李想 范曉峰

顱腦損傷為常見的神經(jīng)外科疾病，常伴有復(fù)雜的病理與生理變化，致殘、致死風(fēng)險高［1-2］。研究顯示，顱腦損傷患者在出現(xiàn)血腦屏障受損后易產(chǎn)生T細(xì)胞聚集、小膠質(zhì)細(xì)胞激活，進(jìn)而誘導(dǎo)促炎因子介質(zhì)釋放，引發(fā)系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)綜合征［3-4］；同時重要的抗炎物質(zhì)亦起到一定作用，能誘發(fā)抗炎性反應(yīng)綜合征，若兩者平衡受到破壞可引發(fā)器官功能障礙，增加易感性［5］。目前，臨床針對顱腦損傷多以降低顱內(nèi)壓、保護(hù)腦功能、維持腦灌注、預(yù)防并發(fā)癥、改善神經(jīng)功能等治療為主，但預(yù)后欠佳［6］。本研究為提高急性顱腦損傷治療效果與預(yù)后，對患者外周血NK細(xì)胞、補(bǔ)體C3、血清蛋白水平進(jìn)行分析，以減少病殘、病死風(fēng)險。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年5月至2018年1月本院收治的急性顱腦損傷患者60例，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有患者均經(jīng)頭顱CT、MRI等臨床檢查確診為急性顱腦損傷；（2）外傷史明確，且外傷后6h內(nèi)入院接受診治；（3）入院時GCS評分在3～12分范圍內(nèi)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在高血壓、糖尿病、肝炎等慢性或感染性疾??；（2）其他部位合并有嚴(yán)重性損傷；（3）伴有惡性腫瘤及心臟、肝、腎等重要臟器疾病者；（4）妊娠期或哺乳期婦女；（5）近期發(fā)生感染者；（6）近期曾應(yīng)用免疫抑制劑。按GCS評分將其分為輕中型組（GCS為9～12分）和重型組（GCS為3-8分），輕中型組37例，重型組23例。輕中型組中男20例，女17例；年齡18～68歲，平均年齡（39.35±3.72）歲。致傷原因：交通事故傷20例，墜落傷10例，暴力打擊傷3例，其他4例。重型組中男13例，女10例；年齡19～70歲，平均年齡（38.96±3.81）歲。致傷原因：交通事故傷13例，墜落傷6例，暴力打擊傷2例，其他2例。另選取同期本院接受體檢健康者60例為對照組，其中男35例，女25例；年齡18～70歲，平均年齡（39.52±2.43）歲。三組性別、年齡方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法 三組人員入院時均接受CT或X線、MRI檢查。輕中型組和重型組患者在入院第1、3、5、7天采集血液標(biāo)本，患者在入院診治時首次采集血液樣本2～3ml，入院第3、5、7天于清晨患者空腹?fàn)顟B(tài)下抽取肘靜脈血2～3ml；對照組體檢時采集血液樣本2～3ml，采集條件為早晨空腹?fàn)顟B(tài)。樣本采集2h內(nèi)送至血液檢驗科進(jìn)行標(biāo)本制備，在室溫環(huán)境下行15min的3000r/min離心，留取上清液，放入-20℃冰箱內(nèi)保存，待測。以CD3- PercP-Cy5.5（深圳欣博盛生物科技有限公司）與CD56-PE（深圳欣博盛生物科技有限公司）標(biāo)記，用流式細(xì)胞儀檢測NK細(xì)胞水平，采用免疫散射比濁法檢測補(bǔ)體C3水平。血清蛋白包括：血清ALB、IL-6、CRP，應(yīng)用溴甲酚綠比色法檢測ALB水平，應(yīng)用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測IL-6水平，應(yīng)用免疫透射比濁法檢測hs-CRP水平，所有操作均嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以［n（%）］表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料采用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組NK細(xì)胞陽性率比較 見表1。

