王麗恒 夏曦 林家福 曾躍

川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院感染科（四川南充637000）

流行性乙型腦炎（Japanese encephalitis）簡稱乙腦，是由乙腦病毒引起的以腦實質(zhì)炎癥為主要病變的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)急性傳染病，常造成患者死亡或留下神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，亞洲乙腦的年發(fā)病人數(shù)大約是68 000例［1］，并導(dǎo)致約20%～30%的乙腦患者死亡［2］。乙型腦炎是流行區(qū)居民的一個重大公共衛(wèi)生問題，給社會及家庭帶來嚴(yán)重的危害和負(fù)擔(dān)。目前，能夠滿意且敏感地用于監(jiān)測和評估乙腦患者病情嚴(yán)重程度和預(yù)后的實驗室指標(biāo)還鮮見報道，因此，有必要去尋找某些可靠又具有可重復(fù)性的實驗室指標(biāo)。巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1α（macrophage inflammatory protein-1α，MIP-1α）是由體內(nèi)的中性粒細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等產(chǎn)生的一種促炎性趨化因子，其受體廣泛表達(dá)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血液細(xì)胞中［3-7］。研究［8-9］顯示，MIP-1α主要通過與其特異性受體CCR1和CCR5相結(jié)合從而實現(xiàn)對巨噬細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)，進(jìn)而參與到神經(jīng)系統(tǒng)炎性反應(yīng)的過程中。但目前在乙腦患者中觀察MIP-1α水平變化的相關(guān)研究甚少，故本研究擬通過檢測乙腦患者腦脊液及血清中MIP-1α的含量變化，以探索其用于監(jiān)測乙腦預(yù)后的價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象觀察組：2016年至2017年于我院收治的流行性乙型腦炎患者，共35例。將其分型為輕型、普通型、重型、極重型，分期為初期、極期、恢復(fù)期、后遺癥期。其標(biāo)準(zhǔn)均按照人民衛(wèi)生出版社出版《傳染病學(xué)》第8版［10］的診斷、分型、分期標(biāo)準(zhǔn)。對照組：同時期在我院兒科住院的患兒，初診疑診為中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，通過腰穿術(shù)完善相關(guān)檢查，排除中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，共20例。排除標(biāo)準(zhǔn)：觀察組及對照組均排除顱內(nèi)腫瘤、腦外傷、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病等患者。

1.2 標(biāo)本采集及檢測方法觀察組極期患者及對照組均于無菌條件下行腰椎穿刺術(shù)，取腦脊液2 mL直接編號凍存，同時抽取同期靜脈血2 mL，待觀察組恢復(fù)期再取靜脈血2 mL，血液經(jīng)靜置、離心、取上清液、編號等處理后，存儲在-80℃冰箱待統(tǒng)一檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法（ELISA法）對觀察組和對照組血清及腦脊液中MIP-1α含量進(jìn)行檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)使用軟件SPSS 22.0。計量資料采用非參數(shù)檢驗或方差分析，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差或中位數(shù)（四分位數(shù)間距）即M（Q）表示。MIP-1α與乙腦病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性檢驗用Spearman秩相關(guān)分析。一元線性回歸分析MIP-1α在血清和腦脊液中的關(guān)系。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象臨床基本情況比較35例觀察組患者，其中男21例（60%），女14例（40%），平均年齡 3（1，6）歲；20例對照組患者中，男 8例（40%），女12例（60%），平均年齡3.5（0.48，6）歲。兩組的發(fā)病年齡及性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Z=0.943，χ2=0.164，P＞0.05，表1）。

表1 研究對象臨床基本情況比較Tab.1 Comparison of the basic clinical situation of the subjects M（Q1，Q3）

2.2 觀察組的臨床分型35例乙腦患者中，5例（14.29%）輕型，10例（28.57%）普通型，13例（37.14%）重型，7例（20.00%）極重型；對照組患者未進(jìn)行臨床分型。

