鄭超偉，李桂賢，李 敏，覃釗蘭

（廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530023）

腸易激綜合征（IBS）是一種功能性腸病，表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的腹痛，與排便相關(guān)或伴隨排便習(xí)慣改變。典型的排便習(xí)慣異常可表現(xiàn)為便秘、腹瀉，或便秘與腹瀉交替，同時(shí)可有腹脹／腹部膨脹的癥狀[1]。便秘型腸易激綜合征（IBS-C）是其中的一個(gè)亞型，其病理生理學(xué)基礎(chǔ)主要是胃腸動(dòng)力學(xué)異常和內(nèi)臟感覺異常，表現(xiàn)為獨(dú)立的腸功能紊亂性疾病，其特征是腸道壁無器質(zhì)性病變，但整個(gè)腸道對(duì)刺激的生理反應(yīng)有過度或反?，F(xiàn)象[2]。IBS-C的病因和發(fā)病機(jī)制尚不清楚，可能與多種因素有關(guān)。研究表明5-羥色胺（5-HT）作為神經(jīng)遞質(zhì)，其表達(dá)的升高與IBS-C的發(fā)生有重要關(guān)系[3]。加味柴芍六君顆粒為我院名老中醫(yī)李桂賢教授治療IBS-C的基本方，效果顯著。本實(shí)驗(yàn)旨在研究加味柴芍六君顆粒對(duì)大鼠結(jié)腸組織中5-HT表達(dá)的影響，以探討其對(duì)IBS-C治療的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)♂SD大鼠72只，體質(zhì)量（180±20）g，由廣西中醫(yī)藥研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。每只大鼠分籠獨(dú)立飼養(yǎng)，正常飼食、飲水，12h／12h晝夜交替。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

加味柴芍六君顆粒（柴胡10g，白芍15g，陳皮6g，法半夏10g，太子參10g，白術(shù)15g，蘇梗10g，牛膝15g，枳實(shí)15g，麻子仁15g，甘草6g）用江蘇省江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的免煎中藥，由我院制劑室配制成濃度為0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL的加味柴芍六君顆粒溶液。

枸櫞酸莫沙必利分散片（成都康弘藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20031110，規(guī)格5mg），成人每日常用量為15mg，相當(dāng)于大鼠1.5mg/kg。

半固體營(yíng)養(yǎng)糊的制備，取羧甲基纖維素5g溶于125mL蒸餾水中，并分別加入奶粉8g，白糖、淀粉各4g，活性炭末2g，攪拌均勻后配制成約150mL（約1g/mL）的黑色半固體糊狀物。

2 方 法

動(dòng)物模型的建立。適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，將72只大鼠隨機(jī)分為正常組，模型組，加味柴芍六君顆粒低、中、高劑量組及莫沙必利組各12只。除正常組外其余各組均用冰水灌胃法建立便秘型腸易激綜合征大鼠模型[4]。每只大鼠均用代謝籠分籠獨(dú)立飼養(yǎng)，正常飼食、飲水，12h/12h晝夜交替。模型組給予冰水（0℃～4℃生理鹽水）2mL，1日1次灌胃，共14天。正常組不灌胃，正常飼食、飲水。其余各組除冰水灌胃外也給予正常飼食、飲水。為消除生物節(jié)律的影響，均于上午8∶00開始灌胃，停止灌胃后各組繼續(xù)正常飼食、飲水。共14天。

給藥方法。造模成功后第2天開始給藥治療，模型組除常規(guī)喂養(yǎng)飼料外給予0.9%生理鹽水2mL，1日1次灌胃。加味柴芍六君顆粒低、中、高劑量組動(dòng)物在造模成功后，按低、中、高劑量分別給予加味柴芍六君顆粒溶液0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL（分別相當(dāng)于成人用量的6、12、24倍灌胃給藥，灌胃量按1mL/100g，每日1次）。莫沙必利組給予莫沙必利片1.5mg／kg灌胃，每日1次。每組均連續(xù)灌胃14天。

