徐江昊 何建霄 文渚媛

【摘 要】

目的：研究丁香酚誘導(dǎo)癌相關(guān)成纖維細(xì)胞的凋亡及其機(jī)制。

背景：根據(jù)美國癌癥研究協(xié)會2017年發(fā)布的年度癌癥進(jìn)展報(bào)告，我們發(fā)現(xiàn)癌癥已經(jīng)成為一個(gè)嚴(yán)重的全球性問題，癌癥患者的數(shù)量正在增加。然而，傳統(tǒng)的癌癥治療方法面臨許多挑戰(zhàn)，因此我們的實(shí)驗(yàn)試圖研究有效的方法來解決癌癥問題。

方法：采用MTT 法檢測丁香酚對細(xì)胞活性的影響，采用Western blot法檢測丁香酚對相關(guān)凋亡蛋白的影響，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測丁香酚是否促進(jìn)了與癌相關(guān)成纖維細(xì)胞的凋亡。

結(jié)果：丁香酚對癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAF）有抑制作用。

1.研究背景

癌癥是世界范圍內(nèi)一個(gè)主要的公共衛(wèi)生問題，也是導(dǎo)致大多數(shù)國家人口死亡率居高的主要原因。然而，傳統(tǒng)的癌癥治療，包括手術(shù)、放療和化療，由于其副作用和高復(fù)發(fā)率，面臨著嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。因此，治療惡性腫瘤迫切需要安全有效的治療策略。

天然產(chǎn)物對藥物開發(fā)很重要，許多天然物質(zhì)的提取物，例如紫杉醇和MPSSS，都具有很強(qiáng)的抗腫瘤作用。丁香酚是從丁香中提取的精油主要成分，同時(shí)具有廣泛的藥理作用——參與免疫調(diào)節(jié)和抗炎反應(yīng)。丁香酚很早就開始作為防腐劑、抗菌劑和止痛劑被使用。美國食品和藥物管理局已經(jīng)宣布丁香酚是安全的，并且是非致癌和非誘變的。近年來，有多項(xiàng)研究證明了丁香酚對各種癌細(xì)胞系和動(dòng)物模型具有抗癌活性。

2.材料與方法

2.1材料

2.2方法

3.結(jié)果與分析

3.1 細(xì)胞毒性試驗(yàn)檢驗(yàn)丁香酚對細(xì)胞活力的影響

（1）用不同物質(zhì)的量濃度的丁香酚處理正常成纖維細(xì)胞（NF），24 小時(shí)后，用MTT 法檢測細(xì)胞活力。

（2）用相同物質(zhì)的量濃度梯度的丁香酚處理癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAF），24小時(shí)后，用MTT 法檢測細(xì)胞活力。

如圖3所示，數(shù)據(jù)表明，在0到1.2mM 濃度范圍內(nèi)，丁香酚對正常成纖維細(xì)胞活力沒有顯著性影響；而癌癥成纖維細(xì)胞隨濃度增加活性顯著降低，這說明丁香酚對腫瘤微環(huán)境中的成纖維細(xì)胞有選擇毒性。

結(jié)果表明，隨著丁香酚濃度的升高，癌相關(guān)成纖維細(xì)胞活力顯著下降。

3.2 流式細(xì)胞術(shù)——丁香酚促進(jìn)相關(guān)成纖維細(xì)胞凋亡

結(jié)果顯示（圖4、圖5），隨著丁香酚濃度升高，Annexin V 陽性（三、四象限）和早期凋亡（第四象限）細(xì)胞的比例不斷增大。

3.3.Western Blot——丁香酚對凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響

使用特異性抗體對凝膠電泳處理過的細(xì)胞組織樣品進(jìn)行著色。通過分析著色的位置和著色的深度，可以得知特定蛋白質(zhì)表達(dá)水平量。

（一）Bax 促進(jìn)腫瘤凋亡作用。

（二）BCL-2 （B-cell lymphoma-2） 是細(xì)胞凋亡中最受重視的癌基因之一。

（三）GAPDH 不受藥物處理的影響，作為內(nèi)參蛋白，即參照物。

如圖6，結(jié)果顯示，在0.6mM 情況下，隨著時(shí)間的推移，Bax 增值，BCL-2 顯著減少，GAPDH 幾乎沒有變化。

結(jié)論：初步說明丁香酚對癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞有抑制作用。