2.3 MIP?1α在乙腦極期患者及對照組中的表達(dá)ELISA檢測MIP-1α在乙腦極期患者和對照組血清及腦脊液中的含量，結(jié)果提示與對照組比較，MIP-1α在乙腦極期患者腦脊液中明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-2.922，P＜0.05，表2）；但MIP-1α在血清中的含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-0.787，P＞0.05，表2）。

表2 乙腦極期與對照組MIP-1α水平對比Tab.2 Comparison of the level of MIP-1α betweenfastigium stage of JE and control group M（Q1，Q3）

2.4 MIP?1α在不同分型分期乙腦患者中的表達(dá)（1）以極期和恢復(fù)期血清MIP-1α含量比較，恢復(fù)期血清MIP-1α水平較極期降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=1.673，P=0.007，表3）。（2）極期各型患者血清中MIP-1α含量比較，極重型和重型分別都高于輕型和普通型，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=10.741，P=0.000，表4）。（3）極期各型患者腦脊液中MIP-1α含量比較，極重型高于輕型和普通型，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=5.433，P=0.004，表4）。

2.５ MIP?1α水平與乙腦嚴(yán)重程度的相關(guān)性通過Spearman秩相關(guān)分析，結(jié)果提示腦脊液MIP-1α、血清MIP-1α的含量與乙腦的嚴(yán)重程度均呈正相關(guān)（rs=0.744、0.765；P＜ 0.001）。

表3 乙腦極期與恢復(fù)期血清MIP-1α水平對比Tab.3 Comparison of the level of MIP-1α in serum between fastigium and recovery stage of JE M（Q1，Q3）

表4 乙腦極期血清和腦脊液MIP-1α水平對比Tab.4 Comparison of the level of MIP-1α in serum and cerebrospinal fluid in fastigium stage of JE x ± s，pg/mL

2.6 MIP?1α在血清和腦脊液中水平的相關(guān)性采用一元線性回歸分析血清與腦脊液中MIP-1α水平的相關(guān)性，結(jié)果提示二者存在線性關(guān)系，其回歸方程為y=167.532+0.391x，R2=0.718（x為血清MIP-1α含量，y為腦脊液MIP-1α含量，圖1）。

3 討論

流行性乙型腦炎是中樞神經(jīng)系統(tǒng)急性傳染病，自乙腦疫苗被納入國家免疫規(guī)劃以來，通過有計劃的接種，乙腦的發(fā)病有降低趨勢，但在流行地區(qū)仍有發(fā)病，有數(shù)據(jù)顯示，乙腦導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥可高達(dá)50%［11-12］。目前臨床尚不能通過常規(guī)的實驗室檢查指標(biāo)評估乙腦患者的病情和預(yù)后，故探索可監(jiān)測評估乙腦病情和預(yù)后的實驗室指標(biāo)，具有重要的臨床意義。MIP-1α是CC亞族趨化因子之一，通過與不同靶細(xì)胞上的受體結(jié)合，發(fā)揮多向的生物學(xué)效應(yīng)［13］。在炎癥反應(yīng)時，MIP-1α可由多種細(xì)胞分泌并趨化單核/巨噬細(xì)胞等到達(dá)炎癥部位發(fā)揮作用［14］。此外，其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、損傷、缺氧等情況下被大量的分泌釋放參與到病理過程中［8］。故在多種炎癥反應(yīng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，如血流感染、某些特異性感染、腦卒中、結(jié)核性腦膜炎中觀察到MIP-1α的高水平表達(dá)［15-18］，但在乙腦患者中相關(guān)報道甚少。本研究通過測定乙腦腦脊液及血清中MIP-1α的含量，以探討MIP-1α與乙腦的相關(guān)性及臨床意義。

圖1 MIP-1α直線回歸標(biāo)準(zhǔn)化殘差概率分布圖Fig.1 Standardized residual probability distribution map for linear regression of MIP-1α

