研究背景概述

本文通過實驗研制乳酸乳球菌MG1363介導(dǎo)的pBpp重組蛋白表達菌株，期望可以有效的治愈我國糖尿病患者。根據(jù)針對糖尿病中的免疫功能紊亂以及自由基毒素等致病因子對人體進行作用，從而降低人體機能中的胰島素抵抗力以及胰島功能，最終形成蛋白質(zhì)、電解質(zhì)以及脂肪等系列性代謝紊亂癥狀的分析。提出了研制一種乳酸乳球菌MG1363介導(dǎo)的pBpp重組蛋白表達菌株的思路。

具體研究內(nèi)容

pBpp蛋白概述。pBpp蛋白屬于一種功能性蛋白，可以用到人體的胰腺中，并且不必經(jīng)過糖代謝機制，可以促進β細胞的增長和繁殖，加快胰島素的分泌速度，而且對于人體的降糖操作刺激性不大，副作用也不大。

其次我們應(yīng)當(dāng)注意到的是，人體對pBpp蛋白的吸收率不高，口服形式的治療方法不予推薦。并且由于目前技術(shù)水平制約，pBpp蛋白的制備和生產(chǎn)無法達到量產(chǎn)的規(guī)模。因此應(yīng)用于實際的治療當(dāng)中還需要時日。

一種乳酸乳球菌MG1363介導(dǎo)的pBpp重組蛋白表達菌株的驗證方法

依據(jù)乳酸乳球菌MG1363定植腸道的特性，在胃酸環(huán)境中能夠很好的實現(xiàn)乳酸乳球菌MG1363對pBpp蛋白的保護作用，并促進重組蛋白集中分泌在腸道中，乳酸乳球菌MG1363介導(dǎo)，一方面實現(xiàn)了pBpp蛋白在人體內(nèi)部的正常表達，另一方面提高了人體對pBpp蛋白的吸收率。

第一步：以斑馬魚糞便菌群DNA為模板，依托于pMG36e質(zhì)粒，設(shè)計并運用一對引物，進行含有乳酸乳球菌分泌表達肽的pBpp蛋白表達基因的擴展。

第二步：在大腸桿菌中進行pMG36e質(zhì)粒的擴增。

第三步：通過電轉(zhuǎn)手段，在pBpp重組蛋白中導(dǎo)入一種乳酸乳球菌MG1363。

第四步：取實驗小白鼠，通過藥物針劑注射的方式，將50mg/kg計量的鏈脲佐菌素連續(xù)五天注射到小白鼠身上，使小白鼠患有糖尿病。并標(biāo)注為I型糖尿病模型小白鼠。

第五步：取一組制備好的乳酸乳球菌MG1363介導(dǎo)的pBpp重組蛋白表達菌株，準(zhǔn)備實驗小白鼠，采取灌胃的形式，將乳酸乳球菌MG1363介導(dǎo)的pBpp重組蛋白表達菌株液體投放到小白鼠的體內(nèi)，進行I型糖尿病模型小白鼠的病情治愈工作。

第六步：初期注意I型糖尿病模型小白鼠的給藥分量，控制在52CFU/天的分量左右，而且給藥的周期采取隔一天的形式進行，即兩天給一次藥。

第七步：采取一周為一次的監(jiān)測周期，仔細觀察1型糖尿病模型小白鼠體內(nèi)的血糖數(shù)值變化。

實驗結(jié)果表明：在實驗治療的過程當(dāng)中，1型糖尿病模型小白鼠體內(nèi)的血糖數(shù)值不僅得到了很好的控制，而且通過給藥行為，恢復(fù)了正常數(shù)值范圍，確定Ⅰ型糖尿病模型小白鼠被治愈成功。即說明一種乳酸乳球菌MG1363介導(dǎo)的pBpp重組蛋白表達菌株對于治愈糖尿病有一定的成效。

一種乳酸乳球菌MG1363介導(dǎo)的pBpp重組蛋白表達菌株的制備

第一步：進行含有Usp45乳酸乳球菌分泌表達信號肽的pBpp蛋白表達基因的制備，仍然以斑馬魚糞便菌群的總DNA為模板。

第二步：將第一步制備的試驗品連接到pMG36e載體上，獲得重組質(zhì)粒。

第三步：將第二步的重組質(zhì)粒投放到大腸桿菌中，獲得重組菌株。

第四步：制備感受態(tài)的乳酸乳球菌MG1363，選取凍存狀態(tài)下的乳酸乳球菌（MG1363），投放到MRS培養(yǎng)液基當(dāng)中，控制厭氧環(huán)境下的溫度，大約在三十?dāng)z氏度左右，上下浮動不超過兩攝氏度。經(jīng)過大約十二小時的靜置培養(yǎng)以后，將培養(yǎng)基液中的菌液取出大約100pLus，將該液體均勻的涂抹在固體培養(yǎng)基平板上，保持相同的厭氧環(huán)境以及溫度范圍，經(jīng)過大約十二小時的靜置培養(yǎng)后，獲得單菌落。

第五步：將plMG36e- Usp45- pBpp（重組質(zhì)粒）從第三步的重組菌株中提取，使用電轉(zhuǎn)方法，并設(shè)置1.8kv的電壓，25uF的電容參數(shù)以及4.7ms的電轉(zhuǎn)速度，將重組質(zhì)粒投放到感受態(tài)的乳酸乳球菌中，在感受態(tài)的狀態(tài)下，實現(xiàn)兩者在電轉(zhuǎn)杯中混合。

第六步：采取紅莓素抗性篩選方法，獲得一種乳酸乳球菌MG1363介導(dǎo)的pBpp重組蛋白表達菌株。

綜上所述，一種乳酸乳球菌MG1363介導(dǎo)的pBpp重組蛋白表達菌株對于治愈糖尿病有一定的成效。

作者簡介：

崔國賢（1987-），女，內(nèi)蒙古通遼人，初級，大專，研究方向：微生物檢測。