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        某規(guī)?;i場主要豬繁殖障礙性傳染病抗體檢測及分析

        2019-02-26 05:33:22吳圓圓屈勇剛于會舉楊慧敏谷思穎
        豬業(yè)科學(xué) 2019年1期
        關(guān)鍵詞:豬群日齡豬場

        宋 敏,吳圓圓,屈勇剛*,于會舉,楊慧敏,2,任 敏,魏 其,谷思穎

        (1.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院 ,新疆 石河子 832000;2.石河子市添元生物科技有限公司,新疆 石河子 832000)

        隨著新疆畜牧業(yè)的迅速發(fā)展,南疆養(yǎng)殖的規(guī)模也在逐年擴大,在生豬養(yǎng)殖數(shù)量日益增多的同時,豬只流動頻繁,疫病發(fā)生的條件變得愈加復(fù)雜。豬群的感染發(fā)病受諸多因素的影響,必須嚴(yán)密結(jié)合豬場生產(chǎn)狀況、發(fā)病特點和時間等具體情況進行免疫程序的制定或調(diào)整,科學(xué)制定的免疫程序需要依靠血清抗體水平的監(jiān)測[1]來配合。南疆某規(guī)?;i場生豬存欄2.8萬頭,其中母豬存欄共2?400頭。為了掌握豬群常見繁殖障礙性傳染病的整體抗體水平,采集307份血清樣品進行常見繁殖障礙性傳染病的抗體檢測和分析,以期為制定合理的免疫程序或調(diào)整免疫程序提供依據(jù),現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

        1 材料與方法

        1.1 血清樣品

        血清樣品共307份,其中0~10日齡仔豬12份、14日齡仔豬29份、25日齡保育豬29份、53日齡保育豬28份、103日齡育肥豬30份、145日齡育肥豬30份、妊娠30~60日母豬30份、妊娠90日母豬30份、哺乳母豬30份、后備母豬30份、種公豬29份。采血后自然凝固,分離血清,置4?℃冰箱保存待測。

        1.2 檢測試劑盒

        實驗采用的診斷試劑盒分別為99-43220豬瘟病毒(CSFV)ELISA抗體檢測試劑盒(批號:H931)、99-40959豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)ELISA抗體檢測試劑盒(批號:J051)、99-09836豬偽狂犬病gI(PRV-gE)抗體檢測試劑盒(批號:KM818),99-09732豬偽狂犬病 gB(PRV-gB)抗體檢測試劑盒(批號:HM634)均購自北京愛德士元亨生物科技有限公司。

        1.3 檢測方法與結(jié)果判定

        1.3.1 檢測方法

        按照上述ELISA試劑盒說明書對307份血清進行CSFV、PRRSV抗體水平的檢測,從所采集各類別豬群血清樣本中抽取20%進行PRV-gB和PRV-gE蛋白抗體水平的檢測。

        1.3.2 結(jié)果判定

        1.3.2.1??抗體陽性率測定

        對于CSFV,計算阻斷率,阻斷率=(陰性對照OD450nm平均值-樣品OD450nm值)÷陰性對照OD450nm平均值×100%。對于PRRSV,計算S/P值,S/P=(樣品OD650nm值-陰性對照OD650nm平均值)÷(陽性對照OD650nm平均值-陰性對照OD650nm平均值),S/P≥0.40判為陽性;S/P<0.40判為陰性。對于PRV-gB及PRV-gE,計算S/N比值,S=樣品孔OD650nm值,N=陰性對照孔平均OD650nm值,若S/N比值≤0.35,樣品判為陽性;S/N比值>0.4,判為陰性;S/N介于0.35和0.4之間,判為可疑。以上述判定標(biāo)準(zhǔn)對CSFV、PRRSV、PRV-gB三項抗體檢測結(jié)果進行判定。

        1.3.2.2??離散度計算

        各類別豬群抗體水平的離散度通過變異系數(shù)來反映,用SPSS?軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,計算平均數(shù)x-、標(biāo)準(zhǔn)差SD,變異系數(shù)C·V=(標(biāo)準(zhǔn)差SD÷平均數(shù)x-)×100%。

