectamine 2000試劑盒均購自美國Invitrogen公司;PCR引物由北京賽百盛基因技術(shù)有限公司合成;鼠抗人GATA3單克隆抗體、鼠抗人STAT3單克隆抗體購自美國Santa Cruz公司,兔抗鼠IgG抗體及鼠抗人β-肌動蛋白抗體購自武漢谷歌生物技術(shù)有限公司;Dualluciferase Assay System購自美國Promega公司。
1.2.3 實時定量RT-PCR檢測不同宮頸組織及宮頸癌細(xì)胞系中miR-135a-5p、GATA3和STAT3 mRNA的表達(dá)水平[7-9]將液氮保存的宮頸組織按照TRIzol試劑盒說明書提取總RNA,以RNA為模板,采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。miR-135a-5p莖環(huán)結(jié)構(gòu):5’-GCCTATGGCTTTTTATTCCTATGT-3’。反轉(zhuǎn)錄條件:16℃ 30 min,42℃ 30 min,75℃ 15 min。反轉(zhuǎn)錄結(jié)束后進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系按試劑盒說明配制。具體引物序列:miR-135a-5p-F:5’-TTGGTCTTGTTTCCCGGTCC-3’;miR-135a-5p-R:5’-TCACAGCTCCACAGGCTAAC-3’;GATA3-F:5’-AAGGCATCCAGACCAGAAACCG-3’;GATA3-R:5’-AGCATCGAGCAGGGCTCTAACC-3’;STAT3-F:5’-AAGAGGCGGCAACAGATT-3’;STAT3-R:5’-CGGTCTTGATGCCGAGGG-3;U6-F:5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’;U6-R:5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’;GAPDH-F:5’-GAAAGCCTGCCGGTGACTAA-3’;GAPDH-R:5’-AGGAAAAGCATCACCCGGAG-3’。PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件為:95℃ 2 min,95℃ 15 s,72℃ 35 s共35個循環(huán),記錄循環(huán)閾值(Ct),采用2-ΔΔCt法計算miR-135a-5p、GATA3和STAT3 mRNA的相對表達(dá)量。每組實驗重復(fù)3次。miR-135a-5p以U6為內(nèi)參基因;GATA3和STAT3 mRNA以GAPDH為內(nèi)參基因。
1.2.4 免疫組織化學(xué)SP法分析不同宮頸組織中GATA3和STAT3的表達(dá)水平 用4%多聚甲醛固定四組宮頸組織24 h,常規(guī)石蠟包埋,4 μm厚切片,將切片放置在PCI系列正電荷處理過的黏附載玻片上。樣本放置65℃恒溫烤箱內(nèi)干燥處理3 h。經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇洗滌水化,pH=6的枸櫞酸鹽高壓修復(fù)之后,用3%、pH值為7.2~7.4的過氧化氫甲醇溶液滅活內(nèi)源性過氧化物酶10 min,再分別用山羊血清和兔血清封閉非特異性抗原,加入其對應(yīng)一抗(鼠抗人GATA3抗體,1:50稀釋;鼠抗人STAT3,1:100稀釋),4℃孵育過夜后,再加入各自的二抗,經(jīng)二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色,蘇木精對比染色,梯度乙醇及二甲苯脫水,中性樹膠封片。正置尼康顯微鏡下觀察、拍照(最大倍數(shù)×400)。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):以細(xì)胞核出現(xiàn)棕色染色者為陽性細(xì)胞。高倍鏡(×400)下隨機(jī)選取5個不同視野,依照陽性細(xì)胞所占百分比及染色強(qiáng)度進(jìn)行評分。陽性細(xì)胞所占百分比評分:<5%為0分,5%~25%為1分,≥25%~50%為2分,≥50%~80%為3分,≥80%為4分;染色強(qiáng)度評分:無著色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分,以兩種評分的5個視野平均分相乘作為該標(biāo)本的最終得分;最終得分0分為陰性(-),1~4分為弱陽性(+),5~8分為中等陽性(++),9~12分為強(qiáng)陽性(+++),以-~+為陰性表達(dá),++~+++為陽性表達(dá),計算陽性表達(dá)率。
1.2.5 Western blot檢測宮頸細(xì)胞系中GATA3和STAT3蛋白的表達(dá) 以鼠抗人GATA3單克隆抗體(稀釋濃度1:500)、鼠抗人STAT3單克隆抗體(稀釋濃度1:500)和辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的兔抗鼠IgG抗體(稀釋濃度1:1 000)分別室溫溫育2 h;鼠抗人β-肌動蛋白抗體(稀釋濃度1:1 000)和HRP標(biāo)記的兔抗鼠IgG抗體(稀釋濃度1:2 000)室溫溫育2 h,DAB顯色。采用Image J凝膠圖像處理系統(tǒng)分析計算光帶的吸光度值,以目標(biāo)蛋白條帶灰度值/內(nèi)參條帶灰度值來表示目的基因相對蛋白表達(dá)水平。
1.2.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 在HeLa細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-135a-5p mimic及陰性對照mimic Negative Control(miRNC),轉(zhuǎn)染使用Lipofectamine 2000試劑盒,步驟按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。
