武曉敏 楊慧芬

[摘要] 目的 探討S100A6、P53對宮頸癌行順鉑新輔助化療患者的療效及化療敏感性評估價(jià)值。 方法 選取2017年1～12月我院收治的行順鉑新輔助化療的宮頸癌患者70例，觀察不同臨床療效患者的S100A6、P53表達(dá)情況。結(jié)果 70例患者中完全緩解（CR）8例，部分緩解（PR）51例，疾病穩(wěn)定（SD）6例，疾病進(jìn)展（PD）5例，化療總有效率為84.29%（59/70）;化療前S100A6、P53陽性表達(dá)率為85.71%、61.43%，化療后S100A6、P53陽性表達(dá)率為45.71%、84.29%，化療后S100A6陽性表達(dá)率較化療前明顯降低（P<0.05），P53陽性表達(dá)率較化療前明顯升高（P<0.05）;高敏感組S100A6、P53陽性表達(dá)率分別為27.12%、91.53%，低敏感組S100A6、P53陽性表達(dá)率分別為90.91%、45.45%，高敏感組S100A6陽性表達(dá)率明顯低于低敏感組（P<0.05），P53陽性表達(dá)率明顯高于低敏感組（P<0.05）。結(jié)論 S100A6、P53可作為宮頸癌患者行順鉑新輔助化療效果和敏感性預(yù)測的標(biāo)志物。

[關(guān)鍵詞] S100A6;P53;宮頸癌;順鉑新輔助化療;敏感性

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，病死率位居女性惡性腫瘤第二位[1-2]。手術(shù)、放療和化療是宮頸癌的常規(guī)治療方法，能夠明顯提高患者生存率，但對于病灶體積偏大的患者，尤其是腫瘤直徑≥4 cm患者的治療效果有限[3]。對于此類患者，順鉑新輔助化療常作為前期治療的首選方式，旨在縮小腫瘤體積以創(chuàng)造手術(shù)條件。子宮動脈介入治療療效優(yōu)于靜脈化療，常作為新輔助化療的首選方式[4-5]。但并非所有病灶均對化療敏感，因此，治療前通過敏感標(biāo)記物來預(yù)測腫瘤化療敏感性對制定個(gè)體化治療方案具有指導(dǎo)意義。S100A6是一種生物蛋白，具有生長調(diào)控功能[6];P53是一種抑癌基因，與腫瘤細(xì)胞DNA修復(fù)和凋亡關(guān)系密切[7]。S100 A6、P53能夠反映宮頸癌病情程度，但針對療效評估和化療敏感性預(yù)測的報(bào)道較少。對此，本研究對宮頸癌患者行順鉑新輔助化療前后的S100A6和P53表達(dá)水平以及不同療效患者的S100A6、P53表達(dá)情況進(jìn)行監(jiān)測，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1～12月我院收治的行順鉑新輔助化療的宮頸癌患者70例，年齡30～65歲，平均（43.25±12.36）歲;臨床分期：Ⅰb2期29例，Ⅱa2期41例。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均首次經(jīng)病理活檢確診為Ⅰb2、Ⅱa2期宮頸癌，且腫瘤直徑≥4 cm[8];常規(guī)行血尿常規(guī)、生化電解質(zhì)等實(shí)驗(yàn)室檢查無明顯異常。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往接受過手術(shù)、放療、化療等治療患者;合并心、肝、腎功能不全者;存在化療禁忌證者。本研究經(jīng)院倫理委員會審核，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

化療前接受常規(guī)婦科檢查、B超、血尿常規(guī)、肝腎功能、生化電解質(zhì)等檢查，符合化療條件后接受順鉑+博來霉素（海正輝瑞制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H2005 5883，規(guī)格為1.5萬博來霉素單位）新輔助動脈化療方案，采用Seldinger法穿刺右股動脈，分別引入導(dǎo)絲、5F導(dǎo)管鞘、5FCobra導(dǎo)管，對雙側(cè)子宮動脈進(jìn)行選擇性插管，注入造影劑，明確病灶血流情況，將順鉑70 mg/m2+博來霉素30 mg注入雙側(cè)子宮動脈，使用明膠海綿條栓塞雙側(cè)子宮動脈，14 d為1療程，連續(xù)化療2個(gè)療程。

