閆生玲 屈麗娜 薛恩忠

原發(fā)性高血壓（essential hypertension，EH）是臨床最常見的慢性病之一，長期高血壓是心腦血管疾病的重要危險因素。近年來，有流行病學研究結(jié)果顯示EH發(fā)病不斷呈現(xiàn)年輕化趨勢，越來越多中青年人罹患該疾病[1]。有學者認為生活方式的改變可能是其主要原因；也有研究提出基因遺傳因素對中青年人發(fā)生EH所起到的作用值得進一步深入關(guān)注[2-4]。內(nèi)皮素作為迄今所發(fā)現(xiàn)的作用最強的縮血管因子，可通過與內(nèi)皮素受體（endothelin receptor type A，EDNRA）結(jié)合發(fā)揮縮血管作用，既往已有多項研究結(jié)果證實內(nèi)皮素生成增多或EDNRA活性異常均與高血壓的發(fā)生發(fā)展相關(guān)[5-7]。隨著分子生物學發(fā)展，有研究發(fā)現(xiàn)EDNRA基因多態(tài)性具有多種生物學功能，可能與動脈瘤、青光眼等疾病發(fā)生相關(guān)[8-10]。然而目前EDNRA基因多態(tài)性與EH相關(guān)性的研究相對較少，本研究以中國北方漢族中青年人作為觀察人群，比較EH患者與健康體檢者EDNRA基因多態(tài)性的差異，為臨床工作提供參考。

資料與方法

1.研究對象 選擇2015年1月至2018年1月，于我院心血管內(nèi)科治療的高血壓患者納入EH組。納入標準：①年齡＞18歲，≤45歲；②出生并長期生活于陜西地區(qū)的漢族人；③高血壓診斷符合2010中國高血壓防治指南[11]；④入組患者彼此無血緣關(guān)系。排除標準：①各種原因?qū)е碌睦^發(fā)性高血壓；②合并糖尿病、甲狀腺疾病、心力衰竭、心房顫動、心肌梗死或卒中、嚴重心律失常、嚴重肝腎功能障礙及惡性腫瘤病史；③妊娠期女性。本研究共納入338例EH患者，其中男性204例，女性134例，平均年齡（39.2±4.7）歲。根據(jù)所納入EH患者年齡、性別納入同時期于我院行健康體檢的志愿者300例作為對照組，其中男性175例，女性125例，平均年齡（39.1±4.3）歲。本研究通過本院倫理委員會審核批準，所有入組患者充分知情同意。

2.一般臨床資料采集 收集所有入組人員以下基本資料：①一般人口學資料，包括姓名、性別、年齡等；②一般生物學資料，包括體質(zhì)量、身高、血壓等，計算BMI；③生活行為方式，吸煙、飲酒等，本研究吸煙定義為平均每日至少吸煙1支，且至少連續(xù)1年；飲酒定義為平均每日飲白酒≥50 g，或紅酒≥150 g，或啤酒≥500 g，且至少持續(xù)1年。通過采集清晨空腹靜脈血，檢測患者血脂水平。所有調(diào)查員均經(jīng)統(tǒng)一培訓，并采用統(tǒng)一編制的問卷進行調(diào)查。

3.基因多態(tài)性檢測 采集清晨空腹時外周靜脈血3mL，采用氯仿飽和酚法提取全基因組DNA，采用聚合酶鏈反應聯(lián)合DNA直接測序法檢測EDNRA基因rs1801708和rs5335位點多態(tài)性。應用Primer5.0及Oligo6.0軟件進行引物設(shè)計及驗證，本研究所用引物由上海生共生物有限公司合成，rs1801708位點上游引物：5′-AAGAGGATGGGTTCCTCTGC-3′，下游引物：5′-CCCAGTCCCCGATAAGAAAG-3′；rs5335位點上游引物：5′-AACACAGACCGGAGCAGCCATA-3′，下游引物：5′-GGGTGTGGGAGTGAATTAAGGAAGAA-3′。嚴格按照常規(guī)PCR擴增操作流程進行操作，兩位點退火溫度分別設(shè)置為56℃和58.5℃。PCR產(chǎn)物采用美國ABI公司配套專用BigDye?Terminator v3.1 Kit試劑盒進行線性擴增，最后采用ABI 3730測序儀進行測序。