1.2.7 雙熒光素酶報告基因分析miR-135a-5p與GATA3 3’UTR的相互作用 構(gòu)建GATA3 3’UTR報告載體3’UTR-WT(序列:5’-ACCCCAUCUGUGAAUAAGCCAUU-3’),及突變型報告載體3’UTR-MT(突變序列:5’-ACCCCAUCUGUUGGUAAGCCAUU-3’),將miR-135a-5p mimic和miR-NC共轉(zhuǎn)染入HEK-293A細(xì)胞,使用Dual-luciferase assay system檢測轉(zhuǎn)染后熒光素酶活性。
應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗;計量資料經(jīng)正態(tài)性檢驗符合正態(tài)分布,以(±s)表示,兩組間比較采用t檢驗,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用q檢驗;采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析進(jìn)行相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
實時定量RT-PCR結(jié)果顯示:miR-135a-5p在宮頸癌組中表達(dá)上調(diào),兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.03),見圖1A。同時檢測HcerEpic、HeLa、SiHa細(xì)胞系中miR-135a-5p的相對表達(dá)水平,結(jié)果顯示:與HcerEpic組相比,HeLa和SiHa細(xì)胞中miR-135a-5p表達(dá)上調(diào)(P=0.02),見圖1B。
圖1 實時定量RT-PCR法檢測miR-135a-5p在宮頸癌組織(A)和不同宮頸細(xì)胞(B)中的表達(dá)Figure1 Expression of miR-135a-5p in cervical cancer tissues(A) and defferent cervical cell lines(B) detected by RT-PCR
實時定量RT-PCR檢測結(jié)果顯示:GATA3 mRNA在正常對照組、CINⅠ組、CINⅡ~Ⅲ組、CSCC組的表達(dá)量分別為:5.53±1.18、6.42±1.26、1.21±0.54、0.63±0.26,正常對照組與CINⅠ組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),其余三組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F=38.21, P<0.05)。正常對照組、CINⅠ組、CINⅡ~Ⅲ組、CSCC組STAT3 mRNA表達(dá)量分別為:0.62±0.21、0.95±0.33、2.74±0.65、4.26±0.76,四組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=42.06, P<0.05),見圖2。
進(jìn)一步行免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:GATA3蛋白的陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞核,陽性細(xì)胞多位于基底層及副基底層細(xì)胞中。在正常對照組及CINⅠ組中,GATA3陽性表達(dá)的細(xì)胞較多,隨著宮頸病變進(jìn)展,CINⅡ~Ⅲ組中GATA3陽性表達(dá)的細(xì)胞數(shù)明顯減少,而在CSCC組中幾乎未見GATA3表達(dá),見圖3;GATA3陽性表達(dá)率分別為:正常對照組86.5%(32/37)、CINⅠ組89.7%(35/39)、CINⅡ~Ⅲ組9.5%(4/42)、CSCC組2.7%(1/37),四組間分別比較:正常對照組與CINⅠ組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),其余各組間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。STAT3蛋白陽性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)不同染色程度的棕黃色顆粒,少數(shù)位于細(xì)胞核,與GATA3表達(dá)情況相反,隨著宮頸病變的進(jìn)展,STAT3陽性表達(dá)的細(xì)胞數(shù)目增多,見圖4;STAT3陽性表達(dá)率分別為:正常對照組5.4%(2/37)、CINⅠ組12.8%(5/39)、CINⅡ~Ⅲ組71.4%(30/42)、CSCC組91.9%(34/37),四組間分別比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。
圖2 實時定量RT-PCR檢測四組宮頸組織中GATA3(A)、STAT3(B) mRNA表達(dá)Figure2 Expression of GATA3(A) and STAT3(B) mRNA in different cervical tissues detected by RT-PCR
Western blot結(jié)果顯示:與HcerEpic比較,GATA3條帶灰度值在HeLa及SiHa細(xì)胞中降低,而STAT3條帶灰度值在HeLa及SiHa細(xì)胞中升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見圖5A,而HeLa、SiHa細(xì)胞中GATA3及STAT3條帶灰度值比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。實時定量RT-PCR結(jié)果顯示:與HcerEpic比較,GATA3蛋白在HeLa及SiHa細(xì)胞中表達(dá)減少,而STAT3蛋白在HeLa及SiHa細(xì)胞中表達(dá)增多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=52.49, P<0.05),HeLa及SiHa細(xì)胞中GATA3、STAT3蛋白表達(dá)水平比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=3.34, P>0.05),見圖5B。mRNA檢測結(jié)果與蛋白表達(dá)結(jié)果一致,見圖5C。
