王卿

【摘 要】根據(jù)抗生素A無菌檢查結(jié)果異常調(diào)查的典型案例，全面梳理生產(chǎn)過程中的各個(gè)環(huán)節(jié)，分析潛在的微生物污染源，找出存在風(fēng)險(xiǎn)的遺漏點(diǎn)，并用實(shí)驗(yàn)加以證明。從而有針對(duì)性地采取糾偏和預(yù)防措施，完善產(chǎn)過程忽視物料的進(jìn)出環(huán)節(jié)和細(xì)小的操作陋習(xí)，規(guī)避污染風(fēng)險(xiǎn)，保證藥品質(zhì)量安全。

【關(guān)鍵詞】無菌檢查 偏差調(diào)查 生產(chǎn)過程

【中圖分類號(hào)】R954 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1005-0019（2019）05--01

無菌注射劑是用藥途徑無屏障，直接進(jìn)入患者循環(huán)系統(tǒng)的藥品，必須嚴(yán)格保證無菌。歷史上國內(nèi)外因藥品污染致死事件使人們?cè)缫咽熘涫芪⑸镂廴镜奈：π浴?006年的欣弗事件，使各無菌藥品及其原料藥的生產(chǎn)企業(yè)高度重視質(zhì)量管理，在生產(chǎn)和檢驗(yàn)環(huán)節(jié)嚴(yán)格把關(guān)，無菌檢查項(xiàng)目是否合格成為無菌藥品能否放行的的必要指標(biāo)之一，在保證患者用藥安全方面有著十分重要的意義。

然而無菌檢查方法存在的局限性。首先，樣品只能從統(tǒng)計(jì)概率上保證產(chǎn)品無菌合格。其次，微生物污染的不均勻性，檢驗(yàn)樣品完全破壞決定了無菌檢查結(jié)果難以重現(xiàn)。再則，從生產(chǎn)過程到無菌檢查操作出結(jié)果，涉及時(shí)間之長，操作細(xì)節(jié)之多，影響因素之眾，一旦無菌檢查結(jié)果出現(xiàn)異常（此處指定為供試品無菌培養(yǎng)結(jié)果陽性），其調(diào)查是非常繁雜，且根本原因不易明確的。但我們可以從已發(fā)生過的案例中吸取教訓(xùn)，舉一反三，設(shè)計(jì)合理全面的流程，進(jìn)行充分調(diào)查，盡量明確污染原因，這是質(zhì)量保證的要求，也是不斷完善，規(guī)避風(fēng)險(xiǎn)的要求。其調(diào)查的主要環(huán)節(jié)首先為微生物實(shí)驗(yàn)室，其次為生產(chǎn)過程。下面就兩個(gè)案例進(jìn)行分析說明。

（一） 案例回顧

產(chǎn)品名稱：**沙星注射液 （2010年）

生產(chǎn)周期：30天 生產(chǎn)批次：10余批次

異常結(jié)果：所有本輪生產(chǎn)批次的無菌檢查中，出現(xiàn)真菌陽性率約 50%，長菌時(shí)間在放入培養(yǎng)后6-8天，陽性形態(tài)為改良馬丁培養(yǎng)基中絮狀漂浮物，占二分之一罐體積。

（二） 調(diào)查過程

1 初步調(diào)查

（1）微生物實(shí)驗(yàn)室調(diào)查

（2）初步調(diào)查結(jié)論

由于雙倍復(fù)測結(jié)果無菌生長，且時(shí)值雨季，潔凈區(qū)空氣濕度高，無菌實(shí)驗(yàn)室在一樓，目測地板表面有明顯水汽附著，且墻面與地板銜接處的密封膠未完全覆蓋，雖然在沉降菌檢測中沒有菌落生長，但根據(jù)霉菌的特性，不能排除土壤中的霉菌在適宜條件滋生，使無菌檢測室環(huán)境受污染而導(dǎo)致樣品培養(yǎng)結(jié)果呈陽性。

（3）糾偏措施

采用大量75%乙醇消毒劑全面清潔工作臺(tái)面，頂棚墻面，回風(fēng)口，地面，后增加1%過氧乙酸噴灑和熏蒸。此后進(jìn)行潔凈區(qū)環(huán)境全面監(jiān)測。

（4）后續(xù)無菌檢查情況

在第一批樣品培養(yǎng)物出現(xiàn)陽性后，生產(chǎn)的10余批次間或出現(xiàn)培養(yǎng)物出現(xiàn)陽性，且其污染微生物生長形態(tài)接近，高度懷疑是生產(chǎn)過程導(dǎo)致污染，需進(jìn)一步調(diào)查。

2 深入調(diào)查

（1）生產(chǎn)過程調(diào)查

（2）易帶入污染要點(diǎn)分析：

① 原料無微生物控制指標(biāo)，存在進(jìn)廠原料微生物限度超標(biāo)風(fēng)險(xiǎn)。

② 脫外包操作過程粗放，存在污染內(nèi)包材的可能。稱量時(shí)倒料操作幅度大，抖動(dòng)內(nèi)包材時(shí)將菌體帶入藥粉容器。

③ 藥液過濾器使用前未滅菌，使用后用大量注射水沖洗后即放置，未充分干燥，殘留微生物滋生，污染后續(xù)產(chǎn)品。

④ 終端滅菌條件115℃ 30min，達(dá)不到過度滅菌（F0≥12）的要求

（3）針對(duì)可疑點(diǎn)進(jìn)行試驗(yàn)確認(rèn)

