宋 敏，吳圓圓，屈勇剛*，于會舉，楊慧敏,2，任 敏，魏 其，谷思穎

（1.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院 ，新疆 石河子 832000；2.石河子市添元生物科技有限公司，新疆 石河子 832000）

隨著新疆畜牧業(yè)的迅速發(fā)展，南疆養(yǎng)殖的規(guī)模也在逐年擴(kuò)大，在生豬養(yǎng)殖數(shù)量日益增多的同時，豬只流動頻繁，疫病發(fā)生的條件變得愈加復(fù)雜。豬群的感染發(fā)病受諸多因素的影響，必須嚴(yán)密結(jié)合豬場生產(chǎn)狀況、發(fā)病特點和時間等具體情況進(jìn)行免疫程序的制定或調(diào)整，科學(xué)制定的免疫程序需要依靠血清抗體水平的監(jiān)測[1]來配合。南疆某規(guī)?；i場生豬存欄2.8萬頭，其中母豬存欄共2?400頭。為了掌握豬群常見繁殖障礙性傳染病的整體抗體水平，采集307份血清樣品進(jìn)行常見繁殖障礙性傳染病的抗體檢測和分析，以期為制定合理的免疫程序或調(diào)整免疫程序提供依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

血清樣品共307份，其中0～10日齡仔豬12份、14日齡仔豬29份、25日齡保育豬29份、53日齡保育豬28份、103日齡育肥豬30份、145日齡育肥豬30份、妊娠30～60日母豬30份、妊娠90日母豬30份、哺乳母豬30份、后備母豬30份、種公豬29份。采血后自然凝固，分離血清，置4?℃冰箱保存待測。

1.2 檢測試劑盒

實驗采用的診斷試劑盒分別為99-43220豬瘟病毒（CSFV）ELISA抗體檢測試劑盒（批號：H931）、99-40959豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）ELISA抗體檢測試劑盒（批號：J051）、99-09836豬偽狂犬病gI（PRV-gE）抗體檢測試劑盒（批號：KM818），99-09732豬偽狂犬病 gB（PRV-gB）抗體檢測試劑盒（批號：HM634）均購自北京愛德士元亨生物科技有限公司。

1.3 檢測方法與結(jié)果判定

1.3.1 檢測方法

按照上述ELISA試劑盒說明書對307份血清進(jìn)行CSFV、PRRSV抗體水平的檢測，從所采集各類別豬群血清樣本中抽取20%進(jìn)行PRV-gB和PRV-gE蛋白抗體水平的檢測。

1.3.2 結(jié)果判定

1.3.2.1??抗體陽性率測定

對于CSFV，計算阻斷率，阻斷率=（陰性對照OD450nm平均值-樣品OD450nm值）÷陰性對照OD450nm平均值×100%。對于PRRSV，計算S/P值，S/P=（樣品OD650nm值-陰性對照OD650nm平均值）÷（陽性對照OD650nm平均值-陰性對照OD650nm平均值），S/P≥0.40判為陽性；S/P＜0.40判為陰性。對于PRV-gB及PRV-gE，計算S/N比值，S＝樣品孔OD650nm值，N＝陰性對照孔平均OD650nm值，若S/N比值≤0.35，樣品判為陽性；S/N比值＞0.4，判為陰性；S/N介于0.35和0.4之間，判為可疑。以上述判定標(biāo)準(zhǔn)對CSFV、PRRSV、PRV-gB三項抗體檢測結(jié)果進(jìn)行判定。

1.3.2.2??離散度計算

各類別豬群抗體水平的離散度通過變異系數(shù)來反映，用SPSS?軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計算平均數(shù)x-、標(biāo)準(zhǔn)差SD，變異系數(shù)C·V=（標(biāo)準(zhǔn)差SD÷平均數(shù)x-）×100%。

