楊 雪，王玫玲△，張 堯

(1.武漢市精神衛(wèi)生中心精神科 430022；2.武漢市衛(wèi)生健康委員會 430033)

毒品濫用為目前世界范圍內(nèi)最嚴重的公共衛(wèi)生問題之一，多數(shù)吸毒者經(jīng)脫毒治療后會再次吸毒[1]，以海洛因濫用最為常見[2]。海洛因成癮過程是由偶爾的用藥過渡至強迫性用藥的過程，患者多表現(xiàn)為用藥后欣快狀態(tài)，撤藥后戒斷反應(yīng)伴隨沮喪、焦慮等嚴重的精神癥狀[3-4]，使成癮者易復(fù)吸，為脫毒治療亟待解決的問題。研究顯示，阿片類物質(zhì)成癮可使大鼠腦海馬、中腦腹側(cè)被蓋區(qū)(VTA)等部位出現(xiàn)明顯的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、線粒體腫脹，以及細胞核周圍固縮等神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)變化，改善由成癮物質(zhì)導(dǎo)致的腦神經(jīng)元損傷為臨床研究的熱點問題之一[5-6]。針灸為祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)療法，針刺可通過抗細胞凋亡、促進神經(jīng)細胞修復(fù)發(fā)揮神經(jīng)保護作用[7-8]，但在海洛因成癮中的應(yīng)用尚不多見。本研究通過建立海洛因成癮大鼠模型，觀察針刺太沖穴對大鼠腦功能、神經(jīng)內(nèi)分泌因子的影響，探討針刺太沖穴治療海洛因成癮的機制，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1實驗動物及分組 雌性SD健康大白鼠90只，體質(zhì)量200～250 g，購自湖北省實驗動物研究中心，合格證號：SCXX(鄂)2008-0005。按簡單隨機抽樣法將90只大鼠分為正常對照組(A組)，海洛因復(fù)吸模型組(B組)、針刺治療組(C組)，每組30只大鼠。

1.2方法

1.2.1海洛因成癮大鼠模型建立 給予大鼠肌內(nèi)注射遞增量海洛因，建立海洛因成癮模型。染毒階段：第1天劑量0.8 mg·kg-1·d-1，自第2天開始，每天劑量增加0.2 mg·kg-1·d-1，至第8天劑量為2.2 mg·kg-1·d-1。第4～8天，每天注射2次，分別于早7:00，晚7:00注射。脫毒階段：停止注射海洛因5 d，自然戒斷。

1.2.2各組大鼠處理方法 A組根據(jù)建立海洛因成癮大鼠模型的實驗周期，成癮階段給予大鼠肌內(nèi)注射0.9%氯化鈉(NaCl)溶液，劑量為每天0.2 mL；大鼠脫毒實驗階段不給予任何治療措施，實驗第13天處死大鼠，心臟取血待檢。同時將大鼠斷頭處死，迅速剝?nèi)∪X，洗凈血液，除去腦膜后，放液氮冷凍保存。B組根據(jù)建立海洛因復(fù)吸大鼠模型的實驗周期，成癮階段給予大鼠持續(xù)遞增劑量的海洛因，肌內(nèi)注射；脫毒實驗階段不給予任何治療措施，實驗第13天，同法留全腦及血液待檢。C組根據(jù)建立的海洛因復(fù)吸大鼠模型的實驗周期，在成癮階段，給予持續(xù)遞增量肌內(nèi)注射海洛因；脫毒實驗階段，給予針刺太沖穴治療，按《大鼠穴位圖譜》[9-10]所示選擇太沖穴，以25 mm的針灸針對太沖穴施以斜刺，進入皮下12 mm，留針30 min，每天1次，總共治療5 d。在實驗第13天，同法留全腦及血液待檢。