糞便顆粒數(shù)及含水量測(cè)定。每日分別收集每只大鼠灌胃后3h內(nèi)及3～24h間的大便，計(jì)大便粒數(shù)，電子天平稱濕質(zhì)量，微波烘烤8min后稱干質(zhì)量，計(jì)算大便含水量百分比。含水率=（濕質(zhì)量-干質(zhì)量）/濕質(zhì)量×100%。

小腸推進(jìn)試驗(yàn)。最后一次灌胃給藥后，各組大鼠禁食（不禁水）24h后，每只大鼠用灌胃針灌10%活性炭末混懸液2mL。30min后，2%戊巴比妥鈉溶液以腹腔注射麻醉，隨后打開腹腔，將幽門至回盲部完整取出。在不牽拉的前提下，把腸管平鋪成直線，測(cè)量小腸的全長(zhǎng)（幽門至回盲部）及炭末混懸液在小腸內(nèi)推進(jìn)的距離。推進(jìn)率=活性炭末混懸液移動(dòng)距離（cm）/小腸總長(zhǎng)度（cm）×100%，評(píng)估腸道推進(jìn)功能。

免疫組化法檢測(cè)5-HT的表達(dá)。結(jié)腸組織標(biāo)本用10%中性甲醛固定液固定，脫水后常規(guī)蠟塊包埋，制作4μm厚石蠟切片，按照SP法免疫組化試劑盒要求操作，同時(shí)以PBS代替一抗做陰性對(duì)照。光鏡下拍照，應(yīng)用Image-ProPlus6.0專業(yè)圖像分析系統(tǒng)，選取陽性細(xì)胞表達(dá)的積分光密度、平均光密度等項(xiàng)指標(biāo)對(duì)圖片進(jìn)行半定量分析。

用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

3 結(jié) 果

3.1 一般狀態(tài)觀察

正常組大鼠皮毛光澤色白，精神佳，活潑，飲食正常，大小便正常。

模型組大鼠造模初期表現(xiàn)為煩躁不安，易激惹，抓咬模具，不斷嘶叫。3天后活動(dòng)逐漸減少，精神萎靡不振，困倦嗜臥，反應(yīng)減慢，納呆，進(jìn)食量、飲水量減少，體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢。腹脹，皮毛枯黃無光澤，24h排便量減少，糞便干，糞便含水率降低。經(jīng)加味柴芍六君顆粒治療后，大鼠活動(dòng)增加，精神好轉(zhuǎn)，食量增多，體質(zhì)量增加，抓取時(shí)反應(yīng)靈敏，皮毛恢復(fù)光澤，大便正常。

用單因素方差分析（one-way ANOVA）對(duì)糞便顆粒數(shù)和含水率進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。各組間糞便顆粒數(shù)和含水率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.353，P=0.002；F=4.261，P=0.002）。用LSD（Least-significant Difference）法進(jìn)行多組均數(shù)間的兩兩比較。各組大鼠糞便顆粒及含水率比較見表1。

表1 各組大鼠糞便顆粒及含水率比較 （Mean±SE）

3.2 小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)

小腸推進(jìn)功能用推進(jìn)率進(jìn)行比較。小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)組間差異的檢驗(yàn)用單向方差分析（one-way ANOVA），組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=29.431，P=0.000），用LSD（Least-significant Difference）法進(jìn)行多組均數(shù)間的兩兩比較。各組大鼠小腸推進(jìn)率比較見表2。

表2 各組大鼠小腸推進(jìn)率比較 （Mean±SE）

3.3 免疫組化法檢測(cè)結(jié)腸組織中5-HT的表達(dá)

模型組大鼠結(jié)腸組織中5-HT含量較正常組升高（P＜0.05），加味柴芍六君顆粒各組、莫沙必利組大鼠結(jié)腸組織中5-HT含量較模型組減低（P＜0.05），加味柴芍六君顆粒各組大鼠結(jié)腸組織中5-HT含量較正常組升高（P＜0.05），加味柴芍六君顆粒各組之間結(jié)腸組織中5-HT含量未見明顯差異（P＞0.05）。各組大鼠結(jié)腸組織中5-HT的表達(dá)比較見表3。