        2 結(jié)果

        2.1 該豬場4種抗體檢測結(jié)果

        307份血清樣品中豬瘟病毒抗體陽性率為81.11%(249/307),陰性率為12.70%(39/307), 可 疑 率 為 6.19%(19/307),阻斷率平均值為65.06%,離散度為37.69%。307份血清樣品中豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陽性率為90.23%(277/307),陰性率為 9.77%(30/307),S/P平 均 值 為 1.64, 離散度為52.69%。63份血清中豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體陽性率為95.24%(60/63),陰性率為0%(0/63),可疑率為4.76%(3/63),檢測平均S/N值為0.088,離散度為161.30%;63份血清中豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體陽性率為69.84%(44/63),陰性率為28.57%(18/63), 可 疑 率 為 1.59%(1/63),檢測平均S/N值為0.35,離散度為103.59%,結(jié)果見表1。

        表1 某規(guī)?;i場豬常見傳染病抗體檢測結(jié)果

        2.2 ?該豬場不同豬群的抗體水平檢測結(jié)果

        2.2.1 不同豬群血清中CSFV抗體水平(75.27±13.32)%、(57.15±27.88)%、(31.19±22.43)%、(63.26±20.06)%、(55.37±24.75)%、(68.44±18.06)%、(77.88±13.09)%、(75.21±20.50)%、(88.18±6.59)%、(68.42±15.46)%;抗體水平離散度分別為83.72%、17.7%、48.78%、71.92%、31.7%、44.69%、26.39%、16.81%、27.26%、7.48%、22.6%。實驗統(tǒng)計結(jié)果見表2。

        表2 不同類別豬群CSFV免疫抗體陽性率檢測結(jié)果

        2.2.2 不同豬群血清中PRRSV抗體水平

        對該豬場不同類別豬群的CSFV抗體水平進行分析發(fā)現(xiàn),0~10日齡仔豬、14日齡仔豬、25日齡保育豬、53日齡保育豬、103日齡育肥豬、145日齡育肥豬、妊娠30~60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬、后備母豬、公豬的抗體陽性率分別為:41.67%、96.55%、72.41%、21.43%、83.33%、76.67%、90%、100%、90%、100%、93.1%;阻斷率平均值分別為(31.57±26.43)%、

        對該豬場不同類別豬群的PRRSV抗體水平進行分析發(fā)現(xiàn),0~10日齡仔豬、14日齡仔豬、25日齡保育豬、53日齡保育豬、103日齡育肥豬、145日齡育肥豬、妊娠30~60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬、后備母豬、公豬的抗體陽性率分別為:50%、86.21%、72.41%、100%、100%、100%、90%、93.33%、86.67%、100%、93.1%;S/P平均值分別為1.15±1.18、0.88±0.39、0.74±0.53、2.35±0.28、2.34±0.53、2.38±0.62、1.42±0.65、1.32±0.69、1.16±0.69、2.59±0.29、1.41±0.59;抗體水平離散度分別為103%、44.2%、70.83%、11.86%、22.87%、25.92%、45.71%、52.31%、59.28%、11.18%、41.65%。統(tǒng)計結(jié)果見表3。

        2.2.3 不同豬群血清中PRV-gB蛋白抗體水平

        對該豬場不同類別豬群的PRV-gB蛋白抗體水平進行分析發(fā)現(xiàn),0~10日齡仔豬、14日齡仔豬、25日齡保育豬、53日齡保育豬、103日齡育肥豬、145日齡育肥豬、妊娠30~60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬、后備母豬、公豬的抗體陽性率除145日齡育肥豬抗體陽性率為66.67%外,其余豬群抗體陽性率均為100%;S/N 平 均 值 分 別 為 :0.036±0.007?6、0.029±0.030、0.030±0.0011、0.11±0.11、0.17±0.11、0.37±0.31、0.036±0.014、0.030±0.0012、0.031±0.0019、0.067±0.023、0.031±0.0019;抗體水平離散度分別 為:20.82%、104.55%、3.78%、100.7%、62.12%、83.08%、38.69%、3.99%、6.21%、33.56%、6.12%。 實驗統(tǒng)計結(jié)果見表4。豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體水平曲線圖見圖1。

