全銳

摘 要：館藏紙質書畫文物具有較高的收藏價值，但紙質書畫的較難保存，較易引發(fā)霉菌污染等情況的發(fā)生。對紙質書畫污染菌進行分離及鑒定，不但可以提高紙質書畫文物霉變防治工作的有效性，還能夠提高防治效果。文章提取貴州省博物館館藏紙質書畫文物上的霉菌，通過對霉菌形狀及特征的分析，提出分離與鑒定霉菌的相關方法。

關鍵詞：紙質書畫文物;霉菌;鑒定方法;分離

在我國歷史發(fā)展進程中，紙質書畫起到較為關鍵的作用。其不但能夠充分展現(xiàn)我國歷史風貌，還能夠凸顯我國特色歷史文化。但相比較其他材質文物，紙紙質書畫文物較易出現(xiàn)霉菌污染等情況。若無法對此種情況進行有效解決，會使其出現(xiàn)糟朽變質的現(xiàn)象，一定程度上影響紙質書畫文物的展示效果。

1 材料與方法

1.1 采集樣品

本次實驗提取的樣品來自貴州省博物館內部帶有霉斑的紙質書畫文物。一般情況下，霉斑多以棕褐色、黑色以及黃色的形式出現(xiàn)于紙質書畫文物的表面。在具體實驗過程中，需及時對霉菌進行取樣。此期間可采用一次性無菌拭子進行提取，提取方式按照單一擦拭規(guī)律進行。完成霉菌樣本采集后，將樣本放置于管器中，并在管器表面標明時間及編號。然后將霉菌樣本放置于冰盒中，對其進行分離培養(yǎng)。

1.2 霉菌的分離及純化

在實驗前期，需保證實驗在無菌環(huán)境下進行。首先，使用無菌剪刀對霉菌采樣時使用的拭子頭進行裁剪;其次，準備一只錐形瓶，在瓶內注入SDA液體;最后，將裁剪下來的拭子頭放至錐形瓶內進行霉菌培養(yǎng)。在實際培養(yǎng)期間，需注意霉菌較易出現(xiàn)菌膜等現(xiàn)象。為避免此現(xiàn)象的發(fā)生，在瓶內放置少量無菌玻璃珠。完成以上環(huán)節(jié)后，將錐形瓶放置于100r/min震蕩環(huán)境下進行培養(yǎng)，此期間溫度應保持在25℃左右。培養(yǎng)3天后即可對培養(yǎng)液進行稀釋處理，主要按照10倍配比，利用無菌去離子水進行處理。在整個實驗過程中，稀釋梯度的設置尤為關鍵，其不僅決定實驗的成敗與否，還影響最終的實驗準確性。因此，在進行稀釋梯度的設置期間，需按照10-2、10-3、10-4的比例來進行。與此同時，及時對稀釋液按照不同梯度及濃度進行針對性采集，采集數(shù)量應保持在200μL左右。將采集到的稀釋液均勻涂抹于葡萄糖瓊脂表面，然后將葡萄糖瓊脂放置于25℃溫度下進行培養(yǎng)。培養(yǎng)3天后，即可觀察到霉菌出現(xiàn)的分離現(xiàn)象。霉菌分離后，多呈現(xiàn)菌落形態(tài)，并且顏色較為多樣。在完成霉菌分離實驗后，即可對其進行純化處理。部分霉菌的產(chǎn)孢量相對較大，對于此類型霉菌，可進行劃線培養(yǎng)。若經(jīng)劃線培養(yǎng)后霉菌依然存在污染等情況，可加大劃線純化的次數(shù)，以達到霉菌純化效果。

1.3 觀察霉菌形態(tài)

在進行菌落形態(tài)的觀察期間，首先需對凍存后的瓷珠進行提取。大多瓷珠呈紅色，并且表面吸附了菌液。使用無菌鑷子進行夾取，夾取數(shù)量為1粒。將夾取的瓷珠放置于帶有葡萄糖瓊脂的平板表面，將平板放置于25℃環(huán)境下培養(yǎng)4天左右。在此期間定期對菌落現(xiàn)象進行觀察，針對菌落的外觀、濕潤度、顏色以及生長情況進行實時記錄。在觀察菌落顯微形態(tài)期間，將水作為主要浮載劑，用解剖針挑取菌落邊緣的菌絲。將挑取的菌絲放置于載玻片上，以順時針形式將載玻片表面的菌絲挑散。將蓋玻片放置于菌絲表面，用顯微鏡對其進行深層觀察，明確孢子以及菌絲在顯微鏡下的微觀形態(tài)，并將此形態(tài)進行拍照存儲。