4.統(tǒng)計學處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件分析處理，本研究計量資料均服從正態(tài)分布，結(jié)果以均數(shù)±標準差表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗；計數(shù)資料結(jié)果以構(gòu)成百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗?；蛐头植疾捎肏ardy-Weinberg平衡定律檢驗。采用二分類多因素Logistic后退逐步回歸法評價EDNRA基因多態(tài)性與ACS的相關(guān)關(guān)系。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1.兩組患者基本臨床資料 兩組在BMI、收縮壓和舒張壓3項指標，差異具有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）；在性別、年齡、吸煙、飲酒、TG、TC、LDL-C及HDL-C等方面差異無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05），如表1。

2.基因分型及Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗結(jié)果 人群中EDNRA基因rs1801708和rs5335位點均存在三種基因型，本研究兩組研究對象此兩位點的基因型分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡（均P＞0.05），具有較好的群體代表性。

3.EDNRA基因多態(tài)性與EH的關(guān)系 如表2，EH組與對照組比較，兩組rs1801708位點基因型和等位基因分布頻率，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）；兩組rs5335位點基因型分布頻率，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），等位基因頻率分布，差異存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表1 兩組患者基本臨床資料[±s，n（%）]

表1 兩組患者基本臨床資料[±s，n（%）]

注：1 mmHg=0.133 kPa

項目 對照組（n=300）EH組（n=338） t/χ2值 P值男性/女性 175/125 204/134 0.269 0.604年齡/歲 39.1±4.3 39.2±4.7 0.306 0.763 BMI≥25 kg/m2 104（34.7） 190（56.2） 29.696 0.000吸煙 117（39.0） 137（40.5） 0.156 0.693飲酒 16（5.3） 26（7.7） 1.438 0.230高血壓病史/年 3.4±2.3 - - -收縮壓/mmHg 124.2±17.4 150.7±22.1 16.673 0.000舒張壓/mmHg 80.5±10.4 89.2±11.6 9.921 0.000 TG/（mmol/L） 1.4±0.6 1.5±0.7 0.849 0.408 TC/（mmol/L） 3.9±1.0 4.1±1.2 0.855 0.467 LDL-C/（mmol/L） 2.5±0.8 2.7±1.0 0.998 0.397 HDL-C/（mmol/L） 1.2±0.2 1.1±0.3 1.416 0.239

4.分層分析 進一步按照BMI將研究對象分為BMI＜25 kg/m2和BMI≥25 kg/m2兩層進行分析，結(jié)果顯示：對于rs1801708位點，在BMI＜25 kg/m2和BMI≥25 kg/m2兩層中，EH組和對照組基因型和等位基因分布頻率，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）。對于rs5335位點，在BMI＜25 kg/m2時，EH組基因型/等位基因分布頻率，在共顯性基因模型、隱性基因模型和等位基因模型下與對照組比較，差異均具有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）；在BMI≥25 kg/m2時，EH組與對照組比較在各種基因模型下，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05），見表3。

表2 EDNRA基因多態(tài)性與EH的關(guān)系[n（%）]

5.多因素分析 校正性別、年齡等混雜因素后，多因素分析結(jié)果顯示EDNRA基因rs5335位點C等位基因是陜西地區(qū)漢族中青年BMI＜25 kg/m2人群發(fā)生EH的保護性因素（OR=0.484，95%CI：0.361～0.836，P=0.007）。

表3 不同BMI分層分析結(jié)果[n（%）]

討 論

近年來，不斷有研究結(jié)果顯示基因遺傳因素可能與EH發(fā)生相關(guān)[2，4]。然而，不同研究在研究對象納入標準、排除標準多方面存在差異，所得的研究結(jié)果多數(shù)不能被復制，甚至有部分研究結(jié)果相互之間彼此矛盾。作者認為EH作為一種基因遺傳因素、環(huán)境因素和行為因素共同作用疾病，隨著患者年齡的增長，環(huán)境因素和行為因素在EH發(fā)病中所起到的作用愈多，基因遺傳因素的作用也逐漸被掩蓋，因此研究中青年EH患者基因遺傳因素與發(fā)病的相關(guān)性，對全面認識EH具有重大意義。

