謝嘉馳 李亞蘭 彭江麗 肖冰梅* 王 興*

（1 湘潭市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，湖南 湘潭 411100；2 湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙 410208）

柴胡為傘形科植物柴胡 Bupleurum chinense DC.或狹葉柴胡 Bupleurum scorzoneri folium Willd.的干燥根。根據(jù)性狀區(qū)分，我們將其稱為“北柴胡”和“南柴胡”。柴胡［1］首次記載于在《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有和解退熱，疏肝解郁，升提中氣功效，臨床應(yīng)用廣泛。其入湯劑有用來治療寒熱往來感冒的小柴胡湯，治療肝郁血虛導(dǎo)致月經(jīng)不調(diào)的逍遙散?！吨袊参镏尽分杏涊d，我國柴胡屬（Bupleurum） 植物多達(dá) 36種。近年由于柴胡在臨床上使用量增大，產(chǎn)量低，正品柴胡常常不能滿足市場的需求，導(dǎo)致多種柴胡的混偽品進(jìn)入了藥材銷售市場［2］。為保證臨床上患者用藥安全及藥效質(zhì)量，對高橋藥材市場購買的樣品進(jìn)行系統(tǒng)的鑒別研究。通過對樣品與正品柴胡在性狀特征、顯微特征及理化反應(yīng)進(jìn)行系統(tǒng)對比研究，以確定該柴胡的真?zhèn)?，為柴胡的真?zhèn)舞b別提供簡便可行的實(shí)驗(yàn)研究方法，為臨床用藥提供可靠依據(jù)。

1 儀器、試劑與材料

1.1 儀器 顯微鏡（廠家：Motic型號：BA210LED）；培養(yǎng)皿；剪刀；刀片；牛角勺；濾紙；載玻片；蓋玻片；鑷子；解剖針；文具盒；酒精燈；打火機(jī)；粉碎機(jī)；玻璃燒杯；試管；膠頭滴管；25 mL量筒；10 mL量筒；水浴鍋。

1.2 試劑 水合氯醛液；稀甘油；甲醇；蒸餾水；95%乙醇；冰醋酸；硫酸；對二甲氨基甲醛；磷酸。

1.3 材料 從高橋藥材市場采購柴胡藥材，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定學(xué)教研室肖冰梅老師鑒定均符合《中國藥典》2015年版項(xiàng)下規(guī)定。

2 方法

取樣品和柴胡飲片分別用蒸餾水浸泡 24 h，待其充分吸水膨脹時(shí)及時(shí)取出按常規(guī)制片法制作組織橫切片，用水合氯醛透化后置于顯微鏡下觀察。取中藥材，烘箱干燥后，用打粉機(jī)打成粉末并過100目篩網(wǎng)以備用。分別取適當(dāng)粉末制成透化裝片置于顯微鏡下觀察并記錄比較兩者間的顯微特征。取樣品粉末和正品柴胡粉末各進(jìn)行理化鑒別反應(yīng)。

2.1 徒手切片法 取已被蒸餾水浸泡過的藥材，選擇合適的部位，將其兩端削平；注意手拿刀片的姿勢，防止使用不當(dāng)造成刀片損傷手指。切片時(shí)刀片應(yīng)與材料相垂直并且應(yīng)用臂力切片，若使用腕力，則很難切得均勻透明。切的過程中刀片不能離開食指，否則易造成厚薄不均，注意動(dòng)作要敏捷迅速，不能中途停頓或是做拉鋸式切割。將刀片上的切片移入盛有水的培養(yǎng)皿中，選取較薄且完整均勻的切片置于載玻片上；在滴加適量的水合氯醛液后于點(diǎn)燃的酒精燈上加熱，當(dāng)水合氯醛液因加熱而減少時(shí)，及時(shí)用膠頭滴管添加，重復(fù)數(shù)次直至切片透化完成；滴加 1～2滴稀甘油，用鑷子夾取潔凈蓋玻片，從左至右沿液面輕輕覆蓋，以防氣泡產(chǎn)生影響觀察。蓋玻片外溢出的的液體用吸水紙輕輕吸去，置于顯微鏡下觀察。

2.2 水合氯醛法 用牛角勺取適量樣品粉末和正品粉末置于載玻片上，滴加水合氯醛液1～2滴后在點(diǎn)燃的酒精燈上邊加熱邊用解剖針適當(dāng)攪拌，這樣可使裝片受熱均勻防止沸騰。當(dāng)試液因加熱漸漸揮干時(shí)，再次滴加水合氯醛液1～2滴，反復(fù)數(shù)次，透化完成后，用鑷子夾取干凈無水的蓋玻片沿液面從左至右覆蓋，保證試液充滿蓋玻片下方并無氣泡。

