劉瑩 蔣敦科 李素艷 井潔 林瑤光

(廣西醫(yī)科大學(xué) 1第一附屬醫(yī)院老年消化內(nèi)科,廣西 南寧 530021；2第二附屬醫(yī)院老年消化內(nèi)科)

近年來(lái)，糖尿病與惡性腫瘤之間的關(guān)系越來(lái)越受到研究者的關(guān)注〔1〕。據(jù)統(tǒng)計(jì)在2型糖尿病患者伴發(fā)的惡性腫瘤中，消化系統(tǒng)腫瘤發(fā)病率為33.9%，居于首位，而其中結(jié)直腸癌發(fā)病率為7.68%，處于消化系統(tǒng)腫瘤的第2位，與非糖尿病人群相比發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)大幅提高〔2〕。糖尿病，特別是2型糖尿病患者結(jié)腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)升高的機(jī)制尚不完全清楚，但一般認(rèn)為可能與機(jī)體長(zhǎng)期處于高血糖狀態(tài)導(dǎo)致氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)及機(jī)體免疫功能底下有關(guān)，前者可促進(jìn)炎癥因子釋放誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生，后者可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞難以被免疫系統(tǒng)消滅〔3〕。2型糖尿病患者體內(nèi)中晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)及其受體(RAGE)在高血糖導(dǎo)致氧化應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮了重要作用。研究表明，AGEs可憑借RAGE進(jìn)入巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞，刺激氧自由基的產(chǎn)生，進(jìn)而促進(jìn)包括轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1在內(nèi)的多種細(xì)胞因子的釋放〔4〕。TGF-β1是一種重要的上皮細(xì)胞生長(zhǎng)負(fù)性調(diào)控因子，在包括結(jié)腸癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)〔5〕。本文擬進(jìn)一步探討AGEs-RAGE及TGF-β1在2型糖尿病患者結(jié)腸癌腫瘤發(fā)生中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2012年1月至2015年5月在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科住院治療的120例結(jié)腸腫瘤老年患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①納入病例均經(jīng)手術(shù)或結(jié)腸鏡取標(biāo)本進(jìn)行組織病理學(xué)檢查后確診，糖尿病患者符合WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)〔6〕；②獲取標(biāo)本前，患者未接受放、化療或靶向治療；③無(wú)其他系統(tǒng)惡性腫瘤，未發(fā)生惡病質(zhì)、嚴(yán)重感染等并發(fā)癥。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有1型糖尿病，妊娠期糖尿病或內(nèi)分泌疾病所致糖尿?。虎诎橛袊?yán)重心、肝、腎疾病或免疫系統(tǒng)疾病。按是否患有糖尿病及腫瘤的病理組織學(xué)類型分為糖尿病合并結(jié)腸癌組、結(jié)腸癌組及結(jié)腸腺瘤組，每組40例。糖尿病合并結(jié)腸癌組男29例，女11例，年齡61～81歲，平均(73.7±4.3)歲；結(jié)腸癌組男30例，女10例，年齡68～79歲，平均(74.4±4.5)歲；結(jié)腸腺瘤組男31例，女9例，年齡67～77歲，平均(72.0±5.2)歲。三組性別及年齡等一般資料分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性(P>0.05)?；颊呒凹覍賹?duì)研究的目的和方法知情同意并書面簽字。

1.2檢測(cè)方法 采用免疫組化法檢測(cè)結(jié)腸病理組織標(biāo)本中RAGE及TGF-β1表達(dá)水平。兔抗人多克隆RAGE抗體(貨號(hào)PB0530)、兔抗人多克隆TGF-β1抗體(貨號(hào)A00019)及免疫組化全套試劑均購(gòu)自武漢博士德公司。實(shí)驗(yàn)方法：將病理石蠟切片脫蠟置水后使用0.3%H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，使用10%的即用型血清封閉抗原，加入1∶100稀釋的一抗于4℃過夜，第二日復(fù)溫1 h，磷酸緩沖鹽溶液(PBS)洗后滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗兔二抗，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色后于顯微鏡下觀察，PBS終止顯色，蘇木素復(fù)染胞核，梯度酒精脫水，二甲苯透明，樹膠封片。每例設(shè)蘇木素-伊紅(HE)染色片及PBS代替一抗的陰性對(duì)照片供觀察，陽(yáng)性對(duì)照片由博士德公司提供。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例和著色程度，采用半定量法〔7〕對(duì)目的抗原在腫瘤組織中的表達(dá)情況進(jìn)行定量分析：在顯微鏡高倍鏡下(×200)隨機(jī)選擇5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞比例，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%計(jì)0分，5%～24%計(jì)1分，25%～50%計(jì)2分，51%～74%計(jì)3分，≥75%計(jì)4分；觀察切片陽(yáng)性細(xì)胞著色強(qiáng)度，無(wú)色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分；將這兩項(xiàng)得分相加后判定最終表達(dá)情況，0分為陰性(-)，1～2分為弱陽(yáng)性(+)，3～5 分為中等陽(yáng)性()，6～7 分為強(qiáng)陽(yáng)性()。