表3 各組大鼠結(jié)腸組織中5-HT的表達(dá)比較

4 討 論

5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）信號(hào)通路在胃腸疾病的發(fā)生中占重要地位，它與多種胃腸道疾病包括炎癥性腸?。↖BD）、腸易激綜合征（IBS）和腸內(nèi)感染等有關(guān)。目前，5-HT受體激動(dòng)劑及拮抗劑等藥物治療胃腸疾病現(xiàn)如今運(yùn)用較廣泛，但會(huì)存在藥物不良反應(yīng)及藥物依賴性。而中醫(yī)藥作為一種綠色療法對(duì)胃腸疾病具有適應(yīng)癥廣，早期起效迅速，遠(yuǎn)期療效穩(wěn)定，多途徑調(diào)節(jié)，身心共治等優(yōu)點(diǎn)。目前及今后中醫(yī)藥調(diào)節(jié)胃腸疾病的機(jī)制研究備受關(guān)注。

IBS-C屬于中醫(yī)“便秘”“腹痛”“郁證”等范疇[5]。中醫(yī)認(rèn)為便秘多是由于飲食不節(jié)、情志失調(diào)、外邪犯胃、稟賦不足等原因引起，如《萬病回春?大便閉》謂：“身熱煩渴，大便不通者，是熱閉也；久病入虛，大便不通者，是虛閉也；因汗出多大便不通者，精液枯竭而閉也；風(fēng)證大便不通者，是風(fēng)閉也；老人大便不通者，是血?dú)饪菰锒]也；虛弱并產(chǎn)婦及失血，大便不通者，血虛而閉也；多食辛熱之物，大便不通者，實(shí)熱也?！逼錇闊峤Y(jié)、氣滯、寒凝、氣血陰陽虧虛引起的腸道傳導(dǎo)失司所致。其病位在腸，同時(shí)與肺、脾、肝、胃、腎等多臟腑的功能失調(diào)有關(guān)。李桂賢教授認(rèn)為其發(fā)生與“氣機(jī)升降失調(diào)”密切相關(guān)。情志不舒，肝氣郁結(jié)，肝脾（肝胃）失和，氣機(jī)阻滯，影響升降，阻礙大腸的傳導(dǎo)功能。由于氣機(jī)不暢，氣壅于大腸，使大腸之氣不得疏泄，易致傳導(dǎo)失司，糟粕蓄而不去發(fā)為便秘。而糟粕之物不得排出，會(huì)致毒邪內(nèi)生，又加重了腸道失司。

5-HT是一種廣泛分布的神經(jīng)遞質(zhì)，具有調(diào)節(jié)消化道功能作用。胃腸道腺腔底部的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞（EC）主要合成、分泌并再攝取外周神經(jīng)系統(tǒng)的5-HT。5-HT幾乎參與所有腸易激綜合征的病理生理過程[6]。5-HT的增加，一方面導(dǎo)致了內(nèi)臟傳入神經(jīng)及腸神經(jīng)系統(tǒng)的高敏感，并激活了多種神經(jīng)活性物質(zhì)，使參與腦-腸調(diào)節(jié)的化學(xué)信號(hào)異常表達(dá)。另一方面5-HT作用其各種受體，引起了腸道感知、運(yùn)動(dòng)及分泌的改變[7-8]。由此可見，5-HT在IBS-C發(fā)生發(fā)展中具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)中，加味柴芍六君顆粒能明顯增加模型大鼠糞便含水量，增加小腸推進(jìn)率，表明加味柴芍六君顆粒能夠促進(jìn)胃及十二指腸的消化活性，加強(qiáng)胃腸道的排空，加速小腸、大腸的蠕動(dòng)，從而縮短通過時(shí)間。加味柴芍六君顆粒可抑制5-HT在結(jié)腸組織中的表達(dá)，改善腸道高敏感性及動(dòng)力異常，可能為其治療IBS-C的機(jī)制之一。