鄭來萍 張憶聰 陳漢彪 鐘銀環(huán)

(廣東省婦幼保健院 醫(yī)學(xué)遺傳中心，廣東 廣州 511442)

染色體異常是造成胎兒發(fā)育遲緩、畸形、流產(chǎn)、死胎及其他先天性疾病的主要原因，產(chǎn)前診斷中最常見的染色體異常有染色體數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異常。雙著絲粒染色體屬于染色體結(jié)構(gòu)異常中一種。雙著絲粒染色體可能引發(fā)胎兒發(fā)育畸形。假雙著絲粒染色體一般多見于性染色體或者D組和G組染色體，6號染色體與14號形成假雙著絲粒染色體較為罕見。本文對1例胎兒發(fā)育異常來廣東省婦幼保健院醫(yī)學(xué)遺傳中心行產(chǎn)前診斷，進(jìn)行羊水相關(guān)檢查，討論假雙著絲粒染色體其發(fā)生機(jī)制和遺傳學(xué)診斷。

1 臨床資料

1.1 基本資料 女，22歲，孕24周，G1P0，超聲發(fā)現(xiàn)胎兒發(fā)育異?！，F(xiàn)前來本院醫(yī)學(xué)遺傳中心就診斷?，F(xiàn)病史：平素月經(jīng)規(guī)則，孕期順利，無不適，孕早、中期唐氏綜合征產(chǎn)前篩查低風(fēng)險。孕婦：MCV為91.9fl，HbA2為2.5% ，血型O型，傳染病一套(-)，甲狀腺功能(-)，G6PD(-)，凝血功能(-)。孕24周，廣東省婦幼保健院Ⅲ級產(chǎn)科彩色多普勒超聲：胎兒雙側(cè)腦室增寬(左側(cè)側(cè)腦室寬約10.1mm，右側(cè)側(cè)腦室寬約11.8mm)。胎兒頭顱MR平掃：雙側(cè)側(cè)腦室稍增寬(左側(cè)側(cè)腦室寬約13.7mm，右側(cè)側(cè)腦室寬約14.6mm)。簽署知情同意書后，在孕25+周進(jìn)行羊膜腔穿刺術(shù)抽取羊水細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)和分子細(xì)胞遺傳學(xué)檢查。羊水染色體核型結(jié)果：45,XN,pus dic(6;14)(q27;p11.2), 微陣列分析(CMA):6q27缺失。羊水21、18和13號及X/Y染色體QF-PCR(STR): 未見染色體數(shù)目異常。之后孕婦及丈夫行補充外周血染色體檢查，結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)異常。因胎兒發(fā)育異常和染色體畸變，遺傳咨詢后孕婦選擇行引產(chǎn)術(shù)。

1.2 檢查方法

1.2.1 細(xì)胞遺傳學(xué)檢查 孕婦預(yù)約孕25+周產(chǎn)前診斷，進(jìn)行羊膜腔穿刺術(shù)抽取羊水30ml，采用原位羊水細(xì)胞培養(yǎng)法培養(yǎng)，對培養(yǎng)后的羊水細(xì)胞原位收獲、G顯帶及核型分析，顯微鏡下計數(shù)≥15個細(xì)胞克隆， 分析至少5個核型，若有核型嵌合則增加計數(shù)，必要時重做并核對。核型分析過程中疑有假雙著絲粒易位染色體,加做C顯帶確認(rèn)。羊水染色體核型結(jié)果：45,XN,pus dic(6;14)(q27;p11.2)(圖1A)，C帶顯示14號染色體著絲粒是失活，6號染色體與14號染色體發(fā)生易位形成假雙著絲粒染色體(圖1B)。孕婦及丈夫外周核型結(jié)果分別為46,XX和46,XY(圖2)。

圖1 胎兒羊水細(xì)胞遺傳學(xué)檢查A:胎兒染色體G顯帶核型(箭頭示異常染色體)；B:胎兒染色體C顯帶核型(箭頭示異常染色體)