表1 三組NK細(xì)胞陽性率比較［%（x±s）］

2.2 三組補(bǔ)體C3水平比較 見表2。

表2 三組補(bǔ)體C3水平比較（x±s）

2.3 三組血清蛋白水平比較 輕中型組和重型組患者入院第1、3、5、7天的ALB水平均低于對照組，IL-6、CRP水平均高于對照組，且隨著時間延長不斷降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），同時重型組患者入院第1、3、5、7天的ALB水平均低于輕中型組、IL-6、CRP水平均高于輕中型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表 3。

表3 三組患者血清蛋白水平比較（x±s）

3 討論

急性顱腦損傷病因復(fù)雜，機(jī)體可在病發(fā)數(shù)小時或幾天內(nèi)出現(xiàn)復(fù)雜的串聯(lián)性代謝變化，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生病理、生理改變。若急性顱腦損傷患者不及時接受有效治療與控制，易產(chǎn)生繼發(fā)性腦損害，增加腦損傷患者病殘與病死風(fēng)險。臨床研究、動物實驗表明，急性顱腦損傷的病理發(fā)展過程與炎性細(xì)胞因子存在密切關(guān)系，炎性細(xì)胞因子易因激活過度引發(fā)炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步加重繼發(fā)性腦損傷［7］。

NK細(xì)胞是機(jī)體骨髓造血干細(xì)胞分化、發(fā)育形成，多分布在外周血與脾臟中，其主要生物學(xué)功能表現(xiàn)為抗感染、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用，在病毒感染后，NK細(xì)胞能分泌TNF-α、IFN-γ等因子，對病毒復(fù)制進(jìn)行干擾，阻止其對吞噬細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步活化，使機(jī)體抗感染免疫功能增強(qiáng)；同時NK細(xì)胞能通過釋放IFN-γ、TNF-β等因子調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，使機(jī)體早期免疫監(jiān)視、抗感染免疫功能增強(qiáng)；若機(jī)體內(nèi)NK細(xì)胞表達(dá)減少，則機(jī)體早期感染風(fēng)險增加［8-9］。補(bǔ)體C3細(xì)胞主要是由肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，能合成局部組織特異因子及激素，其生物學(xué)功能主要表現(xiàn)為：能參與宿主的早期抗感染免疫工作、維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定、連接獲得性免疫與天然免疫，同時與其他酶系統(tǒng)存在相互作用，故通過檢測補(bǔ)體C3水平能對補(bǔ)體活化、功能狀態(tài)進(jìn)行良好的反映［10-11］。本資料結(jié)果顯示，輕中型組和重型組患者入院第1、3、5、7天的NK細(xì)胞陽性率均低于對照組，且隨著時間延長不斷減少，同時重型組患者入院第1、3、5、7天的NK細(xì)胞陽性率均低于輕中型組，而外傷后患者補(bǔ)體C3細(xì)胞水平出現(xiàn)短暫下降，后迅速升高，繼而持續(xù)降低，同時重型組患者入院第3、5、7天的補(bǔ)體C3水平高于輕中型組；說明急性顱腦損傷患者NK細(xì)胞水平呈動態(tài)降低，抗感染能力降低，且補(bǔ)體水平出現(xiàn)異常，不同病情之間存在一定的差異，外傷后具有一定免疫抑制狀態(tài)，早期感染風(fēng)險增加。分析原因可能是外傷后患者的血清內(nèi)產(chǎn)生多種血清因子，這些因子存在免疫抑制作用，而血清內(nèi)存在免疫增強(qiáng)功能的物質(zhì)不斷減少，共同作用于機(jī)體，引起免疫抑制，而NK細(xì)胞減少不利于機(jī)體免疫功能恢復(fù)；同時急性顱腦損傷后補(bǔ)體C3細(xì)胞水平發(fā)生短暫降低可認(rèn)為在應(yīng)激狀態(tài)下，機(jī)體多伴有高分解代謝所致的消耗性降低、蛋白酶水解作用；隨后在血腦屏障受到破壞后，血漿接觸中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)抗原物質(zhì)，細(xì)胞缺血壞死后所釋放的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，能使補(bǔ)體順著不依賴抗體經(jīng)典途徑進(jìn)行激活；或是抗磷脂抗體和鞘磷脂、腦磷脂等物質(zhì)能形成抗原、抗體復(fù)合物，通過依賴抗體相關(guān)經(jīng)典途徑能將補(bǔ)體激活；或是損傷后產(chǎn)生腦缺血，破壞毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，能通過MBL途徑將補(bǔ)體激活。相關(guān)研究顯示，在顱腦損傷出血時機(jī)體內(nèi)紅細(xì)胞相關(guān)溶解能激活補(bǔ)體。