越來越多研究證據(jù)表明內(nèi)皮素與EH易感性相關(guān)，EH患者血清內(nèi)皮素-1水平顯著升高[12]。內(nèi)皮素參與EH發(fā)生的具體機制目前尚不明確，可能在于：首先，內(nèi)皮素的直接縮血管作用調(diào)控血壓變化；其次，有研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮素與血管內(nèi)皮細胞炎性反應相關(guān)，參與動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的病理改變過程，進而導致高血壓發(fā)生[13]；另外，還有研究結(jié)果提示內(nèi)皮素可通過直接介導機體鈉尿排除以參與血壓變化[14]。近年來，還不斷有研究結(jié)果顯示內(nèi)皮素相關(guān)基因多態(tài)性可能與EH易感性相關(guān)，已證實內(nèi)皮素-1基因存在Lys198Asn、TaqⅠ酶切位點等多個SNP位點與EH發(fā)生相關(guān)[15]。

內(nèi)皮素受體包括A、B、C三種亞型，在哺乳動物中表達的主要是A型和B型，兩者均在心血管組織中廣泛表達，但其生理功能存在顯著差異，EDNRA主要與內(nèi)皮素-1相互作用，介導縮血管作用，EDNRB介導舒張血管作用。人類EDNRA基因位于第4號染色體上，目前研究發(fā)現(xiàn)rs1801708、rs5335、rs5343、rs6841581等多個多態(tài)性位點均可能具有生物學意義，其中rs1801708和rs5335位點多態(tài)性被認為與多種心腦血管疾病關(guān)系密切[10，16]。如Lajemi等[17]以未治療的高血壓患者為研究對象，發(fā)現(xiàn)EDNRA基因的rsl801708位點G等位基因可增加脈搏波速率，提示EDNRA基因多態(tài)性影響動脈硬化的參數(shù)；Rahman等[18]發(fā)現(xiàn)rs5335位點每攜帶1個G等位基因可使收縮壓升高2.5 mmHg，舒張壓升高1.5 mmHg?；谏显V研究結(jié)果，作者認為有理由推測EDNRA基因多態(tài)性與EH易感性相關(guān)。

本研究以陜西地區(qū)漢族中青年人群為研究對象，結(jié)果顯示EH組和對照組比較，rs5335位點等位基因分布頻率，差異具有統(tǒng)計學意義，EH組患者C等位基因頻率明顯低于對照組；兩組rs1801708位點基因型、等位基因分布頻率，差異均無統(tǒng)計學意義。考慮兩組BMI存在差異，且一般認為BMI與血壓水平密切相關(guān)，本研究進一步按照BMI大小進行分層分析，結(jié)果顯示在BMI＜25 kg/m2時，EH組，rs5335位點基因型/等位基因分布頻率在共顯性基因模型、隱性基因模型和等位基因模型下與對照組比較差異均具有統(tǒng)計學意義；而在BMI≥25 kg/m2時，EH組與對照組比較在各種基因模型下其差異均無統(tǒng)計學意義。同時，研究結(jié)果顯示不同分層中，各種基因模型下均未發(fā)現(xiàn)EH組和對照組rs1801708位點基因型/等位基因分布頻率存在顯著差異。最后，本研究采用Logistics多因素回歸分析法，校正性別、年齡等混雜因素，結(jié)果顯示rs5335等位基因C是BMI＜25 kg/m2的中青年人群發(fā)生EH的保護性因素。

綜上所訴，本研究發(fā)現(xiàn)EDNRA基因rs5335位點多態(tài)性與中青年EH發(fā)病相關(guān)，尤其對于BMI＜25 kg/m2人群。最后，須指出本研究也存在不足之處，首先，本研究僅為單中心研究結(jié)果，納入樣本量相對較少，檢驗效能低，期待后續(xù)多中心大樣本研究結(jié)果加以驗證；其次，EH發(fā)病系多因素共同作用所致，EDNRA基因除此之外也還包括等多個多態(tài)性位點，對于其他因素，其他位點基因多態(tài)性以及彼此之間交互作用與EH易感性的關(guān)系，也期待后續(xù)進一步研究。