圖3 免疫組織化學(xué)顯示GATA3在不同病理類型宮頸組織中的表達(dá)Figure3 Expression of GATA3 protein in different pathological types of cervical tissues detected by immunohistochemistry method
采用TargetScan預(yù)測miR-135a-5p的靶基因,結(jié)果表明:miR-135a-5p與GATA3 3’UTR具有結(jié)合位點(diǎn),見圖6A。進(jìn)一步雙熒光素酶報告基因結(jié)果顯示:與miR-NC組比較,過表達(dá)miR-135a-5p后帶有GATA3 3’UTR的熒光素酶活性明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);在結(jié)合位點(diǎn)突變后,即在GATA3 3’UTR-MUT中miR-NC組與miR-135a-5p mimic組熒光素酶活性無明顯變化,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見圖6B,說明miR-135a-5p可靶向調(diào)控GATA3的轉(zhuǎn)錄活性。
圖4 免疫組織化學(xué)顯示STAT3在不同病理類型宮頸組織中的表達(dá)Figure4 Expression of STAT3 protein in different pathological types of cervical tissues detected by immunohistochemistry method
Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示:在宮頸癌中miR-135a-5p與GATA3 mRNA的相對表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.6656, P<0.05),見圖7A;GATA3與STAT3 mRNA相對表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.4534,P<0.05),見圖7B。
圖5 GATA3、STAT3蛋白和mRNA在不同宮頸細(xì)胞系中的表達(dá)Figure5 Expression of GATA3, STAT3 protein and mRNA in different cervical cell lines
圖6 雙熒光素酶報告基因驗證miR-135a-5p與GATA3 3’UTR的靶向作用Figure6 Targeting effect between miR-135a-5p and GATA3 3’UTR verified by dual-luciferase reporter assay system
結(jié)果顯示:miR-135a-5p的表達(dá)量與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況具有相關(guān)性,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);GATA3 mRNA的表達(dá)量與臨床分期、間質(zhì)浸潤深度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況具有相關(guān)性,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。
目前已證實高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)病的初始步驟,但其發(fā)生發(fā)展是眾多因素共同作用的結(jié)果,miRNA被認(rèn)為是此過程中的重要因素[10]。已有研究表明miR-135a-5p在多種人類惡性腫瘤中起到原癌基因或抑癌基因的作用[5]。本研究結(jié)果顯示:隨著宮頸病變進(jìn)展miR-135a-5p表達(dá)上調(diào),且與宮頸癌臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān),提示miR-135a-5p可能作為原癌基因參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。
表1 miR-135a-5p、GATA3 mRNA表達(dá)量與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系 (2-ΔΔCt, ±s)Table1 Relationship of miR-135a-5p, GATA3 mRNA expression with clinicopathological features of cervical squamous cell carcinoma patients (2-ΔΔCt, ±s)
表1 miR-135a-5p、GATA3 mRNA表達(dá)量與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系 (2-ΔΔCt, ±s)Table1 Relationship of miR-135a-5p, GATA3 mRNA expression with clinicopathological features of cervical squamous cell carcinoma patients (2-ΔΔCt, ±s)