1.4 提取霉菌基因組的DNA

完成霉菌純化工作后需及時對其進行培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境溫度保持在25℃。根據(jù)真菌DNA試劑盒的標準規(guī)定進行提取，首先準備離心管，保證離心管的儲存量為2mL。將200mg的真菌絲放置于離心管內部進行凍融，凍融次數(shù)為3～4次。然后將溶菌酶放置于離心管中，溶菌酶的總量要達到20μL。完成以上環(huán)節(jié)工作后，將離心管儲存于37℃的培養(yǎng)箱中。放置1天后，將離心管取出，放置于帶有55℃的水浴鍋內，再將100%的乙醇加入至離心管進行攪拌。最后經(jīng)收集管以及吸附柱的特殊處理得到DNA洗脫液。

2 結果與討論

2.1 分離純化及形態(tài)觀察

通過霉菌分離、純化，得到紙質書畫文物帶有的8株霉菌。經(jīng)對8株霉菌的對比及分析可發(fā)現(xiàn)，霉菌經(jīng)不同處理后的形態(tài)及顏色皆存在較大差異。霉菌顏色較為多樣，主要為黃、綠、灰等顏色，菌落整體呈絨毛及平展形態(tài)，部分菌落存在較強特性。大部分菌絲的高度較為發(fā)達，但仍有少部分菌絲并未見明顯生長趨勢。霉菌除具有吸附生長特性外，其中的木霉及曲霉皆有纖維素酶，并且二者的纖維素酶皆具有較強的高活性。纖維素酶能夠有效分解纖維素，在生物降解作用下，會對織物產(chǎn)生一定損傷，導致織物出現(xiàn)破損。與此同時，煙曲霉、黃曲霉以及黑曲霉皆會對紙質書畫造成損壞，使其出現(xiàn)脫色等現(xiàn)象。由此可見，上述霉菌種類皆將嚴重影響紙質書畫文物的存儲。

2.2 分子生物學鑒定結果

對提取的8株真菌進行實驗及鑒定可得，在8株霉菌中，帶有黃曲霉、大葉黃耆、尼日曲霉菌株及根瘤菌屬。表1是不同真菌在同源性對比下的不同數(shù)據(jù)。

傳統(tǒng)真菌種類相對較多，需依靠形態(tài)觀察才能對真菌結構進行深入分析。但就形態(tài)鑒定方法而言，此方法在實際鑒定期間需花費大量鑒定時間，需及時對菌落的顏色及形態(tài)進行實時觀察。同時，真菌形態(tài)存在較大差異性，針對其形態(tài)特征的研究相對復雜，并且受真菌培養(yǎng)環(huán)境及條件等方面影響，真菌鑒定結果缺乏準確性。為改變傳統(tǒng)形態(tài)學研究弊端，可利用分析生物學的研究方法對真菌進行系統(tǒng)分析。此方法能夠較大程度地彌補傳統(tǒng)形態(tài)學的不足，并且利用分子生物學所得到的序列同源性高達99%。由此可見，分子生物學具有較強實用性及準確性，應加大對此方法的研究力度。在霉菌實驗過程中，充分利用分子生物學中的分析技術，實現(xiàn)對真菌的有效鑒定及分類，進而為真菌研究提供有效參考依據(jù)。

3 結語

霉變是館藏紙質書畫文物主要的病害之一。為避免紙質書畫文物發(fā)生霉變，可利用霉菌鑒定等方法對霉菌種類進行分析，而后針對霉菌特點進行霉菌抑制劑的選擇。據(jù)實驗研究可得，霉菌種類相對較多，在霉菌的研究過程中，分子生物學能夠對其進行合理解析。因此，在實際研究過程中，可利用分析生物學檢定方法對霉菌菌株形態(tài)進行研究。同時在文物保護的相關工作中，合理將分子生物學鑒定技術融入其中，能夠有效提高分類鑒定的準確性，進而避免館藏紙質書畫文物出現(xiàn)霉菌等問題，從而為紙質書畫文物建立合理儲存空間。

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