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        不同蒸制時(shí)間對(duì)三七總皂苷含量的影響

        2019-03-26 03:53:10馬敏敏萬(wàn)曉青
        浙江中醫(yī)雜志 2019年3期
        關(guān)鍵詞:冰醋酸試品皂苷

        馬敏敏 萬(wàn)曉青

        浙江醫(yī)院 浙江 杭州 310013

        本研究旨在明確不同蒸制時(shí)間對(duì)三七總皂苷含量的影響,從而確立三七理想的蒸制時(shí)間。

        1 材料

        1.1 藥材與試劑:生三七(批號(hào)130227,產(chǎn)地云南),購(gòu)自杭州華東中藥飲片有限公司;人參皂苷Rg1對(duì)照品(批號(hào)110703-201027,純度99%,中國(guó)藥品生物制品檢定所)。甲醇(批號(hào)201301201,上海振興化工一廠);乙酸(批號(hào)20130129,中國(guó)杭州化學(xué)試劑有限公司);高氯酸(批號(hào)20120626,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);香蘭素(批號(hào)20120928,上海雙香助劑廠);氫氧化鈉(批號(hào)20130328,杭州蕭山化學(xué)試劑廠);水為自制超純水(由純水儀制備),除標(biāo)明外其余試劑均為分析純。

        1.2 儀器:PerkinElmer Lambda45紫外分光光度計(jì)(美國(guó)珀金埃爾默公司);KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);MILLI-Q Synthesis A 10純水儀(美國(guó)Millipore公司);DZ30—32C10型離心機(jī);DG120型粉碎機(jī)(浙江省瑞安市春海藥材器械廠);DGG—9240A型立式電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);恒溫水浴鍋XMTE-2000型號(hào)R201D;FA2204B電子天平(上海精科天美科學(xué)儀器有限公司)。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 供試品溶液制備:取生三七飲片,均分為3等份各100g。置蒸籠中100℃下分別蒸制1、1.5、2h后取出,晾干,打粉,過(guò)3號(hào)篩。精確稱取上述三七粉末各100mg,置50ml錐形瓶中,精密加入60%甲醇15ml,超聲處理(100W,40℃)50min,取出,離心(3500r/min)15min。取上清液,用60%甲醇定容于25ml容量瓶中,搖勻即得。

        2.2 對(duì)照品溶液制備:精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品5.1mg于50ml容量瓶中,加60%甲醇溶解并稀釋到刻度,搖勻,即得到0.102mg/ml的人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液。

        2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定:精密移取對(duì)照品溶液及供試品溶液0.2ml于10ml具塞試管中,揮干溶劑,移入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml,高氯酸0.8ml,搖勻,于60℃烘箱中加熱15min,立即置冷水中冷卻,然后加入冰醋酸5.0ml,搖勻,放置15min,相應(yīng)試劑進(jìn)行空白對(duì)照,經(jīng)Lambda45紫外可見分光光度計(jì)在200~700nm范圍內(nèi)掃描,確定最大吸收波長(zhǎng)。如圖1所示。確定最大吸收波長(zhǎng)549.89nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

        2.4 方法學(xué)考察:分述如下。

        2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精密移取對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0ml,分別置于10ml具塞試管中,揮干溶劑,移入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml,高氯酸0.8ml,搖勻,于60℃烘箱中加熱15min,立即置冷水中冷卻,然后加入冰醋酸5.0ml,搖勻,放置15min,相應(yīng)試劑進(jìn)行空白對(duì)照,在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A,以A值為縱坐標(biāo)(Y),以相應(yīng)具塞試管人參皂苷Rg1含量(mg/ml)為橫坐標(biāo)(X),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:Y=28.412X-0.0612,r=0.999。表明人參皂苷Rg1含量在0.008~0.049mg/ml與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。

        2.4.2 儀器精密度實(shí)驗(yàn):取供試品溶液0.2ml,按

        2.4.1項(xiàng)下方法操作顯色,重復(fù)測(cè)定6次,計(jì)算RSD值為0.516%,符合精密度試驗(yàn)要求(RSD<2%)。

        2.4.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):取供試品溶液0.2ml,按2.4.1項(xiàng)下方法顯色,分別在10、20、30、40、50、60min測(cè)定吸光度,RSD值為0.792%,說(shuō)明顯色在60min內(nèi)穩(wěn)定。

        2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn):平行取供試品6份,按2.1中方法制備成供試品溶液,并且按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線法顯色,測(cè)吸光度,RSD值為0.31%,符合重復(fù)性試驗(yàn)要求(RSD<5%)。

        2.4.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液0.2ml,加入已知含量的皂苷供試品溶液中,按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定,平行5份,回收率為98.95±1.09%,RSD值為1.01%,符合加樣回收率試驗(yàn)要求(RSD<2%)。

        2.5 不同蒸制時(shí)間下三七中總皂苷含量測(cè)定:精密稱取不同蒸制時(shí)間下的三七樣品各100mg,按2.1項(xiàng)制備供試品溶液制備方法制備,并測(cè)定其中總皂苷含量。結(jié)果表明,以1h為最佳蒸制時(shí)間。見表1。

        表1 不同蒸制時(shí)間下三七中總皂苷的含量

        3 討論

        三七作為常用的活血化瘀藥,臨床多用于治療咯血、吐血、衄血、便血、胸腹刺痛、跌撲腫痛等多種病癥。近年來(lái)研究表明,三七生用有止血散瘀、消腫止痛之功,熟用有補(bǔ)血益氣、壯陽(yáng)散寒之效。有文獻(xiàn)顯示,蒸三七比生三七抗血小板聚集活性更強(qiáng),且蒸制時(shí)間越長(zhǎng),抗血小板聚集活性越強(qiáng)。本研究通過(guò)對(duì)不同蒸制時(shí)間下,生、熟三七中總皂苷含量的比較發(fā)現(xiàn),熟三七中總皂苷含量高于生三七;隨蒸制時(shí)間變化,熟三七中總皂苷含量呈現(xiàn)先升高后逐漸降低的趨勢(shì);其中以蒸制1h后所得熟三七中總皂苷含量最高,可作為臨床炮制應(yīng)用熟三七的參照蒸制時(shí)間。

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