周小華，張 偉，黃志萍，張海忠，王炳南，湯建福，謝 恩

(1.福建生態(tài)工程職業(yè)技術(shù)學(xué)校，福建 福州 350008； 2.漳州市林業(yè)局，福建 漳州 363000；3.漳州長(zhǎng)泰巖溪國(guó)有林場(chǎng)，福建 長(zhǎng)泰 363900； 4.漳州平和天馬國(guó)有林場(chǎng)，福建 平和 363700)

大花序桉(EucalyptuscloezianaF.Muell)又名昆士蘭桉，為桉樹(shù)屬昆士蘭桉亞屬(Idiogenes)樹(shù)種，自然分布于澳大利亞，大喬木，高可達(dá)45 m，在土壤深厚、排水較好、潮濕的土壤上生長(zhǎng)良好[1]。具有較強(qiáng)的生長(zhǎng)潛力，尤其是后期生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)非常明顯，是優(yōu)良的大徑材培育樹(shù)種[2]。大花序桉木材黃褐色、紋理通直、結(jié)構(gòu)均勻、硬度高，廣泛用于家具、建筑、礦柱、坑木等[3]。但由于大花序桉引種的種源少，且開(kāi)花結(jié)實(shí)量較少，更重要的是，大花序桉與其它桉樹(shù)一樣，屬異花蟲(chóng)媒樹(shù)種，種內(nèi)容易雜交，子代分化嚴(yán)重。因此無(wú)性繁殖成為大花序桉良種繁殖的重要手段[4]。而大花序桉是難生根樹(shù)種，扦插生根極難[5]，因此組培繁育顯得尤為重要。目前國(guó)內(nèi)大花序桉組織培養(yǎng)研究雖有成功報(bào)道但仍處于實(shí)驗(yàn)室階段[5-8]。本試驗(yàn)在大花序桉誘導(dǎo)及增殖研究的基礎(chǔ)上，探討培養(yǎng)基種類、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類及濃度、生根苗閉瓶及開(kāi)瓶煉苗時(shí)間、移栽基質(zhì)等因子對(duì)大花序桉試管苗生根及移栽成活的影響，以期獲得大花序桉生根、移栽成活的最適條件。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料采用漳州市選育的大花序桉優(yōu)株莖段為外植體，經(jīng)誘導(dǎo)增殖后獲得的無(wú)根試管苗。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 壯苗培養(yǎng) 壯苗培養(yǎng)的目的是將經(jīng)過(guò)繼代增殖培養(yǎng)得到的組培苗進(jìn)一步培養(yǎng)，以改善部分瓶苗原有芽體細(xì)弱、矮小、葉片開(kāi)展?fàn)顟B(tài)差等狀況，為下一步提高芽體的生根率和成活率打下基礎(chǔ)，增強(qiáng)植株的抗性。

將經(jīng)過(guò)增殖培養(yǎng)獲得的叢生試管苗切成適當(dāng)?shù)拇笮?，接種到以改良MS+瓊脂5.5 g·L-1+蔗糖30 g·L-1為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度和不同種類的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的壯苗培養(yǎng)基上(表1)。

每處理每種配方33瓶，每個(gè)處理接種10～11瓶，重復(fù)3次，每重復(fù)樣本數(shù)約50株。在培養(yǎng)室溫度為(25±2) ℃，濕度為60%～70%，光照強(qiáng)度為1300～1500 lx，每日光照時(shí)間為12 h的條件下壯苗培養(yǎng)。

表1 壯苗培養(yǎng)試驗(yàn)設(shè)計(jì)及效果

*：培養(yǎng)基配方中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑單位為mg·L-1；所有培養(yǎng)基均添加蔗糖(分析純)30 g·L-1，瓊脂5.5 g·L-1。下同。

1.2.2 生根培養(yǎng) 采用經(jīng)壯苗培養(yǎng)后苗高2 cm左右的健壯芽苗作為生根材料，進(jìn)行生根誘導(dǎo)。以基本培養(yǎng)基、IBA、NAA、6-BA、IAA 5個(gè)因子為試驗(yàn)因素，其水平分別為：基本培養(yǎng)基(MS、1/2 MS、1/4 MS、1/2改良MS)、IBA(0、0.2、0.5、1.0 mg·L-1)、NAA(0、0.3、0.6、1.0 mg·L-1)、6-BA(0、0.1、0.3、0.6 mg·L-1)、IAA(0、0.05、0.1、0.5 mg·L-1)(表2)采用5因素4水平的L16(45)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)(表3)。

每處理每種配方33瓶，每個(gè)處理接種10～11瓶，每瓶接種3～5株芽苗(一般為4株)，重復(fù)3次，每重復(fù)樣本數(shù)約30～50株。在培養(yǎng)室溫度為(25±2) ℃，濕度為60%～70%，光照強(qiáng)度為1500～1800 lx，每日光照時(shí)間為12 h的條件下生根培養(yǎng)。