1.2.2 分子細(xì)胞遺傳學(xué)檢測 胎兒羊水細(xì)胞的檢測分別采用Affymetrix公司Cytoscan 750K芯片對全基因組已知基因區(qū)域的拷貝數(shù)變異進(jìn)行分析(CMA)和羊水21、18和13號及X/Y染色體QF-PCR檢測, 胎兒染色體微陣列分析(CMA)結(jié)果(根據(jù)人類細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名體制)：arr[hg19] 6q27(168,684,386-170,914,297)x1。結(jié)果顯示：發(fā)現(xiàn)6號染色體長臂末端6q27位置發(fā)生缺失，片段大小約2.2Mb,包含17個基因(圖3)。STR結(jié)果：未發(fā)現(xiàn)13、18、21號、X或Y染色體數(shù)目異常。

圖2 胎兒父母雙方細(xì)胞遺傳學(xué)檢查A、B.胎兒父母雙方外周血染色體G顯帶核型

圖3 胎兒微陣列結(jié)果(紅色區(qū)域表示缺失，藍(lán)色區(qū)域表示重復(fù))

2 討論

經(jīng)羊水體外原位細(xì)胞培養(yǎng)并G顯帶和C帶結(jié)合微陣列結(jié)果分析，提示胎兒6號染色體與14號染色體發(fā)生易位形成假雙著絲粒染色體；該6號染色體長臂末端6q27位置發(fā)生缺失，片段大小約2.2Mb，包含17個基因。6q末端缺失通常表現(xiàn)有精神運動發(fā)育遲滯、肌張力低及異常面部特征等(PMID:18947005、24056535)。夫妻雙方染色體均為正常，由此可以見胎兒這條衍生染色體為新發(fā)的，胎兒發(fā)育異?？赡芘c6號染色體發(fā)生缺失有關(guān)。雙著絲粒染色體是指兩條非同源染色體片段或兩條同源染色體片段斷裂和重接后形成。C顯帶證實，假雙著絲粒染色體(pseudodicentric chromosome，psu dic)中有呈現(xiàn)縊痕形態(tài)正常的著絲粒，而另一著絲粒是失活的，不呈現(xiàn)縊痕，僅表現(xiàn)為染色質(zhì)。其著絲粒失活可能和著絲粒復(fù)制不全有關(guān)[1]。14號染色體著絲粒不呈現(xiàn)縊痕著色為染色質(zhì)，6號染色體則有縊痕形態(tài)是正常的著絲粒，故6號染色體與14號染色體發(fā)生易位形成假雙著絲粒染色體。從遺傳學(xué)來看，2個著絲粒中只有一個是有活性的，才能保證細(xì)胞分裂的穩(wěn)定性。假雙著絲粒染色體形成機(jī)制至今不是很明確，有研究學(xué)者認(rèn)為姐妹染色單體在 G1 期發(fā)生部分?jǐn)嗔?，后斷裂部分?fù)制并于斷裂點處發(fā)生重接形成，也有學(xué)者認(rèn)為這一染色體結(jié)構(gòu)改變是由于姐妹染色單體在 S 或 G2 期發(fā)生等位斷裂，后于斷裂點處重接而成[2]。雙著絲粒染色體患者多具有出生缺陷和生殖異常。假雙著絲粒染色體攜帶者形成正常配子的概率與羅伯遜易位患者相似，有1/6概率產(chǎn)生正常配子，1/6概率產(chǎn)生假雙著絲粒配子，其余的均為不平衡配子[3]。

臨床G顯帶核型分析可以檢出非整倍體以及較大片段的染色體核型異常 (5～10Mb以上的缺失和重復(fù)平衡性的易位及倒位)，而對于假雙著絲粒染色體在斷裂和重接過程中可能會發(fā)生小片段基因重復(fù)或缺失,則無法明確斷[4]，故建議行染色體微陣列分析，此技術(shù)可以更準(zhǔn)確地檢測出基因組拷貝數(shù)的變化及斷裂點，進(jìn)一步檢測斷裂點及微小的缺失及重復(fù)，為產(chǎn)前診斷的發(fā)展提供了更準(zhǔn)確、高分辨率的檢測手段[5]。而G顯帶技術(shù)本身的局限性，不能對懷疑有雙著絲粒染色體的著絲粒是否失活作鑒別，故要加做C顯帶確認(rèn)。綜上所述的遺傳學(xué)檢查方法，明確本例胎兒染色體畸變的類型和發(fā)育異常的原因，對遺傳咨詢有重要的指導(dǎo)意義 。