1.3隨訪 通過電話、信件、電子郵件、微信及QQ等多種方式對(duì)患者病情預(yù)后進(jìn)行隨訪，隨訪截止期為2017年5月，隨訪間隔為3個(gè)月。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)、Fisher確切概率法檢驗(yàn)或Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)，表達(dá)水平與臨床資料之間相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)，行Kaplan-Meier生存曲線分析。

2 結(jié) 果

2.1RAGE及TGF-β1在組織標(biāo)本中的表達(dá)情況 RAGE及TGF-β1在結(jié)腸癌及結(jié)腸腺瘤組織中均有表達(dá)，且主要定位于腫瘤細(xì)胞質(zhì)內(nèi)；三組RAGE及TGF-β1表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，糖尿病合并結(jié)腸癌組中RAGE及TGF-β1陽(yáng)性率與結(jié)腸癌組及結(jié)腸腺瘤組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見圖1，圖2，表1。

圖1 各組RAGE的表達(dá)(DAB，×200)

圖2 各組VEGF的表達(dá)(DAB，×200)

2.2RAGE及TGF-β1表達(dá)的相關(guān)性 RAGE及TGF-β1的表達(dá)在80例結(jié)腸癌組織標(biāo)本中存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.341，P=0.002)，見表2。

2.3RAGE及TGF-β1的表達(dá)與臨床資料的關(guān)系 RAGE、TGF-β1表達(dá)與結(jié)腸癌分化程度低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性、臨床分期(Duke分期)C期以上，細(xì)胞免疫功能低下(外周血T細(xì)胞總數(shù)及CD4+T細(xì)胞減少)、患者發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及生存期較短有關(guān)(P<0.05)，與年齡(≥70歲)、腫瘤直徑(≥4 cm)及癌細(xì)胞浸潤(rùn)達(dá)漿膜層無(wú)關(guān)(P>0.05)，見表3。

2.4RAGE及TGF-β1表達(dá)與生存期的關(guān)系 對(duì)全部患者隨訪至少2年，統(tǒng)計(jì)患者死亡時(shí)間，并根據(jù)RAGE及TGF-β1表達(dá)情況進(jìn)行分析，Kaplan-Meier生存曲線分析表明RAGE及TGF-β1均無(wú)表達(dá)患者中位生存期為20.6個(gè)月，單基因表達(dá)陽(yáng)性者中位生存期為16.3個(gè)月，RAGE及TGF-β1均陽(yáng)性患者中位生存期為5.9個(gè)月，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖3。

表1 RAGE及TGF-β1在三組的表達(dá)情況(n,n=40)

表2 RAGE及TGF-β1在結(jié)腸癌組織中表達(dá)相關(guān)性(n,n=80)

表3 RAGE及TGF-β1表達(dá)與臨床資料之間的關(guān)系〔n(%)〕

1)Fisher確切概率法

圖3 RAGE及TGF-β1表達(dá)與患者生存期之間的關(guān)系

3 討 論

糖尿病是一種由胰島素分泌相對(duì)或絕對(duì)不足導(dǎo)致慢性血糖升高，從而引起機(jī)體營(yíng)養(yǎng)及代謝紊亂，能夠累及全身所有系統(tǒng)的內(nèi)分泌-代謝性疾病，其發(fā)病率及各類相關(guān)并發(fā)癥發(fā)病率在我國(guó)有逐步上升的趨勢(shì)〔8〕。美國(guó)糖尿病學(xué)會(huì)及美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)聯(lián)合發(fā)布的報(bào)告指出，糖尿病可增加肝癌、結(jié)腸癌、子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，原因可能與患者不健康的生活方式有關(guān)〔9〕。隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平的提高，我國(guó)在糖尿病患病人口不斷增加的同時(shí)，結(jié)腸癌發(fā)病率和死亡率也不斷攀升〔10〕。糖尿病患者體內(nèi)的高血糖不僅可以為腫瘤細(xì)胞快速?gòu)?fù)制和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供足夠的能量支持，還可以通過將葡萄糖轉(zhuǎn)化為乳酸而引起正常細(xì)胞壞死、凋亡及膠原降解，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移〔11，12〕。

綜上所述，RAGE應(yīng)該作為結(jié)腸癌特別是合并糖尿病的老年患者的重要治療靶點(diǎn)而引起臨床重視。本研究也存在不足之處，例如僅從組織學(xué)角度對(duì)RAGE及TGF-β1表達(dá)的臨床意義進(jìn)行分析，沒有體外細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的進(jìn)一步支持，這將是未來(lái)進(jìn)一步的研究方向。