周桃珍，智艷芳，趙 玲

(1.鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 鄭州450052；2.鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院病理科，河南 鄭州450052)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤以及惡性腫瘤死亡的主要原因[1]。淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移是乳腺癌常見的一種轉(zhuǎn)移形式，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是腫瘤預(yù)后的關(guān)鍵預(yù)示因素，因?yàn)槟[瘤可以通過淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移到全身其他部位[2]。細(xì)胞間的黏附分子在腫瘤的轉(zhuǎn)移及侵襲過程中也起著至關(guān)重要的作用[3]。

β-鏈接蛋白是黏附分子的主要組成部分，在細(xì)胞Wnt信號(hào)通路中發(fā)揮轉(zhuǎn)錄共同因子的作用[4-6]，并且在其他信號(hào)通路中也發(fā)揮相關(guān)作用，例如磷酸肌醇3激酶(PI3K)/絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶(AKT)通路[7]。

β-鏈接蛋白作為癌基因，其失調(diào)或激活可導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生[8]。有多種線索表明β-鏈接蛋白在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中有著至關(guān)重要的作用[9-10]。轉(zhuǎn)錄后修飾的β-鏈接蛋白通過磷酸化水平的改變及轉(zhuǎn)換率可能會(huì)影響其表達(dá)量、功能及黏附功能[11]。

本研究的主要目的是評(píng)估原發(fā)性浸潤性乳腺導(dǎo)管癌組織中β-鏈接蛋白的表達(dá)并且分析其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，對于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者還進(jìn)行轉(zhuǎn)移后的相關(guān)因素研究。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源選取我院2014年1月至2019年6月收治的乳腺癌石蠟包埋切片標(biāo)本，均來源于乳房改良切除的組織標(biāo)本，包括39例原發(fā)性浸潤性乳腺導(dǎo)管癌和29例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌，并收集相關(guān)臨床病理資料[12- 13]。原始組織切片采用HE染色來確認(rèn)腫瘤的病理診斷及分級(jí)，隨后采用免疫組化檢測組織中β-鏈接蛋白、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、Ki-67等。

1.2 預(yù)后指數(shù)計(jì)算預(yù)后指數(shù)是預(yù)測原發(fā)性乳腺癌術(shù)后生存期的一個(gè)較好指標(biāo)。計(jì)算公式：預(yù)后指數(shù)= 0.2×腫瘤大小(cm)+腫瘤分級(jí)(1～3)+淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個(gè)數(shù)(1～3)。根據(jù)計(jì)算結(jié)果可將病例分為好、中、差等3個(gè)等級(jí)，得分分別為3.40分、3.41 ～ 5.40分、>5.40[14]。

1.3 免疫組化檢測采用鏈霉親和素-生物素免疫過氧化物酶復(fù)合染色法。將4 μm的組織切片用二甲苯脫蠟處理，隨后用梯度酒精水化處理，在甲醇中用體積分?jǐn)?shù)0.3%過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化氫酶的活性30 min；在檸檬酸鈉溶液中浸泡10 min后通過微波修復(fù)抗原。將處理好的組織切片分別與β-鏈接蛋白的單克隆抗體、ER的單克隆抗體、PR的單克隆抗體、Ki-67的單克隆抗體共同孵育2 h，隨后與生物素標(biāo)記的二抗在室溫下孵育30 min，用3,3′二氨基聯(lián)苯胺為顯色劑的親和素-生物素復(fù)合免疫過氧化物酶系統(tǒng)進(jìn)行顯色，用蘇木精進(jìn)行復(fù)染，每批標(biāo)本均設(shè)磷酸鹽緩沖液(PBS)染色的陰性對照。

1.4 免疫組化結(jié)果評(píng)分系統(tǒng)關(guān)于β-鏈接蛋白、ER、PR的表達(dá)評(píng)分，目前有一個(gè)半定量評(píng)分系統(tǒng)Histoscore[15]，這個(gè)系統(tǒng)用來評(píng)價(jià)細(xì)胞核、細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)中染色的強(qiáng)度(+ ～ +++)及細(xì)胞染色比例陽性(0%～100%)。Ki-67增殖指數(shù)是目前較為肯定的核增殖標(biāo)志物，與細(xì)胞的增殖有關(guān)，依據(jù)數(shù)值大小分為高、低等2種情況。

2 結(jié)果

2.1 入組65例原發(fā)性浸潤性乳腺導(dǎo)管癌患者的臨床病理資料見表1。

表1 65例原發(fā)性浸潤性乳腺導(dǎo)管癌患者的臨床病理資料

續(xù)表1

2.2 原發(fā)性浸潤性乳腺導(dǎo)管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與ER、PR、Ki-67增殖指數(shù)以及β-鏈接蛋白表達(dá)的關(guān)系見表2。

表2 原發(fā)性浸潤性乳腺導(dǎo)管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與ER、PR、Ki-67增殖指數(shù)以及β-鏈接蛋白表達(dá)的關(guān)系

2.3 原發(fā)性浸潤性乳腺導(dǎo)管癌組織中β-鏈接蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的單因素分析結(jié)果見表3。

表3 原發(fā)性浸潤性乳腺導(dǎo)管癌組織中β-鏈接蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的單因素分析結(jié)果

2.4 原發(fā)性浸潤性乳腺導(dǎo)管癌組織中β-鏈接蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的多因素分析結(jié)果見表4。

3 討論

以往研究[16-17]報(bào)道，β-鏈接蛋白在胰腺癌、直腸癌、子宮內(nèi)膜癌中，β-鏈接蛋白的表達(dá)部位異常。在乳腺癌中，僅報(bào)道過β-鏈接蛋白在細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)異常[18-21]，僅2篇報(bào)道過核β-鏈接蛋白的表達(dá)異常[22-23]。細(xì)胞核β-鏈接蛋白的缺乏可能與以下3個(gè)原因有關(guān)：乳腺癌的細(xì)胞核β-鏈接蛋白表達(dá)水平過低，免疫組化檢測不到；β-鏈接蛋白可能不存在于細(xì)胞核內(nèi)，其表達(dá)可能是通過非Wnt信號(hào)通路代替或被移除細(xì)胞核內(nèi)[24-25]。本研究結(jié)果顯示：原發(fā)性浸潤性乳腺導(dǎo)管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與ER、Ki-67增殖指數(shù)、細(xì)胞質(zhì)β-鏈接蛋白、細(xì)胞膜β-鏈接蛋白表達(dá)有關(guān)。單因素分析顯示，細(xì)胞質(zhì)β-鏈接蛋白表達(dá)與腫瘤大小、腫瘤分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個(gè)數(shù)、預(yù)后指數(shù)、臨床分期、Ki-67增殖指數(shù)有關(guān)，細(xì)胞膜β-鏈接蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個(gè)數(shù)、預(yù)后指數(shù)、臨床分期、ER有關(guān)，細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞膜比值與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個(gè)數(shù)、預(yù)后指數(shù)、臨床分期、Ki-67增殖指數(shù)有關(guān)(P均<0.05)。多因素分析顯示，細(xì)胞質(zhì)β-鏈接蛋白與Ki-67增殖指數(shù)有關(guān)，細(xì)胞膜β-鏈接蛋白與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER有關(guān)，細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞膜比值與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。這與以往文獻(xiàn)報(bào)道一致[21-22,26]?？傊?鏈接蛋白在原發(fā)性浸潤性乳腺導(dǎo)管癌組織中存在異常表達(dá)，為其發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移機(jī)制研究提供了新的思路。