杜永紅，崔園園，李晟磊

(1.鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系，河南 鄭州 450001；2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，河南 鄭州 450052)

食管癌是常見的惡性腫瘤，由于腫瘤侵襲的特性及缺乏有效的個(gè)體治療方法，食管癌患者5 a生存率僅為36%～47%，尋找新的分子靶點(diǎn)對于改善食管癌患者的預(yù)后具有十分重要的價(jià)值[1]。前梯度蛋白2(anterior gradient-2,AGR2)屬于蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶家族成員之一，有助于腫瘤的存活、促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展和惡性轉(zhuǎn)化，可能成為腫瘤新的預(yù)后因子及潛在的治療靶點(diǎn)[2]。本研究采用免疫組織化學(xué)的方法，研究AGR2在食管鱗癌組織中的表達(dá)，并探討其與食管鱗癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，為AGR2用于靶向治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料收集2015年4月至2018年9月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的經(jīng)病理學(xué)確診的97例食管鱗癌標(biāo)本和對應(yīng)的97例正常食管上皮組織，總結(jié)患者臨床理學(xué)特征。

1.2 指標(biāo)檢測手術(shù)標(biāo)本經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%中性甲醛固定、常規(guī)脫水、石蠟包埋、4 μm切片，HE染色光鏡檢查。免疫組織化學(xué)采用Envision二步法。AGR2抗體(小鼠單克隆抗體)購于美國Santa Cruz公司。

1.3 判讀標(biāo)準(zhǔn)AGR2染色的陽性信號呈棕黃色，主要定位于細(xì)胞質(zhì)，隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野，對每個(gè)視野計(jì)數(shù)不少于200個(gè)染色細(xì)胞，按如下標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)：1)染色深淺的判定標(biāo)準(zhǔn)：無顯色(0分)；呈淺黃色(1分)；呈現(xiàn)棕黃色(2分)；呈現(xiàn)棕褐色(3分)；2)陽性細(xì)胞數(shù)的判定標(biāo)準(zhǔn)如下：陽性細(xì)胞數(shù)的比率<5%(0分)；5%～<25%(1分)；25%～<50%(2分)；50%～<75%(3分)；≥75%(4分)；3)將染色深淺和陽性細(xì)胞數(shù)的百分比相乘，這一結(jié)果即是每張切片染色的最終分值，具體的判定標(biāo)準(zhǔn)為：分值為0～1分為陰性(-)，分值為2～3分為弱陽性(+)，分值≥4分為陽性(++)，其中后兩者均記為陽性。

1.4 隨訪電話隨訪主要隨訪方式，隨訪終止為出現(xiàn)由食管癌導(dǎo)致的相關(guān)死亡。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，免疫組織化學(xué)結(jié)果比較用χ2檢驗(yàn)，AGR2蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者預(yù)后之間的關(guān)系用log rank檢驗(yàn)進(jìn)行分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 AGR2蛋白在食管鱗癌組織和正常食管上皮組織中的表達(dá)AGR2定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中(圖1)，其在食管鱗癌組織中的陽性率(82/97，84.5%)顯著高于對應(yīng)的正常食管上皮組織(11/97，11.3%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=104.115，P<0.05，表1)。

圖1 AGR2在食管鱗癌(A)和正常食管上皮(B)組織中的陽性表達(dá)(IHC，×200)

表1 AGR2在食管鱗癌和正常食管上皮組織中的表達(dá)

2.2 AGR2蛋白的表達(dá)與食管鱗癌患者臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系A(chǔ)GR2蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者的性別和年齡無關(guān)(P均>0.05)，但與分化程度、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P均<0.05，表2)。

2.3 AGR2與食管鱗癌患者預(yù)后之間的關(guān)系A(chǔ)GR2高表達(dá)的食管鱗癌患者的生存時(shí)間顯著短于AGR2低表達(dá)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖2)。