1.3 免疫組化

1.3.1 儀器與試劑? 即用型P53舒抗人單克隆抗體、免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司;S100A6單克隆抗體購自安諾倫（北京）生物科技有限公司;蘇木素、中性樹膠、多聚賴氨酸購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。

1.3.2 檢測方法? 參照試劑盒說明書進(jìn)行操作，使用PBS緩沖液做陰性對照，用已知宮頸癌組織切片做陽性對照。①將包有宮頸癌組織的石蠟切片使用二甲苯脫蠟2次，15 min/次，使用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3次，5 min/次;②將切片置于pH=6.0的檸檬酸緩沖液中，加熱煮沸15 min進(jìn)行抗原修復(fù)，冷卻至室溫后使用PBS沖洗3次，5 min/次;③滴加10%正常山羊血清50 μL封閉內(nèi)源性微生物;④于切片上分別滴加1滴P53單克隆抗體或S100A6單克隆抗體，37℃孵育30 min;⑤滴加新配制的DAB顯色液，置于顯微鏡下觀察顯色，3～10 min后使用清水沖洗，終止反應(yīng);⑥蘇木素復(fù)染1 min，使用乙醇脫水，用中性樹膠封片，置于顯微鏡下觀察。

1.3.3 判定標(biāo)準(zhǔn)? 以蛋白定位于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)且出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，具體標(biāo)準(zhǔn)為：①染色較淡，陽性細(xì)胞數(shù)<25%為陰性（-）;②染色較強(qiáng)且清晰，陽性細(xì)胞數(shù)位于25%～50%為陽性（+～+++）。

1.4 臨床療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

參照WHO療效判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床療效評價(jià)[9]，完全緩解（CR）：可見病灶完全消失;部分緩解（PR）：可見病灶最大直徑縮小>50%;疾病穩(wěn)定（SD）：可見病灶最大直徑≤25%或病灶最大直徑縮小≤50%;疾病進(jìn)展（PD）：病灶最大直徑增大>25%或出現(xiàn)新靶病灶?？傆行?（CR+PR）/總例數(shù)×100%。

1.5 觀察指標(biāo)

觀察患者治療前后S100A6、P53陽性表達(dá)率;根據(jù)化療效果將化療后CR和PR患者納入高敏感組，將SD和PD患者納入低敏感組，比較兩組患者S100A6、P53陽性表達(dá)率。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌患者臨床療效

70例患者中CR 8例，PR 51例，SD 6例，PD 5例，化療總有效率為84.29%（59/70）。見表1。

2.2 化療前后S100A6、P53陽性表達(dá)率比較

化療前S100A6、P53陽性表達(dá)率為85.71%、61.43%，化療后S100A6、P53陽性表達(dá)率為45.71%、84.29%，化療后S100A6陽性表達(dá)率較化療前明顯降低（P<0.05），P53陽性表達(dá)率較化療前明顯升高（P<0.05）。見表2。

2.3 不同化療敏感性患者S100A6、P53陽性表達(dá)率比較

高敏感組59例，低敏感組11例，高敏感組S100 A6、P53陽性表達(dá)率分別為27.12%、91.53%，低敏感組S100A6、P53陽性表達(dá)率分別為90.91%、45.45%，高敏感組S100A6陽性表達(dá)率明顯低于低敏感組（P<0.05），P53陽性表達(dá)率明顯高于低敏感組（P<0.05）。見表3。

