摘要：經(jīng)過二十多年的發(fā)展， ELISA檢測早已從手工加樣和檢測發(fā)展為自動化加樣和檢測。但是不論是進(jìn)口試劑還是國產(chǎn)試劑質(zhì)控對照的設(shè)置卻和二十多年前的手工檢測一樣，只能夠反映檢測條件的有效性，而不能夠反映自動化檢測過程的有效性，因此有必要優(yōu)化質(zhì)控對照的設(shè)置，以適應(yīng)自動化檢測的需要。

關(guān)鍵詞：血液檢測;自動化;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）;質(zhì)控對照

檢測條件的有效性主要是指檢測過程中的時(shí)間、溫度、試劑分配和加樣量是否符合試劑說明書的要求，判斷標(biāo)準(zhǔn)為陽性對照大于某OD值，陰性對照小于某OD值，空白對照小于某OD值，以及為判斷該次檢測是否在控的標(biāo)定濃度室內(nèi)質(zhì)控品的OD值檢測情況。目前ELISA試劑的質(zhì)控對照設(shè)置可以反映上述指標(biāo)有效性。

檢測過程的有效性主要是指ELISA檢測板96個檢測孔是否從第一孔到第96孔都加到了規(guī)定的試劑，所加試劑的量是否足夠。目前ELISA試劑的質(zhì)控對照設(shè)置只能證明第一排的質(zhì)控對照加到了規(guī)定的試劑，但從第二排到第十二排的試劑分配是否完成卻不能得到驗(yàn)證，不能反映檢測過程的有效性。

以下以本檢驗(yàn)科使用的8種ELISA試劑的質(zhì)控對照設(shè)置為例，對質(zhì)控對照的優(yōu)化進(jìn)行探討。

目前本檢驗(yàn)科共使用3種進(jìn)口ELISA試劑，5種國產(chǎn)ELISA試劑，從設(shè)置位置可以看出8種試劑的質(zhì)控對照都位于第一排。在自動化檢測中試劑分配是按第一排到十二排的順序進(jìn)行分配，位于第一排的質(zhì)控對照對照肯定首先分配到試劑，但位于第二排到第十二排的樣本檢測孔是否分配到足量的試劑是沒有得到驗(yàn)證的。如果由于分配器的氣密性下降或試劑量準(zhǔn)備偏少導(dǎo)致分配器上部有氣泡，將會導(dǎo)致最后幾個檢測孔沒有加到試劑或所加試劑量不足。當(dāng)檢測結(jié)束后，我們用肉眼對微板進(jìn)行觀察，國產(chǎn)試劑由于本底很低，陰性結(jié)果呈透明無色狀，如果有少加或漏加試劑，肉眼是無法分辨的，而位于第一排的PC、NC、QC都顯示為正常。進(jìn)口試劑本底較深，如果漏加顯色劑可以肉眼發(fā)現(xiàn)，但是漏加或少加酶試劑同樣無法用肉眼發(fā)現(xiàn)。因此存在漏檢樣本的風(fēng)險(xiǎn)。

在檢測中碰到這樣的情況后，我們就思考是否可以優(yōu)化質(zhì)控對照的設(shè)置，使其既可以對檢測條件的有效性進(jìn)行驗(yàn)證，也可以對檢測過程的有效性進(jìn)行驗(yàn)證。我們對8種ELISA試劑質(zhì)控對照的優(yōu)化設(shè)置如下：

我們的優(yōu)化思路是將原來設(shè)置有2孔或3孔陽性對照的試劑，分出一孔設(shè)置到微板尾部最后一孔處，有四個國產(chǎn)試劑和一個進(jìn)口試劑這樣優(yōu)化設(shè)置。如果該試劑原來只設(shè)置了一孔陽性對照，則將臨界值的質(zhì)控對照設(shè)置到板尾最后一孔。這樣設(shè)置質(zhì)控對照后，如果位于第一孔和最后一孔的陽性對照或臨界值質(zhì)控對照都符合要求，可以認(rèn)為位于它們之間的每一個檢測孔都足量的加到了規(guī)定的試劑，那么不僅可以證明檢測條件的有效性，同時(shí)也可以證明整個檢測過程的有效性。該優(yōu)化方案沒有增加對照孔數(shù)，沒有增加檢測成本，只是改變了設(shè)置的位置。