1.3觀察指標(biāo) (1)海洛因成癮強度評價：采用納洛酮激發(fā)實驗，第8天3組各抽取10只大鼠，每只大鼠腹腔注射0.8 mg納洛酮催癮，根據(jù)MALDONADO等[11]戒斷癥狀評分評定大鼠的海洛因成癮強度，包括：扭體、濕狗樣顫抖、站立、跳躍、齒顫、上瞼下垂等。觀察時間為腹腔注射納洛酮后開始計時，持續(xù)觀察20 min。(2)行為學(xué)指標(biāo)：將實驗大鼠置于實驗室適應(yīng)20 min后，大鼠面朝開臂方向放置于十字迷宮中心，記錄大鼠5 min內(nèi)在開臂、閉臂停留時間，進入開臂、閉臂的次數(shù)(以兩前爪進入臂內(nèi)判定為進臂1次)。開臂停留時間的百分比，進入開臂次數(shù)的百分比作為焦慮程度的檢測指標(biāo)。(3)腦功能指標(biāo)：腹腔注射10%的水合氯醛麻醉大鼠，快速斷頭處死，迅速在冰盤上剝離腦干組織(腦干界定：尾端為枕骨大孔，頭端腹側(cè)為間腦下緣，頭端背側(cè)為上丘上緣)，取腦干組織稱重，置于預(yù)冷酸性丁醇溶液中勻漿，轉(zhuǎn)移勻漿液至離心管內(nèi)，補足正丁醇至10 mL，3 000 r/min離心10 min，取上清液1.5 mL測定去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)水平。以熒光分光光度計檢測，發(fā)射光/激發(fā)光分別為NE 480 nm/385 nm，DA 375 nm/325 nm，5-HT 480 nm/365 nm。(4)神經(jīng)內(nèi)分泌因子：以放射免疫法(RIAS)檢測血清N端腦鈉肽前體(NT-proBNP)、血漿血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)及醛固酮(ALD)水平。

2 結(jié) 果

2.1海洛因成癮強度評定 B、C組大鼠扭體、濕狗樣顫抖、跳躍、站立、齒顫、上瞼下垂等戒斷癥狀評分均高于A組(P<0.05)；B、C組大鼠之間上述戒斷癥狀評分比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。海洛因成癮模型成功。

2.2行為學(xué)指標(biāo)比較 B、C組大鼠進入開臂次數(shù)百分率、開臂滯留時間百分率低于A組(P<0.05)；C組大鼠進入開臂次數(shù)百分率、開臂滯留時間百分率高于B組(P<0.05)，見表2。

2.3腦功能比較 B、C組大鼠腦干中(濕重腦干組織)NE、DA、5-HT水平高于A組(P<0.05)，B組大鼠腦干中NE、DA、5-HT水平高于C組(P<0.05)，見表3。

表1 3組大鼠戒斷癥狀評分比較分)

*：P<0.05，與A組比較

表2 3組大鼠行為學(xué)指標(biāo)比較

*：P<0.05，與A組比較；#：P<0.05，與B組比較

表3 3組大鼠腦神經(jīng)遞質(zhì)水平比較

*：P<0.05，與A組比較；#：P<0.05，與B組比較

2.4神經(jīng)內(nèi)分泌因子水平比較 B、C組大鼠血清NT-proBNP、AngⅡ、ALD水平高于A組，B組大鼠NT-proBNP、AngⅡ、ALD水平高于C組(P<0.05)，見表4。

表4 3組大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌因子水平比較

*：P<0.05，與A組比較；#：P<0.05，與B組比較

3 討 論

海洛因成癮患者中普遍存在情緒異常，其中以焦慮、抑郁癥狀最為常見，也是毒癮戒除的重要心理因素[12]。針刺對海洛因成癮者情緒異常的影響及其作用機制為目前針刺戒毒研究的熱點問題。高架十字迷宮實驗為藥理學(xué)實驗中常用評價動物焦慮程度與藥物抗焦慮效果的可靠實驗方法[13]。利用動物進入新奇環(huán)境的探究特性，以及對高懸敞開臂的恐懼心理，形成動物的矛盾行為，以動物進入開臂的次數(shù)占總進入次數(shù)的百分率，進入開臂時間占總時間的百分率反映動物的焦慮狀態(tài)。本組研究中，海洛因成癮大鼠進入開臂次數(shù)百分率、在開臂停留時間百分率均明顯下降，提示海洛因成癮大鼠表現(xiàn)出明顯的焦慮癥狀。經(jīng)針刺治療后，海洛因成癮大鼠進入開臂次數(shù)百分率、開臂停留時間百分率較B組海洛因成癮模型大鼠明顯升高，但仍低于正常水平，提示針刺治療可減少海洛因成癮大鼠的焦慮癥狀。