3 討論

宮頸癌的治療手段包括手術(shù)治療、放射治療和化療等，對于腫瘤偏大的患者，手術(shù)和放療治療效果有限，臨床多采取先期化療的方式以縮小腫瘤體積，為創(chuàng)造手術(shù)機(jī)會和提高后期化療敏感性提供保障[10-12]。根據(jù)用藥途徑將化療方式分為靜脈化療和動脈化療，動脈化療以可針對性栓塞腫瘤血管而得到廣泛應(yīng)用[13-14]。在新輔助化療中，順鉑聯(lián)合博來霉素是臨床治療宮頸癌的常用方案，順鉑作用于腫瘤細(xì)胞的DNA嘌呤和堿基嘧啶，能夠有效阻止腫瘤細(xì)胞DNA復(fù)制過程;博來霉素可抑制腫瘤細(xì)胞增殖分裂，二者聯(lián)合化療可明顯抑制腫瘤細(xì)胞增殖分裂[15]。本研究對宮頸癌患者進(jìn)行2個(gè)療程的化療，總有效率達(dá)到84.29%，表明以順鉑為主的新輔助化療在宮頸癌患者中效果良好。但并非所有腫瘤都對化療敏感，化療前有效評估化療敏感性對制定個(gè)體化治療方案具有重要指導(dǎo)意義。

S100A6基因參與細(xì)胞增殖、凋亡等多種病理過程，其在不同腫瘤組織中的表達(dá)水平并不一致。研究顯示[16]，S100A6在胰腺癌、結(jié)腸癌、胃癌和黑色素瘤中表達(dá)明顯升高，而在前列腺癌中表達(dá)水平顯著下降。姚月榮等[6]發(fā)現(xiàn)，S100A6在宮頸癌患者中的表達(dá)高于正常女性，且表達(dá)水平與惡性程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。本研究對宮頸癌患者治療前后的S100A6表達(dá)水平進(jìn)行了觀察，發(fā)現(xiàn)治療前S100A6表達(dá)較低，這與姚月榮等[6]研究結(jié)果一致;經(jīng)過2個(gè)療程治療后，患者S100A6表達(dá)明顯升高，說明S100A6可作為順鉑新輔助化療效果的有效評價(jià)指標(biāo)。進(jìn)一步對化療敏感性進(jìn)行分組，將CR和PR患者納為高敏感組，將SD和PD患者納為低敏感組，發(fā)現(xiàn)高敏感組患者S100A6蛋白表達(dá)水平明顯低于低敏感組（P<0.05），說明S100A6水平可反映化療敏感性，S100A6表達(dá)可作為宮頸癌細(xì)胞對化療敏感性的有效預(yù)測指標(biāo)。

P53是一種抑癌基因，不僅對損傷的DNA具有監(jiān)視和修復(fù)作用，還可直接調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖與凋亡[17-20]。許多抗癌藥物均可引起P53依賴的細(xì)胞凋亡而發(fā)揮細(xì)胞毒性作用[21]。本研究結(jié)果顯示，治療后P53陽性表達(dá)率明顯高于治療前（P<0.05），證實(shí)P53與宮頸癌發(fā)展有關(guān)，與李平等[22]研究一致。孫鋒等[23]發(fā)現(xiàn)，P53不僅與腫瘤細(xì)胞增殖凋亡有關(guān)，與腫瘤耐藥性的產(chǎn)生同樣關(guān)系密切。若P53過表達(dá)則無法有效促進(jìn)細(xì)胞修復(fù)和誘導(dǎo)凋亡，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性[24]。本研究進(jìn)一步對化療敏感性不同的患者進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)高敏感組患者P53陽性表達(dá)率明顯高于低敏感組（P<0.05），表明P53與化療敏感性關(guān)系密切，這對制定個(gè)體化治療方案具有重要指導(dǎo)意義。若宮頸癌患者化療前P53呈低表達(dá)，則說明順鉑新輔助化療可作為先期化療的方案;若化療前P53呈高表達(dá)，則說明腫瘤細(xì)胞對順鉑新輔助化療存在耐藥性，此時(shí)應(yīng)制定其他治療方案。

綜上所述，順鉑新輔助化療在宮頸癌患者中應(yīng)用效果顯著，S100A6、P53可作為化療效果評估和化療敏感性預(yù)測的有效指標(biāo)，這對制定個(gè)體化治療方案具有指導(dǎo)意義。

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