        2.2.4 不同豬群血清中PRV-gE蛋白抗體水平

        對該豬場不同類別豬群的PRV-gE蛋白抗體水平進行分析發(fā)現(xiàn),0~10日齡仔豬、14日齡仔豬、25日齡保育豬、53日齡保育豬、103日齡育肥豬、145日齡育肥豬、妊娠30~60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬、后備母豬、公豬的陽性率分別為:100%、100%、100%、83.33%、0%、0%、100%、66.67%、66.67%、100%、83.33%;S/N平均值分別為:0.18±0.081、0.13±0.12、0.33±0.12、0.42±0.25、0.88±0.11、0.92±0.090、0.061±0.015、0.30±0.38、0.36±0.43、0.15±0.070、0.20±0.36;抗體水平離散度分別為:45.19%、91.19%、35.31%、59.29%、12.59%、9.71%、23.99%、126.2%、117.84%、45.63%、180.3%。實驗統(tǒng)計結(jié)果見表4。豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體水平曲線圖見圖2。

        3 分析與討論

        3.1 該豬場4種抗體檢測結(jié)果

        從整體看豬群CSFV、PRRSV、PRV-gB蛋白抗體水平陽性率較高,免疫防控效果較好,均在80%以上,大于吳群等檢測的粵西地區(qū)3種豬病病毒的平均合格率[2],根據(jù)具體情況應(yīng)對陰性豬只或抗體水平低的豬只進行補免。PRV-gE蛋白抗體陽性率為69.84%,離散度較高,提示豬群可能存在PRV野毒感染;豬場應(yīng)對豬偽狂犬病野毒防控引起重視,從圖1可以看出豬群部分豬只抗體低影響了豬群抗體整齊度,應(yīng)時刻觀察仔豬、保育豬有無站立時后肢打顫,明顯麻痹癥狀伴抽搐、癲癇等[3]癥狀。

        3.2 該豬場不同豬群的抗體水平分析

        3.2.1 不同豬群血清中CSFV抗體水平分析

        0~10日齡仔豬陽性率只有41.67%,離散度為83.72%,14日齡陽性率為96.55%,說明有部分剛出生仔豬獲得母乳抗體較少,需加強飼養(yǎng)管理,多關(guān)注搶不到奶頭的小豬,若臨床有仔豬發(fā)病需及時隔離處理。有研究表明,提升母豬分娩時的抗體含量可提高仔豬母源抗體水平[4]。25日齡時,抗體阻斷率從14日齡的(75.27±13.32)%下 降 到(57.15±27.88)%, 說 明首免時間定在此時間段后,較為合適,避免母源抗體干擾[5];53日齡豬群陽性率為21.43%,阻斷率下降至(31.19±22.43)%,離散度較大,說明抗體水平整齊度低,需配合保健增強抵抗力,盡快進行豬瘟二免提高豬群抗體水平;育肥豬陽性率分別為83.33%、76.67%均保持較高水平;陰性豬只是否存在漏免現(xiàn)象,需結(jié)合臨床情況具體分析,對于抗體水平較低的豬只可進行補免,1個月后再次采血檢測抗體,仍為陰性進行淘汰[6];后備母豬、公豬豬瘟的免疫防控效果良好,整齊度高。