Clinicopathological parameters t P Age(years) 0.657 0.439 0.743 0.527≤50 25 5.3±0.4 4.1±0.9>50 12 4.5±1.8 3.7±1.1 Tumour size(cm) 1.364 0.268 0.972 0.476≤3 22 9.6±1.1 3.3±0.6>3 15 13.4±0.6 4.2±1.1 Differentiation 2.814 0.142 2.742 0.094 Well 26 8.7±0.4 2.7±0.5 Moderate, poor 11 14.6±0.7 4.1±0.6 Clinical stage 2.541 0.024 2.972 0.017Ⅰ27 11.7±0.9 4.4±1.0Ⅱa 10 6.8±0.5 4.5±0.7 Invasion depth 2.625 0.126 2.826 0.024≤1/2 28 9.8±0.7 2.3±0.8>1/2 9 8.3±0.9 4.4±1.7 n miR-135a-5p expression t P GATA3 mRNA expression Lymph node metastasis 2.931 0.021 2.947 0.014 Yes 7 8.6±1.1 4.9±1.3 No 30 15.7±0.8 2.6±0.8
GATA3是一種在乳腺、尿路上皮和T細(xì)胞亞群分化過程中起重要作用的轉(zhuǎn)錄因子。在動物模型的研究中表明,GATA3在乳腺癌的發(fā)生過程中起關(guān)鍵作用[11],GATA3的表達(dá)缺失往往提示著乳腺腫瘤的進(jìn)展甚至轉(zhuǎn)移[12]。乳腺癌組織標(biāo)本的免疫組織化學(xué)實驗研究表明,低表達(dá)水平的GATA3提示較高的腫瘤分期及較差的預(yù)后,因此GATA3被認(rèn)為是乳腺腫瘤的抑制因子[13-14]。另有研究表明,GATA3可通過調(diào)節(jié)參與腫瘤進(jìn)展及轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分子從而抑制膀胱癌細(xì)胞遷移及浸潤,但不抑制細(xì)胞增殖[15]。相比之下,GATA3在宮頸癌中的研究較少。本研究結(jié)果顯示,隨著宮頸病變程度的進(jìn)展,GATA3 mRNA表達(dá)水平下調(diào),尤其在CSCC組中幾乎未見GATA3的表達(dá),對其表達(dá)水平與宮頸癌的臨床病理參數(shù)的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行分析,顯示GATA3 mRNA的表達(dá)量與宮頸癌的臨床分期、間質(zhì)浸潤深度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況具有相關(guān)性,由此推測GATA3可能是作為宮頸癌的抑制因子參與疾病進(jìn)展。GATA3是一種轉(zhuǎn)錄因子,其表達(dá)受上游信號如miRNA等的調(diào)節(jié)。采用生物信息學(xué)分析對GATA3的上游miRNA進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)miR-135a-5p與GATA3相關(guān)性較大,并與GATA3 3’UTR有結(jié)合位點(diǎn),進(jìn)一步的雙熒光素酶報告基因結(jié)果證實miR-135a-5p可與GATA3 3’UTR結(jié)合而調(diào)控其轉(zhuǎn)錄活性,推測在宮頸癌中miR-135a-5p可靶向抑制GATA3的表達(dá)而發(fā)揮功能,但其分子機(jī)制有待進(jìn)一步的實驗驗證。
STAT3在人類多種惡性腫瘤如乳腺癌、胰腺癌、結(jié)直腸癌、急性淋巴細(xì)胞白血病中高表達(dá),其過度表達(dá)與腫瘤的增殖、細(xì)胞凋亡抑制、侵襲和轉(zhuǎn)移、新血管生成以及腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells, CSCs)的自我更新和分化等密切相關(guān)[16-17]。有研究發(fā)現(xiàn),GATA3可抑制STAT3的表達(dá)活性,而在膀胱癌干細(xì)胞中GATA3活性受抑制,解除了其對STAT3的抑制作用,導(dǎo)致STAT3的高表達(dá)[6],本研究結(jié)果顯示,隨著宮頸病變的進(jìn)展,STAT3表達(dá)上調(diào),在CSCC組中表達(dá)最強(qiáng),提示STAT3在宮頸癌中亦被過度激活,呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài),對CSCC組中GATA3與STAT3 mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示兩者呈負(fù)相關(guān),符合已有研究結(jié)果的表達(dá)趨勢,由此推測在宮頸癌中miR-135a-5p通過抑制GATA3的轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)而激活STAT3的表達(dá),過度激活的STAT3作用于下游信號分子如CyclinD1、Survivin、IL-10等,而IL-10處于免疫調(diào)節(jié)的中心環(huán)節(jié),IL-10的高表達(dá)可通過多種途徑抑制機(jī)體免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用[18],如IFN-γ表達(dá)抑制[19],造成免疫逃逸,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移。本次研究的局限性在于僅從組織及細(xì)胞水平檢測miR-135a-5p、GATA3及STAT3的表達(dá)情況及其相關(guān)性,課題組將在后續(xù)實驗中進(jìn)一步揭示miR-135a-5p/GATA3/STAT3在宮頸癌中的分子機(jī)制,以期為宮頸癌的病理診斷及靶向治療提供新的分子靶點(diǎn)。