李建鋒，李巍，史紫堉

（1．河南省浚縣人民醫(yī)院神經外科，河南 鶴壁 456250 2．鄭州大學醫(yī)學院，河南 鄭州 450001）

腦出血（ICH)是由腦血管破裂引起的非創(chuàng)傷性實質性出血，發(fā)病兇險，病情變化快，存活病人遠期多伴隨不同程度的繼發(fā)性腦損傷，嚴重影響患者的生活質量。研究表明，腦出血發(fā)生后，內皮細胞損傷，病變周圍腦組織的神經元受到刺激，核因子κB（nuclear factor kappa beta，NF-κB）通路被激活，導致血腫周圍腦組織發(fā)生嚴重炎癥反應，最終成為繼發(fā)性腦損傷的重要環(huán)節(jié)[1-4]。辛伐他汀是從土曲霉素降解產物中半合成的他汀類降脂藥物，研究表明，辛伐他汀可抑制腦血管疾病患者的炎癥因子表達，具有抗炎、抗調亡以及保護神經，減少腦組織水腫的作用[5-6]。但是辛伐他汀是否通過抑制NF-κB通路發(fā)揮減少炎癥損傷的作用還有待更進一步研究。為此，本研究通過建立SD大鼠的腦出血模型，給予辛伐他汀治療，以探討辛伐他汀對大鼠腦出血后繼發(fā)性炎癥損傷的防治作用及作用機制。

1 材料和方法

1.1 實驗動物和分組

選取9～12周齡的健康雄性SD大鼠60只，體質量（300±20）g。將 60只大鼠隨機分成三組：模型組、辛伐他汀組和對照組，各20只。大鼠飲食飲水正常，精神可。

1.2 腦出血模型制作

于模型組和辛伐他汀組大鼠右側腦組織基底神經節(jié)處注射新鮮自體不凝血，采用Fredrik法[7]建立腦出血模型。大鼠出現食水攝入減少、活動減少、體重減輕、精神萎靡等癥狀，腦組織切片中既存在明顯的血腫，又無血腫破入腦室，表示建模成功。

1.3 給藥

三組均常規(guī)灌胃給藥，qd，灌胃一周，辛伐他汀組給予辛伐他汀和生理鹽水配制的溶液，以3 mg/（kg·d）劑量給藥；模型組和對照組給予等體積的生理鹽水。

1.4 取樣

成功建立模型后的12，24，48，72 h和第7天，每組分別處死4只大鼠。大鼠斷頭取腦后迅速將血腫周圍腦組織冠狀切成厚約2 mm的薄片4片，2片用于干濕重法測定壞死腦組織含水量變化，剩余薄片用多聚甲醛固定，用于Nissl染色、免疫組化。

1.5 觀察指標

1.5.1 神經功能行為學評分 成功建模后的12，24，48，72 h和第7天，依照Garcia法對大鼠進行神經功能行為學評分。分數越低，表示大鼠神經功能障礙越嚴重。

1.5.2 未損傷的神經元數目 將固定后的腦組織薄片脫水、包埋和切片后進行Nissl染色。在光學顯微鏡（40×10）下，觀察連續(xù)6個無重疊的腦組織視野區(qū)，計算未損傷的神經元數目。

1.5.3 免疫組化觀察 NF-κB、Toll樣受體 4（TLR4）、白介素（IL）-1β的蛋白表達 將固定后的腦組織薄片脫水，包埋，切片和烤片后進行免疫組織化學分析。在光學顯微鏡（40×10）下，觀察連續(xù)6個無重疊的血腫周圍腦組織視野區(qū)，計數NF-κB、TLR4、IL-1β陽性細胞數目。

1.6 統(tǒng)計學方法

運用統(tǒng)計軟件SPSS 21.0分析數據，計量資料以“x±s”表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 神經功能障礙評分（NDS）結果

建模后所有時間點，辛伐他汀組與模型組NDS均低于對照組，辛伐他汀組NDS均高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 三組NDS比較

2.2 未損傷的神經元數目

建模后12，24，48，72 h與7 d辛伐他汀組未受損神經元數目均高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見圖1。

圖1 三組不同時間點病變周圍未受損神經元數目比較

2.3 三組損傷周圍腦組織中NF-κB，TLR4和IL-1β陽性細胞數目比較

建模后7天,辛伐他汀組和模型組NF-κB、TLR4、IL-1β陽性細胞數目均高于對照組，辛伐他汀組NF-κB、TLR4、IL-1β陽性細胞數目均低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 7 d后三組病變周圍腦組織中NF-κB，TLR4和IL-1β陽性細胞數比較

3 討論

研究人員建立腦出血大鼠模型并使用辛伐他汀干預治療，發(fā)現辛伐他汀可以降低神經元的死亡率，加強腦組織突觸的再生，改善大鼠的神經和認知功能[7]。在本實驗中，辛伐他汀組在建模后所有時間點的NDS和未受損神經元數目均顯著高于模型組（P＜0.05），表明辛伐他汀可有效改善腦出血大鼠的神經功能。

研究顯示，腦出血發(fā)生后病變周圍腦組織的神經元受到刺激，血腫周圍組織缺血缺氧，可激活NF-κB通路，導致繼發(fā)性炎癥損傷[1-3]。提示NF-κB通路在腦出血后繼發(fā)性炎癥損傷的過程中起關鍵性作用。TLR 4為一種模式識別受體，在缺血性腦損傷機體中表達顯著上調，并介導炎癥因子增加，誘發(fā)腦組織炎癥反應[8-9]。IL-Iβ可通過多種途徑參與腦損傷后繼發(fā)的炎癥反應，介導神經元壞死、缺失，是構成一系列病理變化及繼發(fā)性炎癥損傷的重要環(huán)節(jié)[10]。NF-κB可促進IL-1β等細胞因子的表達，同時這些細胞因子又可進一步活化NF-κB，造成持續(xù)或放大的炎癥反應[11]。有研究表明，辛伐他汀可有效降低TLR4通路介導的炎癥因子的表達[12]。本實驗中，辛伐他汀組建模7天后，NF-κB、TLR4和IL-1β陽性細胞數均顯著低于模型組（P＜0.05）。表明辛伐他汀可能通過下調TLR4介導的NF-κB信號通路的表達，抑制IL-1β的表達，緩解腦出血后繼發(fā)性炎癥損傷。

綜上，辛伐他汀可能通過下調TLR4介導的NF-κB通路，抑制IL-1β的表達，減輕炎癥反應，保護神經元，減少腦出血大鼠腦組織的繼發(fā)性炎癥損傷。