2.3 泡沫反應(yīng) 取樣品粉末和柴胡粉末各 0.5 g，分別置于具塞試管中，加水10 mL，用力振搖，觀察現(xiàn)象。

2.4 顯色反應(yīng) （1）取樣品粉末和柴胡粉末各1 g，加入10 mL冰醋酸，浸提12 h后過濾，將濾液置于干燥潔凈的試管中，各緩緩加入濃硫酸 0.5 mL，觀察現(xiàn)象［3］。（2）取用水潤軟的樣品飲片和正品柴胡飲片，切取橫切片，用膠頭滴管滴加配比好的硫酸和無水乙醇的等量混合液 1滴，觀察現(xiàn)象［3］。（3） 取樣品粉末和柴胡粉末各0.5 g，分別加10 mL甲醇，用力振搖后再靜置30 min，過濾，各取0.5 mL濾液于干燥潔凈的試管中，分別滴加0.5 mL的對二甲氨基甲醛的甲醇溶液（1∶30），搖勻后再滴加2 mL磷酸，水浴加熱，加熱時(shí)溫度不宜太高，觀察現(xiàn)象［3］。

3 結(jié)果

3.1 性狀鑒別 樣品飲片外觀呈現(xiàn)為長圓柱形，直徑較小，彎曲。根頭部明顯可見膨大，并有較多支根、根頭部殘留多數(shù)莖基和葉基。飲片長約為5～7 cm，直徑約為0.3～0.6 cm。飲片外表皮為灰褐色或黑褐色，摸起來粗糙。質(zhì)地較松脆，折斷后較平坦，可見片狀纖維性。皮部較薄，且易與木部分離。氣微香，味微苦［4］。

正品柴胡飲片外觀呈圓柱形，部分有分支，直徑0.3～0.8 cm。根頭部的膨大不明顯，頂端留有莖基和葉基。飲片外表面為淺棕色或黑褐色，外表皮可見縱皺紋和支根痕。質(zhì)地較硬，有韌性，因此不易折斷，斷面可見片狀纖維性。皮部和木部顏色有較大區(qū)別，一為淺棕色，二為黃白色。氣微香，味微苦［4］。如圖1～3。

圖1 正品

圖2 樣品

圖3 樣品

3.2 橫切面顯微特征 正品：木栓層下有7層栓內(nèi)層細(xì)胞；皮層散有油管；韌皮部有紅棕色或黃棕色油腔；形成層成環(huán)；木質(zhì)部面積占整個(gè)根部面積約為2/3，導(dǎo)管徑向排列，木纖維群排列成多個(gè)不連續(xù)的環(huán)狀［2］。

樣品：木栓層由眾多數(shù)列細(xì)胞構(gòu)成；皮層分布有油管；韌皮部油管數(shù)目眾多，排列散在，大小不一；木質(zhì)部面積占比較小，導(dǎo)管徑向排列。如圖4～7。

圖4 正品

圖5 正品

圖6 樣品

圖7 樣品

3.3 粉末顯微特征 正品：粉末偏黃棕色；木纖維眾多，多呈長梭形，，木化較明顯；管道中含黃棕色分泌物；木栓細(xì)胞大部分為黃棕色，偶見數(shù)層重疊，表面觀一般呈類多角形，壁較厚；主要為網(wǎng)紋導(dǎo)管，偶見雙螺紋導(dǎo)管；薄壁細(xì)胞多呈長圓形，類長方形［5］。

樣品：粉末偏灰棕色；纖維較少，呈末端鈍圓的長梭形；油管多是破斷的，管道中含有棕色油狀分泌物；多為網(wǎng)紋導(dǎo)管和梯紋導(dǎo)管；薄壁細(xì)胞呈長圓形；木栓細(xì)胞排列緊密，無色或黃棕色，呈類多角形［6］。如圖8～13。

表1 柴胡與偽品區(qū)別

圖8 正品木纖維

圖9 正品油管和導(dǎo)管

圖10 正品薄壁細(xì)胞

圖11 樣品木栓細(xì)胞

圖12 樣品導(dǎo)管

圖13 樣品薄壁細(xì)胞

3.4 泡沫反應(yīng) 振搖后均產(chǎn)生蜂窩狀泡沫，樣品產(chǎn)生的泡沫明顯較對照品少。靜置，樣品泡沫明顯減少，五分鐘后泡沫基本消失，而對照品產(chǎn)生持久性泡沫，基本沒有變化，如圖 14～15。

圖14 左為樣品，右為對照品

圖15 左為樣品，右為對照品

3.5 顯色反應(yīng) 2.4.1項(xiàng)下，正品柴胡在液面交接處呈現(xiàn)紅棕色環(huán)，放置后呈深棕色。而樣品無該現(xiàn)象。2.4.2項(xiàng)下，正品柴胡初顯黃綠色，5～10 min后由黃綠色變?yōu)樗{(lán)色，1 h后變?yōu)樯钏{(lán)色，最后消失。而樣品無該現(xiàn)象。2.4.3項(xiàng)下，正品柴胡水浴加熱后溶液出現(xiàn)淡紅紫色。而樣品無該現(xiàn)象。

4 小結(jié)

根據(jù)理化實(shí)驗(yàn)結(jié)果（表1） 和相關(guān)文獻(xiàn)［4］，鑒定該偽品為傘形科的小葉黑柴胡。正品與偽品柴胡其藥理活性成分不同，臨床治療效果差異明顯。進(jìn)一步證明目前市場上存在偽柴胡混淆用藥，危害患者的安全性，政府要加大對其監(jiān)控力度，維護(hù)市場秩序。