白蛋白作為基礎(chǔ)生命物質(zhì)，急性顱腦損傷患者在出現(xiàn)腦外傷后多處于高度的應(yīng)激狀態(tài)，在神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、大量炎癥因子的相互作用下，影響白蛋白mRNA表達(dá)及白蛋白合成，同時處于應(yīng)激狀態(tài)下的高消耗、高分解均易引起白蛋白水平降低；若白蛋白水平偏低，易導(dǎo)致血漿膠體滲透壓平衡喪失，可引發(fā)組織水腫，導(dǎo)致水電解質(zhì)紊亂情況加劇，機(jī)體經(jīng)肝臟及腎臟的自我調(diào)節(jié)能維持穩(wěn)定狀態(tài)，進(jìn)而引發(fā)高鈉血癥，而血鈉水平升高易引起外周組織抵抗胰島素并升高血糖，造成的惡性循環(huán)能破壞肝臟代謝功能，增加并發(fā)癥發(fā)生風(fēng)險［12-13］。同時血漿白蛋白對機(jī)體具有一定運輸功能，對球蛋白具有關(guān)鍵的膠體保護(hù)作用，在血漿球蛋白穩(wěn)定性降低，影響機(jī)體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)代謝及利用、轉(zhuǎn)運，導(dǎo)致機(jī)體處于亞健康情況。本資料結(jié)果顯示，白蛋白水平與患者病情具有一定的聯(lián)系，可反映患者的病情嚴(yán)重程度。IL-6對B細(xì)胞的成熟、分化形成抗體具有誘導(dǎo)作用，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用，能參與神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生，正常情況下神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞成熟反映IL-6存在廣泛性損傷序列，多種狀態(tài)下IL-6常以神經(jīng)營養(yǎng)因子方式表達(dá)，IL-6對神經(jīng)細(xì)胞生成因子生成具有促進(jìn)作用；同時IL-6在創(chuàng)傷中起到雙重作用，在患者體溫升高情況下IL-6存在一定損害作用，影響預(yù)后，若不及時控制，IL-6可引發(fā)嚴(yán)重腦損傷［14］。本資料結(jié)果顯示，血清IL-6、CRP表達(dá)水平越高，患者腦損傷程度越嚴(yán)重。C反應(yīng)蛋白作為急性相反應(yīng)的蛋白，正常機(jī)體內(nèi)含量較少，在機(jī)體發(fā)生感染、創(chuàng)傷等損害后快速升高，急性顱腦損傷CRP水平增加能對炎癥反應(yīng)狀態(tài)進(jìn)行良好的反映，存在較高的預(yù)后不良風(fēng)險［15］。因此，觀察急性顱腦損傷患者外周血NK細(xì)胞、補(bǔ)體C3、血清蛋白水平動態(tài)變化，能反映顱腦損傷程度，利于臨床醫(yī)生制定、選取安全有效的治療方案，為臨床治療提供參考依據(jù)。

綜上所述，急性顱腦損傷患者病情嚴(yán)重程度與外周血NK細(xì)胞水平、補(bǔ)體C3、血清蛋白水平動態(tài)呈密切關(guān)系，外傷后患者外周血NK細(xì)胞水平、補(bǔ)體C3水平及血清ALB、IL-6、CRP水平多處于高水平狀態(tài)，隨著時間延長外周血NK細(xì)胞水平及血清ALB、IL-6、CRP水平不斷降低，補(bǔ)體C3水平不斷增加，故觀察患者外周血NK細(xì)胞、補(bǔ)體C3及血清蛋白水平動態(tài)變化，能為臨床預(yù)測急性顱腦損傷程度、評估預(yù)后提供參考依據(jù)。