        表3 不同類別豬群PRRSV免疫抗體陽性率檢測結(jié)果

        表4 不同類別豬群PRV抗體陽性率檢測結(jié)果

        3.2.2 不同豬群血清中PRRSV抗體水平分析

        本次檢測中,53日齡保育豬、育肥豬、后備母豬免疫抗體陽性率最高,為100%,離散度相對穩(wěn)定,但S/P值>2.5的比例也相對較高,應(yīng)根據(jù)臨床觀察是否有PRRSV毒血癥等癥狀發(fā)生;妊娠30~60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬的陽性率分別為90%、93.33%、86.67%,產(chǎn)后母源抗體呈下降趨勢,離散度分別為45.71%、52.31%、59.28%逐漸增大;0~10日齡仔豬的PRRSV抗體陽性率最低,只有50%,其中S/P值>2.5的樣品份數(shù)占25.00%,離散度為103%,14日齡仔豬和25日齡保育豬陽性率分別為86.21%、72.41%,S/P平均值較低分別為0.88±0.39、0.74±0.53,抗體水平整齊度不佳,表明在采樣時,疫苗免疫后仔豬群體內(nèi)抗體水平尚未上升到穩(wěn)定水平,經(jīng)過保健等綜合防控措施,53日齡后的豬群中抗體達(dá)到穩(wěn)定水平;后備母豬100%,S/P值為2~2.5樣品數(shù)為30.00%,S/P值>2.5的樣品份數(shù)占66.67%,離散度為11.18%,抗體整齊度較高,說明后備母豬經(jīng)過入群前馴化達(dá)到理想效果,抗體水平穩(wěn)定于可抵御豬藍(lán)耳病野毒的較高水平,但仍需加強飼養(yǎng)管理,密切關(guān)注高抗豬群日常生長狀況[7];公豬群陽性率為93.1%,離散度為41.65%,需對抗體較高豬只進行重點觀察,必要時對其精液進行病毒抗原檢測[8],避免因精液中帶有病毒,導(dǎo)致相互感染傳播[9]。對抗體較低豬只進行補免。由于間接ELISA只能檢測出抗體水平高低,卻不能鑒別是疫苗毒與野毒,需時刻關(guān)注S/P值>2.5的豬只生長狀況,并通過日常飼養(yǎng)管理,減少病毒傳播可能。

        圖1 某規(guī)?;i場豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體水平

        圖2 某規(guī)?;i場豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體水平

        3.2.3 不同豬群血清中PRV-gB蛋白抗體水平分析

        豬偽狂犬病毒只有一種血清型,越早讓仔豬進行滴鼻免疫,疫苗毒會搶先與機體的天然靶位產(chǎn)生“占位效應(yīng)”,降低野毒感染風(fēng)險[10]。0~10日齡仔豬、14日齡仔豬、母豬和公豬的S/N平均值維持在0.1以下,且抗體整齊度較高表明免疫效果較好;14日齡仔豬、53日齡保育豬、育肥豬陽性率較高,但離散度較大,其中145日齡豬陽性率為66.67%,需加強免疫。

        3.2.4 不同豬群血清中PRV-gE蛋白抗體水平分析

        從本次抽檢結(jié)果看,該豬場PRV-gE蛋白抗體陽性率較高,公豬陽性率為83.33%,母豬中后備母豬與妊娠30~60日母豬陽性率為100%,妊娠90日母豬及哺乳母豬陽性率為66.67%,提示野毒感染比較普遍,有研究表明[11-13]各省份豬場PRV-gE蛋白抗體陽性率呈逐年上升趨勢。本次檢測哺乳仔豬與母豬PRV-gE蛋白抗體陽性率較接近,0~25日齡仔豬陽性率為100%、53日齡為83.33%、之后育肥豬陽性率為0%,PRV-gE蛋白抗體逐漸降低,這與段群棚等[14]調(diào)查結(jié)果相符,其原因很可能是來自母豬感染野毒后的母源抗體在仔豬群內(nèi)隨時間逐漸消失。免疫缺失疫苗后豬群臨床無明顯發(fā)病癥狀,這與左玉柱曾表示“如果母豬gE抗體陽性,仔豬在7~8周齡之前為陽性,其后逐漸轉(zhuǎn)陰性,說明仔豬偽狂犬病疫苗免疫是有效的,使仔豬沒有再感染偽狂犬野毒”結(jié)論一致[1]。

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