① 檢測過濾前藥液的微生物負(fù)荷，結(jié)果為30-50cfu/ml，細(xì)菌霉菌均有。

② 檢測所使用過濾器內(nèi)表面沖洗液霉菌≥1000cfu/ml。

③ 將檢測到的霉菌純化分離，挑取單個(gè)菌落于改良馬丁培養(yǎng)基中培養(yǎng)約20h，稀釋至菌濃度105，將培養(yǎng)液115℃ 30min滅菌后再次轉(zhuǎn)接培養(yǎng)于改良馬丁培養(yǎng)基中，2日后出現(xiàn)與樣品真菌培養(yǎng)罐中形態(tài)一致的陽性菌體。

（三）調(diào)查結(jié)論

（1）無菌檢查結(jié)果異常源于產(chǎn)品污染。

（2）污染源為原料或稱量操作帶入，富集于濾芯處；而濾芯清潔保存方法不當(dāng)，使用后僅使用注射水沖洗，靜置自然干燥。當(dāng)氣候條件適宜生長，嚴(yán)重污染過濾器及后續(xù)步驟。

（3）終端滅菌條件為非過度滅菌，濾后藥液中的殘存微生物未完全殺滅。

（四）糾偏措施

（1）相關(guān)批次產(chǎn)品全部報(bào)廢。

（2）更正過濾器使用方法：干燥后保存，使用前后測泡點(diǎn)，使用前濕熱滅菌，規(guī)定有效過濾量。

三 結(jié)論

通過該無菌檢查結(jié)果異常案例的調(diào)查過程及結(jié)果分析，可得出以下結(jié)論：

（1）微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)過程的疏漏可直接導(dǎo)致無菌檢查結(jié)果異常。為了規(guī)避和預(yù)防類似異常的發(fā)生，應(yīng)該全面梳理產(chǎn)品無菌檢查過程，對(duì)以往易忽視的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)增強(qiáng)控制。

① 無菌檢查的陰性對(duì)照管全面覆蓋用到的所有溶液。

② 嚴(yán)格規(guī)范集菌儀的操作順序。

③ 細(xì)化樣品前期消毒處理。

④ 記錄檢驗(yàn)過程中的突發(fā)狀況，分析其對(duì)結(jié)果的影響。

⑤ 重視菌落資料的搜集保存，尤其是真菌形態(tài)學(xué)檢查圖像及文字說明。

（2）在車間生產(chǎn)方面，除用“人、機(jī)、料、法、環(huán)”來規(guī)范生產(chǎn)管理體系外，還應(yīng)在動(dòng)態(tài)的生產(chǎn)流程中觀察有無遺漏的細(xì)節(jié)需要完善，起到補(bǔ)充和預(yù)防作用，列舉如下：

① 生產(chǎn)過程的生產(chǎn)工具如濾芯的滅菌存儲(chǔ)方法錯(cuò)誤會(huì)直接導(dǎo)致產(chǎn)品微生物污染。車間對(duì)每件關(guān)鍵生產(chǎn)設(shè)備及工具，如凍干機(jī)，凍干膜，濾芯，粉碎機(jī)配件，容器等的使用方法，除菌儲(chǔ)存應(yīng)該有詳細(xì)明確的文件規(guī)定。

② 對(duì)工藝和環(huán)境的重視比較多，而外源性污染的帶入也傾向于人員進(jìn)出方面，但對(duì)物料進(jìn)出方面不夠重視，應(yīng)在相關(guān)SOP中明確規(guī)定操作細(xì)節(jié)，消毒方式，消毒劑種類及作用時(shí)間等，盡量杜絕物料進(jìn)出引入污染。

③ 應(yīng)實(shí)驗(yàn)考察車間生產(chǎn)常用消毒劑75%乙醇，70%異丙醇，對(duì)真菌及其孢子的作用強(qiáng)度和時(shí)間，紫外線對(duì)真菌的殺滅作用，為普通環(huán)境進(jìn)入潔凈區(qū)處理程序，潔凈環(huán)境消毒維護(hù)提供科學(xué)依據(jù)。

④ 生產(chǎn)過程中也容易忽視人員操作的小細(xì)節(jié)，應(yīng)有專業(yè)人員定期檢查人員操作習(xí)慣，與產(chǎn)品質(zhì)量掛鉤，跟蹤評(píng)價(jià)其影響。

⑤ 生產(chǎn)抗生素的原料及配制液微生物負(fù)荷檢測是非常有必要的，其數(shù)量和種類能反映出生產(chǎn)過程中受到的微生物干擾程度和途徑。一旦發(fā)生無菌檢查異常，對(duì)進(jìn)行科學(xué)有效的偏差調(diào)查，縮短流程，得出結(jié)論有很大作用。

四 討論

（1）由于抗生素的抑細(xì)菌作用，其生產(chǎn)環(huán)境的微生物中真菌為優(yōu)勢菌，空氣及表面分布多數(shù)是酵母菌和絲狀真菌。目前沉降菌和表面菌的監(jiān)測使用TSA平板，雖然對(duì)細(xì)菌和真菌廣泛適生長，但就真菌而言，在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基生長速度和靈敏度明顯強(qiáng)于TSA，故可增加沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板做輔助監(jiān)測。

（2）抗生素污染菌以酵母菌和霉菌居多，但真菌的形態(tài)學(xué)檢查僅能提供粗略的分類，造成溯源難度高，對(duì)絲狀真菌，分子級(jí)別鑒定才能提供準(zhǔn)確依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

朱曉燕 陳偉盛 關(guān)倩明 藥品無菌檢查OOS結(jié)果的調(diào)查與分析處理[J]，中國藥事，2017，07

國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典[S].2015年版四部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015，1143