張悅

（河北省大廠回族自治縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 065300）

大廠縣某豬場同一批仔豬共30頭，40日齡時有24頭突然發(fā)病，體溫42℃左右，呼吸困難，拒絕進食，眼結(jié)膜潮紅、流淚，有漿液性鼻液，腹部、四肢、耳尖部位有出血性斑塊，接觸有反射性疼痛，四肢共濟失調(diào)，關(guān)節(jié)、蹄冠腫脹，排水樣糞便。立即采用青霉素鉀注射治療3d，病情未得到控制，12頭仔豬在發(fā)病6d后死亡，通過對病死豬解剖可見典型敗血癥變化，胸腹部和四肢內(nèi)側(cè)有出血斑塊，內(nèi)臟器官均有輕重不一的出血，初步診斷為疑似鏈球菌病。為了確診和防止該病的大規(guī)模爆發(fā)，技術(shù)人員進行了病原菌分離培養(yǎng)、鑒定，同時對分離出的病原菌進行了藥敏實驗。

1 實驗材料

在無菌操作下采取病死豬的心血、肝、脾及淋巴結(jié)；豬鏈球菌診斷血清與平板凝集抗原；藥敏紙片；實驗用家兔；培養(yǎng)基、化學(xué)試劑及微量發(fā)酵管等。

2 方法及結(jié)果

2.1 染色鏡檢

用采集的病料直接接觸片進行革蘭氏染色后，在顯微鏡下可見短鏈革蘭氏卵圓形或者陽性球形細菌，有形成的莢膜。

2.2 細菌分離培養(yǎng)

先將病料接種于血清肉湯進行增菌培養(yǎng)，然后再接種在血液瓊脂平板上，置于37℃溫箱中培養(yǎng)18～24h，觀察菌落形態(tài)及溶血類型，將培養(yǎng)好的菌進行革蘭氏染色在顯微鏡下觀察形態(tài)；而后將菌再接種血清肉湯，純化后放置4℃環(huán)境下保存，等待鑒定[1]。結(jié)果顯示，37℃培養(yǎng)24h后在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上形成乳白色、半透明，針尖大小的β溶血的菌落。在血清肉湯中先均勻混濁，后在試管底部形成沉淀，上部澄清，不形成菌膜。鮮血瓊脂、血清肉湯培養(yǎng)物涂片，可見革蘭氏染色陽性，多呈長鏈狀的球菌。

附表 病原菌的藥敏試驗結(jié)果

2.3 生化實驗

將病原菌分離培養(yǎng)并接種在不同的生化培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。其觀察結(jié)果顯示，分離的病原菌能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麥芽糖、覃糖、綿子糖、果糖和衛(wèi)矛醇，具有典型的豬鏈球菌特性，可以確定該病原菌為豬鏈球菌。

2.4 動物接種實驗

在血清肉湯中放入分離菌24h。選擇8只2.5kg左右的家兔，做兩組對照，其中4只家兔腹腔注射0.5ml的按比例稀釋的生理鹽水；另外的4只家兔注射生理鹽水。其結(jié)果顯示：接種分離菌的4只家兔體溫升高至41～42℃，有敗血癥，在36～90h內(nèi)死亡，死前出現(xiàn)扭脖的神經(jīng)癥狀，采取無菌解剖病變組織鏡檢，均見與原來死亡仔豬病料的細菌相同[2]，而另外4只家兔無異常，說明分離菌的致病力極強。

2.5 藥敏試驗

用常規(guī)紙片擴散法。藥敏紙片的種類有18種。挑取15個菌落24h內(nèi)肉湯純培養(yǎng)菌液，用滅菌的10倍稀釋的生理鹽水后，在無菌條件下，用細管吸取0.2ml于血清瓊脂平板上，玻璃棒將其涂布均勻，然后將藥敏紙片用鑷子將其貼在已接種被檢菌株的平板上，兩片之間的斷離以l～2cm，置于37℃溫箱培養(yǎng)18～24h觀察并記錄，結(jié)果見附表。

由此可知，15個致病菌菌落中，對阿米卡星(AN)高度敏感的有10個，占受試菌株的66.7%；對新霉素(N)高度敏感的為6個，占受試菌株的40.0%。在中度敏感的藥物中，青霉素(P)為5個，占受試菌株的33.3%，梭青霉素為6個，占受試菌株的40.0%。

3 結(jié)論

（1）通過染色鏡檢、細菌的分離培養(yǎng)、生化實驗和動物接種等一系列實驗室診斷方法斷定分離出的病原菌其形態(tài)、染色、培養(yǎng)特征及理化特性，符合鏈球菌的特點，最終確定為該豬場發(fā)生了鏈球菌病。

（2）藥敏試驗證明，鏈球菌對阿米卡星、新霉素高度敏感；對青霉素、梭青霉素中度敏感；對慶大霉素、麥迪霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、鏈霉素、卡那霉素低度敏感；對氧氟沙星、紅霉素、慶大霉素、氨芐西林、苯唑西林有抗藥性。如果做到選藥合理、用藥及時，劑量大，療程足，能有效降低發(fā)病率和死亡率；若拖延時間或療程不足治療效果不佳或轉(zhuǎn)為亞急性和慢性。