3 討論

食管癌是世界范圍第8常見的惡性腫瘤，每年估計(jì)有450 000例新發(fā)病例和400 000例死亡病例,以鱗癌多見。目前有多種治療手段，但由于腫瘤侵襲的特性及缺乏有效的個(gè)體治療方法，患者的預(yù)后差[1]。

AGR首次在爪蟾中被鑒定，根據(jù)其在早期發(fā)育階段特異的表達(dá)模式而命名[3]。人類的AGR2主要高表達(dá)于肺、胃、結(jié)腸、前列腺和小腸組織中，這些組織包含黏液分泌的細(xì)胞。AGR2定位于染色體7p21.3區(qū)域，由8個(gè)外顯子和9個(gè)轉(zhuǎn)錄本構(gòu)成[4]。Pohler等[5]證實(shí)了AGR2作為存活因子，可在DNA損傷后通過抑制p53的磷酸化減弱p53的活性，提示AGR2與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究[6]表明，當(dāng)細(xì)胞缺氧的環(huán)境中，促進(jìn)生存、血管生成、遷移或侵襲的基因被激活。AGR2就屬于這樣一類基因。目前，AGR2的過表達(dá)已經(jīng)在多種不同的腫瘤中被報(bào)道，其過表達(dá)能促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展和惡性轉(zhuǎn)化。最為重要的是，AGR2作為潛在的診斷標(biāo)志也已經(jīng)在一些腫瘤中被證實(shí)，并可能成為腫瘤新的預(yù)后因子[7-8]。這些研究充分表明，AGR2可能在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的作用，因而可能成為許多腫瘤潛在的分子治療靶點(diǎn)和預(yù)后因子。

表2 AGR2蛋白的表達(dá)與食管鱗癌患者臨床病理學(xué)之間的關(guān)系

圖2 AGR2蛋白的表達(dá)與食管鱗癌患者預(yù)后之間的關(guān)系

大多數(shù)研究認(rèn)為AGR2在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮癌基因的功能。Chung等[9]研究表明，AGR2在肺腺癌組織中上調(diào)9.9倍，能選擇作為潛在肺腺癌的生物學(xué)標(biāo)記，最為顯著的是，AGR2在肺腺癌患者中的陽性率高達(dá)94%，陰性的AGR2表達(dá)與患者低的生存率密切相關(guān)(P=0.007)。Pizzi等[10]研究發(fā)現(xiàn)，AGR2 mRNA在鱗癌組織中顯著上調(diào)，并且其蛋白表達(dá)與mRNA表達(dá)趨勢具有一致性。Tsuji等[11]研究表明胞外AGR2能激活基質(zhì)成纖維細(xì)胞，促進(jìn)胃印戒細(xì)胞癌成纖維細(xì)胞相關(guān)腫瘤的侵襲。通過cDNA微陳列、免疫組織化學(xué)和組織芯片技術(shù)檢測胰腺癌組織中AGR2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)前列腺癌組織中具有高水平AGR2表達(dá)[12-13]。這些研究均表明AGR2在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中有重要作用。本研究采用免疫組織化學(xué)方法研究了AGR2在食管鱗癌以及正常食管黏膜組織中的表達(dá)，我們發(fā)現(xiàn)AGR2在食管鱗癌組織中的表達(dá)顯著高于正常食管上皮。這說明AGR2與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)。我們還發(fā)現(xiàn)，AGR2的表達(dá)與患者的分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，并且高表達(dá)AGR2的食管鱗癌患者的生存時(shí)間顯著低于低表達(dá)AGR2的食管鱗癌患者。這提示AGR2可以作為一個(gè)預(yù)測食管鱗癌患者預(yù)后的指標(biāo)。

總之，AGR2在食管鱗癌組織中表達(dá)顯著上調(diào)，并且患者的分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及預(yù)后相關(guān)，這提示AGR2在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。因此，抑制AGR2的表達(dá)可能成為未來食管鱗癌分子靶向治療潛在的靶點(diǎn)。對于AGR2在食管鱗癌組織中高表達(dá)的機(jī)制，尚需要進(jìn)一步的研究。