1.2.3 煉苗移栽

表2 生根培養(yǎng)試驗(yàn)因子水平表

1)煉苗。將生長(zhǎng)健壯、挺拔，根系生長(zhǎng)良好，株高>2 cm的健壯生根瓶苗移出培養(yǎng)室，置于室外(常溫下即可，一般煉苗室溫度控制在18～23 ℃為宜)，采用以下方式進(jìn)行煉苗試驗(yàn)：S1：閉瓶鍛煉3 d，開(kāi)瓶鍛煉0 d；S2：閉瓶鍛煉3 d，開(kāi)瓶鍛煉3 d；S3：閉瓶鍛煉3 d，開(kāi)瓶鍛煉6 d；S4：閉瓶鍛煉6 d，開(kāi)瓶鍛煉0 d；S5：閉瓶鍛煉6 d，開(kāi)瓶鍛煉3 d；S6：閉瓶鍛煉6 d，開(kāi)瓶鍛煉6 d；此外設(shè)一對(duì)照組，即直接將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出進(jìn)行移栽，不經(jīng)過(guò)煉苗階段。共計(jì)7個(gè)處理，隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)排列，重復(fù)2次。

煉苗后的試管苗小心從瓶?jī)?nèi)取出，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到已用0.1%高錳酸鉀消毒處理的煉苗移栽基質(zhì)中，注意移苗后最初30 d對(duì)幼苗的保溫、保濕。

2)移栽基質(zhì)選擇。煉苗后經(jīng)處理的試管苗移栽在細(xì)沙(T1)、田園土(T2)、加入鉀肥等混合基質(zhì)的花土(T3) 3種基質(zhì)上，隨機(jī)區(qū)組排列，重復(fù)3次。

1.3 數(shù)據(jù)收集及處理

用誘導(dǎo)增殖后獲得的無(wú)根試管苗接入生根培養(yǎng)基后，每3 d進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)，生根培養(yǎng)30 d時(shí)進(jìn)行生根情況調(diào)查，調(diào)查其初始生根時(shí)間、生根數(shù)量、長(zhǎng)度等；煉苗與移栽階段，每1～3 d觀察1次，煉苗約7～10 d左右調(diào)查其成活率；移栽30 d后調(diào)查統(tǒng)計(jì)其成活率。調(diào)查結(jié)果按下列方法統(tǒng)計(jì)相關(guān)指標(biāo)。

生根率(%)=生根株數(shù)/培養(yǎng)芽數(shù)×100%；煉苗成活率(%)=成活苗數(shù)/煉苗總數(shù)×100%；移栽成活率(%)=成活苗數(shù)/移栽總數(shù)×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 壯苗培養(yǎng)

將經(jīng)過(guò)繼代增殖培養(yǎng)獲得的叢生組培苗切成適當(dāng)?shù)拇笮?，接種到壯苗培養(yǎng)基中，光照培養(yǎng)至組培苗達(dá)到2 cm以上高度時(shí)再進(jìn)行生根培養(yǎng)試驗(yàn)。壯苗培養(yǎng)基的選擇主要是考慮減少細(xì)胞分裂素的刺激以促進(jìn)植株生長(zhǎng)為生根培養(yǎng)打下基礎(chǔ)。根據(jù)苗高長(zhǎng)至2 cm左右的時(shí)間及苗是否健壯、有無(wú)分枝等生長(zhǎng)情況現(xiàn)場(chǎng)判定壯苗效果，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，壯苗培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基配方為編號(hào)F8的改良MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1培養(yǎng)基。

2.2 生根培養(yǎng)

生根情況一般分為2種：一種是先在莖段基部產(chǎn)生愈傷組織，再?gòu)挠鷤M織中分化出不定根；還有一種是直接從莖段基部皮層生出不定根(圖1)。通過(guò)不同配方對(duì)生根效果的影響(表3)發(fā)現(xiàn)編號(hào)為G16的1/2 MS+IBA 0.5 mg·L-1+NAA 0.6 mg·L-1+IAA 0.1 mg·L-1生根效果最好，經(jīng)適當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)基配方后生根率可達(dá)86.9%以上，且主根發(fā)達(dá)，側(cè)根較多，枝葉長(zhǎng)勢(shì)較好。

表3 生根培養(yǎng)試驗(yàn)正交設(shè)計(jì)及效果

*：培養(yǎng)30 d時(shí)觀察生根培養(yǎng)結(jié)果。

2.3 煉苗移栽

2.3.1 不同煉苗方式對(duì)組培苗成活率的影響 從7種煉苗方式對(duì)組培苗成活率的影響比較來(lái)分析，不同的煉苗方式對(duì)組培苗成活率的影響明顯(表4)。編號(hào)為S3即閉瓶鍛煉3 d，開(kāi)瓶鍛煉6 d，以及編號(hào)為S6即閉瓶鍛煉6 d，開(kāi)瓶鍛煉6 d，此2種煉苗成活率最高，達(dá)到95%以上。