2 結(jié)果

2.1 該豬場4種抗體檢測結(jié)果

307份血清樣品中豬瘟病毒抗體陽性率為81.11%（249/307），陰性率為12.70%（39/307）， 可 疑 率 為 6.19%（19/307），阻斷率平均值為65.06%，離散度為37.69%。307份血清樣品中豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陽性率為90.23%（277/307），陰性率為 9.77%（30/307），S/P平 均 值 為 1.64， 離散度為52.69%。63份血清中豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體陽性率為95.24%（60/63），陰性率為0%（0/63），可疑率為4.76%（3/63），檢測平均S/N值為0.088，離散度為161.30%；63份血清中豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體陽性率為69.84%（44/63），陰性率為28.57%（18/63）， 可 疑 率 為 1.59%（1/63），檢測平均S/N值為0.35，離散度為103.59%，結(jié)果見表1。

表1 某規(guī)?；i場豬常見傳染病抗體檢測結(jié)果

2.2 ?該豬場不同豬群的抗體水平檢測結(jié)果

2.2.1 不同豬群血清中CSFV抗體水平（75.27±13.32）%、（57.15±27.88）%、（31.19±22.43）%、（63.26±20.06）%、（55.37±24.75）%、（68.44±18.06）%、（77.88±13.09）%、（75.21±20.50）%、（88.18±6.59）%、（68.42±15.46）%；抗體水平離散度分別為83.72%、17.7%、48.78%、71.92%、31.7%、44.69%、26.39%、16.81%、27.26%、7.48%、22.6%。實驗統(tǒng)計結(jié)果見表2。

表2 不同類別豬群CSFV免疫抗體陽性率檢測結(jié)果

2.2.2 不同豬群血清中PRRSV抗體水平

對該豬場不同類別豬群的CSFV抗體水平進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，0～10日齡仔豬、14日齡仔豬、25日齡保育豬、53日齡保育豬、103日齡育肥豬、145日齡育肥豬、妊娠30～60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬、后備母豬、公豬的抗體陽性率分別為：41.67%、96.55%、72.41%、21.43%、83.33%、76.67%、90%、100%、90%、100%、93.1%；阻斷率平均值分別為（31.57±26.43）%、

對該豬場不同類別豬群的PRRSV抗體水平進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，0～10日齡仔豬、14日齡仔豬、25日齡保育豬、53日齡保育豬、103日齡育肥豬、145日齡育肥豬、妊娠30～60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬、后備母豬、公豬的抗體陽性率分別為：50%、86.21%、72.41%、100%、100%、100%、90%、93.33%、86.67%、100%、93.1%；S/P平均值分別為1.15±1.18、0.88±0.39、0.74±0.53、2.35±0.28、2.34±0.53、2.38±0.62、1.42±0.65、1.32±0.69、1.16±0.69、2.59±0.29、1.41±0.59；抗體水平離散度分別為103%、44.2%、70.83%、11.86%、22.87%、25.92%、45.71%、52.31%、59.28%、11.18%、41.65%。統(tǒng)計結(jié)果見表3。

2.2.3 不同豬群血清中PRV-gB蛋白抗體水平

對該豬場不同類別豬群的PRV-gB蛋白抗體水平進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，0～10日齡仔豬、14日齡仔豬、25日齡保育豬、53日齡保育豬、103日齡育肥豬、145日齡育肥豬、妊娠30～60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬、后備母豬、公豬的抗體陽性率除145日齡育肥豬抗體陽性率為66.67%外，其余豬群抗體陽性率均為100%；S/N 平 均 值 分 別 為 ：0.036±0.007?6、0.029±0.030、0.030±0.0011、0.11±0.11、0.17±0.11、0.37±0.31、0.036±0.014、0.030±0.0012、0.031±0.0019、0.067±0.023、0.031±0.0019；抗體水平離散度分別 為：20.82%、104.55%、3.78%、100.7%、62.12%、83.08%、38.69%、3.99%、6.21%、33.56%、6.12%。 實驗統(tǒng)計結(jié)果見表4。豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體水平曲線圖見圖1。

