孫瑜寧 張美麗 張恩東

鼻咽癌是1種在我國較常見的發(fā)生于鼻咽上皮的嚴(yán)重影響人身體健康的惡性腫瘤，發(fā)病率居各種常發(fā)惡性腫瘤第10位，死亡率居常發(fā)各種惡性腫瘤第9位[1]。鼻咽癌的發(fā)病原因多樣，目前國內(nèi)外的醫(yī)學(xué)工作者尚未給出明確的發(fā)病機制，腫瘤細(xì)胞的增值、侵襲和轉(zhuǎn)移是1個多步驟、多因素的過程，可能與人們的生活環(huán)境、生活習(xí)慣等有著密切的關(guān)系[2-3]。miRNA是1種長約18～24個核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA，其作用機制是通過與多個靶基因的不完全互補配對，通過轉(zhuǎn)錄作用抑制基因的表達(dá)[4-5]。在鼻咽癌的發(fā)展過程中，多個miRNA參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、分化、轉(zhuǎn)移等，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后。EMT是上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，是腫瘤細(xì)胞獲得侵襲和遷移能力的1種生物學(xué)過程。為更深入分析了解miRNA調(diào)控EMT機制對鼻咽癌細(xì)胞侵襲及遷移的影響，本次采取控制單一變量方法進行研究分析，為診斷治療鼻咽癌提供新的依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取自2013年5月至2017年5月本科室接診的226例患者為研究對象，確診為鼻咽癌并在本科室實施治療的患者158例，非鼻咽癌患者68例。患者年齡為35～75歲，平均年齡(57.7±8.6)歲。各組患者的年齡、身高、體重和病程等臨床資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 各組一般臨床資料比較

1.2 樣本納入排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：確診患者為鼻咽癌患者[6]；患者未患有影響本次研究的其他疾??；入本院之前未進行放療、化療、激素等治療；同意參加本次研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：患者診斷、治療等病歷資料不全者；手術(shù)之前經(jīng)評估腫瘤無法完整切除的患者；無法參與研究的；中途退出研究的。

1.3 研究方法

應(yīng)用細(xì)胞劃痕實驗檢測鼻咽癌患者和非鼻咽癌患者鼻咽癌細(xì)胞的遷移能力，使用上海蒲拓光電儀器有限公司生產(chǎn)的XS-10B型號倒置光學(xué)顯微鏡觀察腫瘤細(xì)胞形態(tài)，應(yīng)用MTT法檢測鼻咽癌和非鼻咽癌患者鼻咽癌細(xì)胞HNE1/DDP、HNE1針對不同濃度的順鉑(簡稱DDP，德州德藥制藥有限公司生產(chǎn))濃度表達(dá)水平。使用miRNA芯片技術(shù)檢測鼻咽癌細(xì)胞HNE1中miRNA的表達(dá)水平，采用熒光定量RT-PCR法檢測mRNA的水平，所有操作均由具有10年以上經(jīng)驗的醫(yī)師進行。

1.4 觀察指標(biāo)

觀察記錄患者的姓名、年齡、身高、體重、病程、腫瘤大小等基本信息，密切觀察患者病情變化，記錄患者手術(shù)過程中出現(xiàn)的不良反應(yīng)、手術(shù)時間等情況，及時監(jiān)測患者生化指標(biāo)，記錄患者治療效果和患者滿意度等指標(biāo)。

1.5 統(tǒng)計方法

應(yīng)用SPSS 18.0(Statistical Product and Service Solutions 18.0，統(tǒng)計產(chǎn)品與服務(wù)解決方案)軟件對采集到的數(shù)據(jù)資料作統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，均以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 順鉑對患者鼻咽癌細(xì)胞增殖能力的影響

兩組患者HNE1/DDP濃度分別為(28.59±0.92)μmol/l、(15.23±0.83)μmol/l，HNE1濃度分別為(5.36±0.35)μmol/l、(4.02±0.23)μmol/l，鼻咽癌患者明顯高于非鼻咽癌患者，鼻咽癌患者耐藥指數(shù)4.37，低于非鼻咽癌患者的5.68，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 鼻咽癌細(xì)胞的侵襲和遷徙情況

使用細(xì)胞劃痕實驗觀察患者的腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移情況，鼻咽癌患者的腫瘤細(xì)胞HNE1/DDP的遷移距離為1.1 mm，HNE1為0.4 mm，HNE1/DDP的侵襲距離為2.1 mm，HNE1為1.2 mm，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 患者發(fā)生EMT情況

使用顯微鏡觀察腫瘤細(xì)胞的形態(tài)，采用RT-PCR法檢測細(xì)胞標(biāo)記物情況，檢測結(jié)果顯示：HNE1細(xì)胞中間質(zhì)標(biāo)志分子的表達(dá)水平1.1，明顯低于HNE1/DDP水平12.3，中上皮標(biāo)志分子表達(dá)水平0.86，明顯高于HNE1/DD水平0.23。HNE1細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子snail等水平明顯低于HNE1/DDP水平，這即說明HNE1/DDP細(xì)胞相對于HNE1細(xì)胞發(fā)生了上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.4 鼻咽癌細(xì)胞中miRNA的表達(dá)水平

