張炎勝 陳婷婷 甘月濱 張福輝

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（Glucose-6-phosphate Dehydrogenase，G6PD）缺乏常見(jiàn)于我國(guó)長(zhǎng)江流域及其以南各省[1]，福建省也屬于高發(fā)區(qū)域，其是紅細(xì)胞磷酸戊糖代謝途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶，其催化反應(yīng)生成的還原型輔酶Ⅱ（NADPH）是谷胱甘肽還原酶的輔酶，還原型谷胱甘肽（GSH）的含量對(duì)于保護(hù)紅細(xì)胞膜、防止溶血具有重要意義[2]。G6PD的缺乏或者減少主要見(jiàn)于G6PD缺乏癥，故G6PD定量檢測(cè)試劑盒的性能驗(yàn)證有著重要意義。本實(shí)驗(yàn)室以中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)發(fā)布的2018醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床化學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明CNAS-CL02-A003為依據(jù)，制定了G6PD定量檢測(cè)試劑盒性能驗(yàn)證方案，包括正確度、靈敏度、參考區(qū)間和抗干擾能力驗(yàn)證。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

用于精密度驗(yàn)證的質(zhì)控物購(gòu)自北京利德曼生化股份有限公司（批號(hào)612241G、622241D），用于靈敏度驗(yàn)證，線性范圍驗(yàn)證，抗干擾能力驗(yàn)證的二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和參考品購(gòu)自利德曼。用于正確度驗(yàn)證的樣本來(lái)源于廈門(mén)市第一醫(yī)院。用于參考區(qū)間驗(yàn)證的樣本來(lái)源于我院體檢中心的正常體檢人群。

1.2 儀器和試劑

儀器使用美國(guó)貝克曼DXC800生化分析儀，試劑為利德曼萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）試劑盒，批號(hào)612231L，按實(shí)際說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3 方法

1.3.1 正確度 取20份不同濃度的樣本并與參加過(guò)原衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算出20份標(biāo)本的相對(duì)偏差。根據(jù)CNAS-CL02-A003要求，至少80%的標(biāo)本相對(duì)偏倚應(yīng)小于1/2 TEa，因此正確度通過(guò)判斷標(biāo)準(zhǔn)為：相對(duì)偏倚≤15%的個(gè)數(shù)所占比例應(yīng)大于80%。

1.3.2 靈敏度 取低值標(biāo)本進(jìn)行稀釋，每個(gè)稀釋梯度檢測(cè)10次，直至10次重復(fù)性變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）大于20%時(shí)，取CV＜20%的最大稀釋度檢測(cè)均值為靈敏度。

1.3.3 參考區(qū)間 參考CNAS-CL02-A003文件搜集男女各20例體檢健康人標(biāo)本，上機(jī)檢測(cè)每份標(biāo)本測(cè)定2次取均值，若90%的檢測(cè)值在廠家所提供的參考區(qū)間內(nèi)（＞1 300 U/L），則認(rèn)為參考區(qū)間為可接受。

1.3.4 抗干擾能力驗(yàn)證 配制不同濃度的干擾物溶液，將混合標(biāo)本（不含脂濁、溶血、黃疸）與不同濃度的干擾物溶液以4 ∶ 1比例混勻進(jìn)行測(cè)定；將混合標(biāo)本與去離子水以4 ∶ 1比例混勻，作為對(duì)照進(jìn)行測(cè)定。連續(xù)檢測(cè)3次，計(jì)算加入干擾物的混合標(biāo)本測(cè)值均值與對(duì)照樣品的偏差，偏差值應(yīng)小于10%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用%表示。

2 結(jié)果

2.1 正確度評(píng)估結(jié)果

我院與參加原衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)的廈門(mén)市第一醫(yī)院比對(duì)結(jié)果見(jiàn)表1。比對(duì)的20份標(biāo)本平均相對(duì)偏倚為2.33%，其最小相對(duì)偏倚到最大相對(duì)偏倚范圍為1.01%～3.63%，相對(duì)偏倚≤15%的個(gè)數(shù)所占比例為100%。

2.2 靈敏度評(píng)估結(jié)果

如表2所示，當(dāng)將低值樣本稀釋到1 ∶ 30時(shí)CV＞20%，取稀釋度1 ∶ 25時(shí)的檢測(cè)均值為靈敏度，因此靈敏度為1.03，符合試劑說(shuō)明書(shū)要求。

2.3 參考區(qū)間評(píng)估結(jié)果

G6PD在健康人群中為右偏態(tài)分布，因此統(tǒng)計(jì)方法采用百分位數(shù)，用40例健康人標(biāo)本數(shù)據(jù)驗(yàn)證結(jié)果的中位數(shù)為1 994 U/L，其最小值至最大值范圍為1 530～2 448 U/L，所選標(biāo)本的檢測(cè)值100%落在大于1 300 U/L參考區(qū)間范圍內(nèi)。

2.4 抗干擾能力評(píng)估結(jié)果

如表3所示，膽紅素＜400 μmol/L，VC＜3 g/L，HB＜3 g/L對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響。符合試劑說(shuō)明書(shū)要求。

3 討論

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥是由基因突變引起的遺傳性疾病，由于該基因?yàn)閄連鎖不完全顯性遺傳，G6PD基因位于X染色體長(zhǎng)臂2區(qū)8帶（Xq28）[3-4]，男性發(fā)病率高于女性[5-6]。全球約有4億多人受到影響[7]。G6PD缺乏是誘發(fā)伯氨奎啉類藥物性溶血、蠶豆病、新生兒病理性黃疸[8-9]、某些感染性溶血的主要原因。該病無(wú)法根治，但可以積極預(yù)防，對(duì)高發(fā)人群進(jìn)行該指標(biāo)的篩查，可以有效預(yù)防溶血癥的發(fā)生。進(jìn)行婚前體檢、優(yōu)生優(yōu)育[10]和有效預(yù)防新生兒黃疸有重要意義[11-12]。近年來(lái)又有研究顯示當(dāng)患者輸注G6PD缺乏的紅細(xì)胞時(shí)會(huì)引起不良反應(yīng)，可見(jiàn)G6PD檢測(cè)的重要性。

目前，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥檢測(cè)方法主要包括分光光度計(jì)比色法、酶活性定量分析和基于DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的分子篩查方法，其中酶活性定量分析可采用全自動(dòng)直接定量法檢測(cè)，樣本為經(jīng)過(guò)離心后的壓積紅細(xì)胞，直接檢測(cè)紅細(xì)胞膜上的G6PD，排除了定量比值法采用全血因紅細(xì)胞量少而導(dǎo)致G6PD活性結(jié)果降低的可能，也有效地減少了白細(xì)胞膜G6PD及血漿中游離還原性酶對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。該方法優(yōu)點(diǎn)是基本實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化分析，最大可能地減小了人為因素造成的誤差，標(biāo)本用量少、快捷，可快速進(jìn)行大批量標(biāo)本的檢測(cè)。葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒精密度＜5%，靈敏度高，可用于日立、奧林帕斯、貝克曼、西門(mén)子等市面上大部分常見(jiàn)的儀器，可廣泛應(yīng)用于臨床。

綜上所述，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒主要分析性能驗(yàn)證結(jié)果符合質(zhì)量目標(biāo)，能夠滿足臨床的質(zhì)量要求。對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)的性能進(jìn)行有效的評(píng)估，有助于提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

表1 G6PD正確度評(píng)估

表2 G6PD靈敏度評(píng)估

表3 G6PD抗干擾能力評(píng)估