2.2.4 不同豬群血清中PRV-gE蛋白抗體水平

對該豬場不同類別豬群的PRV-gE蛋白抗體水平進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，0～10日齡仔豬、14日齡仔豬、25日齡保育豬、53日齡保育豬、103日齡育肥豬、145日齡育肥豬、妊娠30～60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬、后備母豬、公豬的陽性率分別為：100%、100%、100%、83.33%、0%、0%、100%、66.67%、66.67%、100%、83.33%；S/N平均值分別為：0.18±0.081、0.13±0.12、0.33±0.12、0.42±0.25、0.88±0.11、0.92±0.090、0.061±0.015、0.30±0.38、0.36±0.43、0.15±0.070、0.20±0.36；抗體水平離散度分別為：45.19%、91.19%、35.31%、59.29%、12.59%、9.71%、23.99%、126.2%、117.84%、45.63%、180.3%。實驗統(tǒng)計結(jié)果見表4。豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體水平曲線圖見圖2。

3 分析與討論

3.1 該豬場4種抗體檢測結(jié)果

從整體看豬群CSFV、PRRSV、PRV-gB蛋白抗體水平陽性率較高，免疫防控效果較好，均在80%以上，大于吳群等檢測的粵西地區(qū)3種豬病病毒的平均合格率[2]，根據(jù)具體情況應(yīng)對陰性豬只或抗體水平低的豬只進(jìn)行補(bǔ)免。PRV-gE蛋白抗體陽性率為69.84%，離散度較高，提示豬群可能存在PRV野毒感染；豬場應(yīng)對豬偽狂犬病野毒防控引起重視，從圖1可以看出豬群部分豬只抗體低影響了豬群抗體整齊度，應(yīng)時刻觀察仔豬、保育豬有無站立時后肢打顫，明顯麻痹癥狀伴抽搐、癲癇等[3]癥狀。

3.2 該豬場不同豬群的抗體水平分析

3.2.1 不同豬群血清中CSFV抗體水平分析

0～10日齡仔豬陽性率只有41.67%，離散度為83.72%，14日齡陽性率為96.55%，說明有部分剛出生仔豬獲得母乳抗體較少，需加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，多關(guān)注搶不到奶頭的小豬，若臨床有仔豬發(fā)病需及時隔離處理。有研究表明，提升母豬分娩時的抗體含量可提高仔豬母源抗體水平[4]。25日齡時，抗體阻斷率從14日齡的（75.27±13.32）%下 降 到（57.15±27.88）%， 說 明首免時間定在此時間段后，較為合適，避免母源抗體干擾[5]；53日齡豬群陽性率為21.43%，阻斷率下降至（31.19±22.43）%，離散度較大，說明抗體水平整齊度低，需配合保健增強(qiáng)抵抗力，盡快進(jìn)行豬瘟二免提高豬群抗體水平；育肥豬陽性率分別為83.33%、76.67%均保持較高水平；陰性豬只是否存在漏免現(xiàn)象，需結(jié)合臨床情況具體分析，對于抗體水平較低的豬只可進(jìn)行補(bǔ)免，1個月后再次采血檢測抗體，仍為陰性進(jìn)行淘汰[6]；后備母豬、公豬豬瘟的免疫防控效果良好，整齊度高。