海洛因成癮過程中，單胺神經(jīng)遞質(zhì)與大鼠腦功能、焦慮、神經(jīng)組織受損程度等密切相關(guān)，主要包括DA、NE、5-HT 3種[14]。DA主要分布于黑質(zhì)-紋狀體通路、中腦邊緣多巴胺系統(tǒng)、結(jié)節(jié)-漏斗部等。其中中腦邊緣多巴胺系統(tǒng)為腦內(nèi)獎賞中樞，與藥物的獎賞效應(yīng)、藥物依賴性密切相關(guān)[15]。NE主要分布于腦干，尤其是腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)、藍斑等，在藥物獎賞效應(yīng)及藥物依賴中也具有明顯作用，可通過重新攝入神經(jīng)細胞或抑制中樞單胺氧化酶的活性，提高情緒、引發(fā)快感[16]。5-HT主要分布于腦干的中縫核內(nèi)，可作用于額前皮質(zhì)、邊緣系統(tǒng)、垂體活性系統(tǒng)，通過調(diào)節(jié)DA系統(tǒng)，活化5-HT受體，促進神經(jīng)遞質(zhì)釋放，調(diào)節(jié)腦內(nèi)涉及動機的獎賞環(huán)路，從而引起海洛因成癮[17]。本組研究中，B組海洛因成癮模型大鼠較A組正常對照大鼠DA、NE、5-HT水平均明顯升高，提示海洛因成癮中單胺神經(jīng)遞質(zhì)大量釋放。經(jīng)針刺治療后，DA、NE、5-HT水平較B組海洛因成癮模型大鼠下降，提示針刺治療可改善腦內(nèi)受損神經(jīng)元，改善內(nèi)源性阿片肽系統(tǒng)及其他神經(jīng)體液調(diào)節(jié)系統(tǒng)的功能，改善成癮大鼠腦功能。分析針刺影響神經(jīng)遞質(zhì)的機制為：針刺太沖穴可通過非哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)依賴途徑調(diào)節(jié)腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元的自噬通路，恢復(fù)受損的自噬水平，清除α-突觸核蛋白在腦內(nèi)積累[18]。也可顯著上調(diào)小鼠腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元的溶酶體膜蛋白表達，修復(fù)受阻斷的自噬-溶酶體通路。自噬水平恢復(fù)后，小鼠多巴胺能神經(jīng)元損傷改善，多巴胺能神經(jīng)元活力、運動能力顯著提升。

臨床報道顯示，神經(jīng)內(nèi)分泌因子過度激活，可引起血管內(nèi)膜增厚，冠狀動脈血管結(jié)構(gòu)功能損傷[19]。與藥物成癮密切相關(guān)的神經(jīng)內(nèi)分泌因子包括NT-proBNP、AngⅡ、ALD等。其中NT-proBNP為腦鈉肽(BNP)激素原分裂后產(chǎn)生的無活性的N端片段，在心肌細胞收到的容量負荷、壓力負荷增高時由左心室分泌，為評價心力衰竭的常用指標(biāo)。AngⅡ主要存在于神經(jīng)元細胞體、軸突、神經(jīng)末梢上，對中樞、外周系統(tǒng)有著多重調(diào)節(jié)作用，可調(diào)節(jié)細胞生長、性行為、血管收縮、壓力感受反射、情感、記憶鞏固等，可通過與ATR1結(jié)合在中樞系統(tǒng)中發(fā)揮調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、交感、應(yīng)激系統(tǒng)的作用。ALD為類固醇類激素，主要作用于腎臟，為增強腎臟對離子、水分再吸收的激素，也是腎素-血管緊張素系統(tǒng)的一部分，可調(diào)節(jié)腎素經(jīng)腎靜脈進入血液系統(tǒng)，啟動鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，生成血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)、AngⅡ等[20-21]。本組研究中，對大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌因子的觀察結(jié)果表明，B組海洛因成癮模型大鼠血清神經(jīng)內(nèi)分泌因子NT-proBNP、AngⅡ、ALD水平均較A組正常對照大鼠升高，提示海洛因成癮模型大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌因子被激活，證實海洛因成癮模型大鼠中存在血管內(nèi)皮功能障礙、微血管結(jié)構(gòu)及內(nèi)皮功能損傷等。經(jīng)針刺治療后，上述指標(biāo)明顯改善，提示針刺治療可通過調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌因子水平，發(fā)揮治療海洛因成癮的作用。

綜上所述，針刺太沖穴可明顯改善海洛因成癮戒斷大鼠焦慮癥狀，可能通過減少全腦中單胺神經(jīng)遞質(zhì)水平，減輕血清中神經(jīng)內(nèi)分泌因子水平來實現(xiàn)。