HNE1/DDP細(xì)胞相比于HNE1細(xì)胞有8個miRNA表達(dá)下調(diào)和17個miRNA表達(dá)上調(diào)(|LogFC|>2，F(xiàn)C為fold chagne的簡稱)，其中mir-10b-5p最具差異表達(dá)miRNA，其表達(dá)上調(diào)達(dá)到15倍，見表2。

表2 鼻咽癌細(xì)胞中miRNA表達(dá)情況

3 討論

近年來，我國癌癥發(fā)病人數(shù)及發(fā)病速度均在不斷增多和加快[7-9]。癌癥已經(jīng)成為嚴(yán)重影響和制約我國人民身體素質(zhì)發(fā)展的重要因素。影響癌癥發(fā)展的主要有腫瘤細(xì)胞分化程度、腫瘤細(xì)胞浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度等[10-11]。及早發(fā)現(xiàn)，及早治療，是能有效治療和控制癌癥的最為有效的方法[12]。但是，一般情況下，癌癥病人發(fā)現(xiàn)患病即為癌癥中晚期，給治療帶來極大困難。尤其是鼻咽癌，前期發(fā)現(xiàn)較難，患者一般在偶然檢查中發(fā)現(xiàn)，給患者及家屬帶來巨大的精神壓力和經(jīng)濟負(fù)擔(dān)[13]。能盡快而且很方便的診斷癌癥已是廣大醫(yī)護人員和患者的最大呼聲。近幾年，大量的醫(yī)護人員通過檢測miRNA在鼻咽癌組織中表達(dá)水平來診斷分析鼻咽癌及研究癌細(xì)胞的遷移變化[14]。順鉑是1種治療鼻咽癌較為有效的非特異性抗腫瘤藥物，在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的作用。腫瘤細(xì)胞耐藥與腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT密切相關(guān)，會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移。隨著科學(xué)技術(shù)和醫(yī)學(xué)水平的發(fā)展和提高，人們對癌癥的認(rèn)識正在逐步加深。

本次研究表明，患者的身高、體重、年齡、病程等分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義，對鼻咽癌細(xì)胞的分化、遷移等影響不明顯。兩組患者HNE1/DDP濃度分別為28.59±0.92、15.23±0.83，HNE1濃度分別為5.36±0.35、4.02±0.23，鼻咽癌患者明顯高于非鼻咽癌患者，鼻咽癌患者耐藥指數(shù)4.37，低于非鼻咽癌患者的5.68。使用細(xì)胞劃痕實驗觀察患者的腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移情況，鼻咽癌患者的腫瘤細(xì)胞HNE1/DDP的遷移距離為1.1 mm，HNE1為0.4 mm，HNE1/DDP的侵襲距離為2.1 mm，HNE1為1.2 mm。使用顯微鏡觀察腫瘤細(xì)胞的形態(tài)，使用RT-PCR法檢測細(xì)胞標(biāo)記物情況，檢測結(jié)果顯示：HNE1細(xì)胞中間質(zhì)標(biāo)志分子的表達(dá)水平1.1，明顯低于HNE1/DDP水平12.3，中上皮標(biāo)志分子表達(dá)水平0.86，明顯高于HNE1/DD水平0.23。HNE1細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子snail等水平明顯低于HNE1/DDP水平，這即說明HNE1/DDP細(xì)胞相對于HNE1細(xì)胞發(fā)生了上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。miRNA通過調(diào)控靶基因的表達(dá)，來影響腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、侵襲、遷移和死亡，而且與腫瘤細(xì)胞的耐藥性密切相關(guān)，HNE1/DDP細(xì)胞相比于HNE1細(xì)胞有8個miRNA表達(dá)下調(diào)和17個miRNA表達(dá)上調(diào)，其中mir-10b-5p最具差異表達(dá)miRNA，其表達(dá)上調(diào)達(dá)到15倍。這和國內(nèi)部分專家的研究結(jié)果基本一致[15-16]。

綜上所述，miRNA在鼻咽癌腫瘤細(xì)胞中差異化表達(dá)，在EMT和順鉑耐藥性中起重要作用，mir-10b-5p促進腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移，引發(fā)EMT的發(fā)生，為研究和治療鼻咽癌提供科學(xué)依據(jù)，為鼻咽癌患者提供準(zhǔn)確的治療時機，給患者及家屬減輕精神和經(jīng)濟負(fù)擔(dān)，同時，為廣大醫(yī)護人員積累了經(jīng)驗，可廣泛推廣應(yīng)用。