表3 不同類別豬群PRRSV免疫抗體陽性率檢測結(jié)果

表4 不同類別豬群PRV抗體陽性率檢測結(jié)果

3.2.2 不同豬群血清中PRRSV抗體水平分析

本次檢測中，53日齡保育豬、育肥豬、后備母豬免疫抗體陽性率最高，為100%，離散度相對穩(wěn)定，但S/P值＞2.5的比例也相對較高，應(yīng)根據(jù)臨床觀察是否有PRRSV毒血癥等癥狀發(fā)生；妊娠30～60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬的陽性率分別為90%、93.33%、86.67%，產(chǎn)后母源抗體呈下降趨勢，離散度分別為45.71%、52.31%、59.28%逐漸增大；0～10日齡仔豬的PRRSV抗體陽性率最低，只有50%，其中S/P值＞2.5的樣品份數(shù)占25.00%，離散度為103%，14日齡仔豬和25日齡保育豬陽性率分別為86.21%、72.41%，S/P平均值較低分別為0.88±0.39、0.74±0.53，抗體水平整齊度不佳，表明在采樣時，疫苗免疫后仔豬群體內(nèi)抗體水平尚未上升到穩(wěn)定水平，經(jīng)過保健等綜合防控措施，53日齡后的豬群中抗體達(dá)到穩(wěn)定水平；后備母豬100%，S/P值為2～2.5樣品數(shù)為30.00%，S/P值＞2.5的樣品份數(shù)占66.67%，離散度為11.18%，抗體整齊度較高，說明后備母豬經(jīng)過入群前馴化達(dá)到理想效果，抗體水平穩(wěn)定于可抵御豬藍(lán)耳病野毒的較高水平，但仍需加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，密切關(guān)注高抗豬群日常生長狀況[7]；公豬群陽性率為93.1%，離散度為41.65%，需對抗體較高豬只進(jìn)行重點觀察，必要時對其精液進(jìn)行病毒抗原檢測[8]，避免因精液中帶有病毒，導(dǎo)致相互感染傳播[9]。對抗體較低豬只進(jìn)行補(bǔ)免。由于間接ELISA只能檢測出抗體水平高低，卻不能鑒別是疫苗毒與野毒，需時刻關(guān)注S/P值＞2.5的豬只生長狀況，并通過日常飼養(yǎng)管理，減少病毒傳播可能。

圖1 某規(guī)?；i場豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體水平

圖2 某規(guī)?；i場豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體水平

3.2.3 不同豬群血清中PRV-gB蛋白抗體水平分析

豬偽狂犬病毒只有一種血清型，越早讓仔豬進(jìn)行滴鼻免疫，疫苗毒會搶先與機(jī)體的天然靶位產(chǎn)生“占位效應(yīng)”，降低野毒感染風(fēng)險[10]。0～10日齡仔豬、14日齡仔豬、母豬和公豬的S/N平均值維持在0.1以下，且抗體整齊度較高表明免疫效果較好；14日齡仔豬、53日齡保育豬、育肥豬陽性率較高，但離散度較大，其中145日齡豬陽性率為66.67%，需加強(qiáng)免疫。

3.2.4 不同豬群血清中PRV-gE蛋白抗體水平分析

從本次抽檢結(jié)果看，該豬場PRV-gE蛋白抗體陽性率較高，公豬陽性率為83.33%，母豬中后備母豬與妊娠30～60日母豬陽性率為100%，妊娠90日母豬及哺乳母豬陽性率為66.67%，提示野毒感染比較普遍，有研究表明[11-13]各省份豬場PRV-gE蛋白抗體陽性率呈逐年上升趨勢。本次檢測哺乳仔豬與母豬PRV-gE蛋白抗體陽性率較接近，0～25日齡仔豬陽性率為100%、53日齡為83.33%、之后育肥豬陽性率為0%，PRV-gE蛋白抗體逐漸降低，這與段群棚等[14]調(diào)查結(jié)果相符，其原因很可能是來自母豬感染野毒后的母源抗體在仔豬群內(nèi)隨時間逐漸消失。免疫缺失疫苗后豬群臨床無明顯發(fā)病癥狀，這與左玉柱曾表示“如果母豬gE抗體陽性，仔豬在7～8周齡之前為陽性，其后逐漸轉(zhuǎn)陰性，說明仔豬偽狂犬病疫苗免疫是有效的，使仔豬沒有再感染偽狂犬野毒”結(jié)論一致[1]。