該優(yōu)化方案中以國產(chǎn)試劑HBsAg2、抗-HCV2、抗-TP2優(yōu)化為佳，第一孔和最后一孔都為相同的陽性對照，這樣可以直觀的判斷兩孔陽性對照的檢測值是否一致。如果檢測值不一致，則需判斷該差別是否在可接受范圍;如果該差別不能接受，則需查找原因。如果最后一孔未能檢出，可以認(rèn)為檢測過程有問題，需查找是因?yàn)槊冈噭]有加到還是顯色劑沒有加到，或者其他的原因。

該優(yōu)化方案中的抗-HIV1進(jìn)口試劑是將三個不同的陽性對照中的第三種優(yōu)化到最后一孔，這樣它就不能和第一孔的陽性對照檢測值進(jìn)行對比，只能和自己以前的檢測值進(jìn)行對比。但只要檢測結(jié)果符合說明書要求就可認(rèn)為檢測過程有效。

該優(yōu)化方案中的HBsAg1、抗-HCV1、抗-TP1由于說明書只要求設(shè)置一孔陽性對照，因此是把臨界值質(zhì)控品優(yōu)化到最后一孔。這樣設(shè)置除了不能和第一孔陽性對照的檢測值進(jìn)行對比外，還存在臨界值質(zhì)控對照的信息處理問題?，F(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室都用LIS系統(tǒng)進(jìn)行質(zhì)控信息的處理，目前的軟件都是對固定位置的質(zhì)控信息進(jìn)行判斷處理，而不能對變化位置的質(zhì)控信息進(jìn)行處理，因此該方案不能被現(xiàn)在的LIS系統(tǒng)接受。這三種試劑的優(yōu)化需要對說明書的質(zhì)控對照設(shè)置進(jìn)行修改來解決這個問題，HBsAg1和抗-HCV1原設(shè)置為1陽2陰可改為2陽1陰，抗-TP1原設(shè)置為1陽3陰可改為2陽2陰，這樣就可把一孔陽性對照設(shè)置到最后一孔而把臨界值質(zhì)控品設(shè)置到第一排的固定位置，總的質(zhì)控對照孔數(shù)未變，不增加檢測成本。

綜上所述，目前ELISA試劑的質(zhì)控對照設(shè)置在自動化檢測條件下不能對檢測過程進(jìn)行驗(yàn)證，存在漏檢樣本的風(fēng)險(xiǎn)，在自動化檢測ELISA時(shí)需要對檢測條件的有效性和檢測過程的有效性進(jìn)行驗(yàn)證，通過優(yōu)化質(zhì)控對照的設(shè)置，分別在第一孔和最后一孔設(shè)置陽性對照，可以實(shí)現(xiàn)對檢測條件和檢測過程的有效性進(jìn)行驗(yàn)證，使ELISA檢測的有效性驗(yàn)證更加科學(xué)合理。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳飛.ELISA定性實(shí)驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控方法建立探討[B].中外婦兒健康，2011，19（7）：427.

[2]楊壽旺，李睿，周振達(dá)等.ELISA質(zhì)控存在的問題探討[B].中國國境衛(wèi)生檢疫雜志，2011，34（5）：334-336.

[3]吳先玉，張杰，帥榮，等.淺談如何做好ELISA法的質(zhì)量控制[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2012，10（26）：48-49.

[4]張永俊.ELISA法室內(nèi)質(zhì)控模式的建立[B].公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008，19（5）：69-70.