對本研究中的一般資料進(jìn)行了對比分析，乙腦組和對照組在發(fā)病年齡和性別上差異無統(tǒng)計學(xué)意義，排除了性別和年齡的影響。通過實驗室檢測發(fā)現(xiàn)，乙腦極期腦脊液中MIP-1α含量高于對照組，極期血清MIP-1α含量高于恢復(fù)期，極重型極期腦脊液MIP-1α含量高于輕型和普通型，極重型和重型極期血清MIP-1α含量高于普通型和輕型，其原因可能是乙腦病毒對神經(jīng)組織的侵襲導(dǎo)致炎癥反應(yīng)，趨化因子在炎性條件下被誘導(dǎo)表達(dá)，透過血腦屏障進(jìn)入腦脊液和血液［19］，炎癥反應(yīng)越重，被表達(dá)釋放入腦脊液和血液中的趨化因子越多，因此，病情越重的乙腦患者，腦實質(zhì)炎癥程度越重，其釋放入腦脊液和血液中的MIP-1α含量亦越高，故MIP-1α的含量高低可評估乙腦的炎癥程度，且與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)［7］。ROHLWINK等［18］對結(jié)核性腦膜炎患兒腦脊液中的炎性標(biāo)志物進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)MIP-1α含量增高，引起彌漫性細(xì)胞浸潤和炎癥，從而導(dǎo)致更廣泛的腦組織梗死，說明MIP-1α與腦組織損傷密切相關(guān)，可作為腦組織損傷的標(biāo)志物。LIU等［20］通過對感染乙腦病毒的小鼠模型進(jìn)行研究，結(jié)果表明CCR2和CCR5拮抗劑對炎癥有明顯的抑制作用，使用CCR2和CCR5拮抗劑的小鼠存活率更高，達(dá)60%～70%，而其中的CCR5是MIP-1α的受體之一，這也從反面說明MIP-1α的含量高低可能與炎癥程度相關(guān)，可用于評估乙腦的病情嚴(yán)重程度。此外，本研究對比了乙腦極期患者與對照組血清MIP-1α的含量，結(jié)果提示二者無差異，分析其原因可能與對照組均為病例對照相關(guān)，本研究需進(jìn)行腦脊液檢測對比，而實際操作中無法對正常兒童進(jìn)行腰穿采集腦脊液，因此對照組均為疾病患兒，因高熱、抽搐等原因疑診中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染，從而行腰穿術(shù)，這些患兒雖最終排除中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染，但多數(shù)有外周組織系統(tǒng)的炎癥，ADAMIDI等［21］對滲出液和漏出液中的MIP-1α進(jìn)行對比研究發(fā)現(xiàn)，滲出液中MIP-1α含量較漏出液高，且肺結(jié)核等炎性疾病患者血清中MIP-1α含量較肺癌等非炎性疾病患者血清中MIP-1α含量高，說明MIP-1α在外周組織系統(tǒng)炎癥條件下亦可被表達(dá)分泌［7］，因此本研究中對照組與乙腦極期血清MIP-1α水平無差異。此外，進(jìn)一步對乙腦極期血清及腦脊液MIP-1α的含量進(jìn)行一元線性回歸分析，結(jié)果提示血清與腦脊液中MIP-1α的含量呈正相關(guān)，以血清中的含量預(yù)估腦脊液中的含量，臨床上在動態(tài)觀察病情時，可望多次采集血液標(biāo)本進(jìn)行評估以減少腰穿的次數(shù)。

綜上所述，本研究探討MIP-1α在乙腦患者腦脊液及血清中的含量及臨床意義，認(rèn)為腦脊液和血清MIP-1α含量與乙腦病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，恢復(fù)期血清MIP-1α含量較極期降低，可望通過動態(tài)觀察MIP-1α在血清中的水平評估乙腦患者的病情變化。但由于臨床實際情況受限，本研究病例數(shù)偏少，僅有疾病對照而無健康對照，且缺乏乙腦恢復(fù)期腦脊液標(biāo)本，待增大樣本量后，可再次進(jìn)行檢測研究，并動態(tài)觀察血清和腦脊液中的含量印證本實驗結(jié)果。