2.3.2 不同移栽基質(zhì)對(duì)移栽成活率的影響 從3種移栽基質(zhì)配方對(duì)比看，其中移栽成活率最高的為加入鉀肥等混合基質(zhì)的花土(T3)，其移栽成活率達(dá)96%以上，且木質(zhì)化程度最高，生長(zhǎng)健壯(表5)。

移栽一般在春季進(jìn)行，移栽后要加強(qiáng)管理(包括病蟲(chóng)害防治)，尤其是移栽后30 d內(nèi)應(yīng)注意保濕、保溫，以提高移栽成活率。

3 結(jié)論與討論

3.1 壯苗培養(yǎng)

通過(guò)壯苗培養(yǎng)試驗(yàn)得知，壯苗培養(yǎng)基的選擇主要是考慮減少細(xì)胞分裂素的刺激以促進(jìn)植株生長(zhǎng)，為生根培養(yǎng)打下基礎(chǔ)。通過(guò)試驗(yàn)壯苗培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基配方為編號(hào)F8的改良MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1培養(yǎng)基。

壯苗培養(yǎng)是大花序桉組織培養(yǎng)過(guò)程中一個(gè)重要的環(huán)節(jié)，經(jīng)過(guò)壯苗培養(yǎng)能夠有效提高試管苗的抗性，健壯其苗體，為生根培養(yǎng)做好準(zhǔn)備。在對(duì)大花序桉組培苗進(jìn)行壯苗培養(yǎng)的時(shí)候發(fā)現(xiàn)6-BA與NAA有協(xié)同作用，它們的協(xié)同作用只有通過(guò)調(diào)整NAA或6-BA的濃度來(lái)促進(jìn)其生長(zhǎng)，從而達(dá)到壯苗目的。

表4 不同煉苗方式對(duì)組培苗成活率的影響

表5 不同移栽基質(zhì)對(duì)移栽成活率的影響

3.2 生根培養(yǎng)

圖1 大花序桉生根培養(yǎng)效果

通過(guò)生根培養(yǎng)觀察分析可以看出，基本培養(yǎng)基、IBA、NAA、蔗糖對(duì)生根率的影響均較大。從不同配方對(duì)生根效果的影響發(fā)現(xiàn)編號(hào)為G16的1/2 MS+IBA 0.5 mg·L-1+NAA 0.6 mg·L-1+IAA 0.1 mg·L-1生根效果最好，經(jīng)適當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)基配方后生根率可達(dá)86.9%以上，且主根發(fā)達(dá)，側(cè)根較多，枝葉長(zhǎng)勢(shì)較好。

植物根的發(fā)生需要建立一種最佳的內(nèi)源生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素平衡。在許多植物種類的組織培養(yǎng)中，較低的細(xì)胞分裂素和較高的生長(zhǎng)素組合可以產(chǎn)生較佳的生根效果。而在實(shí)際操作中，絕大多數(shù)植物的生根都是可以根據(jù)各種生長(zhǎng)素的作用特點(diǎn)單獨(dú)或配合使用實(shí)現(xiàn)的。

3.3 煉苗移栽

從煉苗試驗(yàn)觀察看，編號(hào)為S3即閉瓶鍛煉3 d，開(kāi)瓶鍛煉6 d，以及編號(hào)為S6即閉瓶鍛煉6 d，開(kāi)瓶鍛煉6 d，此2種煉苗成活率最高，平均達(dá)到95%以上。在3種移栽基質(zhì)配方對(duì)比看，其中移栽成活率最高的為花土中加入鉀肥等的混合基質(zhì)(T3)，其移栽成活率高達(dá)96%以上，且木質(zhì)化程度最高，生長(zhǎng)健壯。

煉苗移栽失敗的原因主要有以下幾個(gè)方面：①煉苗方式和時(shí)間不當(dāng)；②根部附著的培養(yǎng)基未洗凈，根與移栽基質(zhì)未完全密接；③試管苗的葉表面保護(hù)組織細(xì)嫩不發(fā)達(dá)，葉結(jié)構(gòu)發(fā)育不全；④組培瓶苗光合能力較弱，葉綠體發(fā)育不完善，莖部木質(zhì)化不夠等。因此在煉苗初期應(yīng)注意提供最有利于植物生長(zhǎng)生根發(fā)芽的外界環(huán)境，如采取措施適當(dāng)增加環(huán)境的濕度，控制溫度在20 ℃左右，逐步增強(qiáng)光照，配制適宜的保濕透氣營(yíng)養(yǎng)豐富酸堿度適宜的移栽基質(zhì)等，讓植物體逐步適應(yīng)外界環(huán)境，提高煉苗移栽的成活率。

*：本項(xiàng)目得到漳州市林業(yè)局韓金發(fā)、何水東2位高級(jí)工程師；福建農(nóng)林大學(xué)陳禮光副教授；長(zhǎng)泰巖溪國(guó)有林場(chǎng)張友育高級(jí)工程師的大力支持與幫助。在此表示最誠(chéng)摯的謝意!