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        冠心寧片對(duì)小劑量氯吡格雷抗血小板聚集增效的實(shí)驗(yàn)研究

        2019-02-23 02:03:00
        浙江中醫(yī)雜志 2019年2期
        關(guān)鍵詞:血漿

        王 奇

        浙江省杭州市中醫(yī)院 浙江 杭州 310007

        冠心寧片是丹參和川芎兩味中藥配伍而成的丹參復(fù)方制劑,主治冠心病心絞痛(屬中醫(yī)學(xué)“胸痹”“心痛”范疇),其主要成分有丹酚酸B、阿魏酸、原兒茶醛、丹參素等。本研究初步探索了冠心寧片對(duì)小劑量氯吡格雷抗血小板的增強(qiáng)作用,現(xiàn)報(bào)道如下。

        1 材料和方法

        1.1 藥物及試劑:冠心寧片浸膏(正大青春寶藥業(yè)有限公司);阿司匹林(拜爾公司,H20110419);氯吡格雷(賽諾菲公司,國(guó)藥準(zhǔn)字J20130083);花生四烯酸(AA,美國(guó)sigma公司);二磷酸腺苷(ADP,美國(guó)sigma公司)采用磷酸鹽緩沖液配置成300μmol/L;P2Y12、CD62P及GPⅡb/Ⅲa試劑,美國(guó)BD公司。

        1.2 主要儀器及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司,F(xiàn)ACSCanto);酶標(biāo)儀(賽默飛,Multiskan FC)。SD大鼠,400±20g,由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,動(dòng)物合格證:SCXK(滬)2010-0015,分籠飼養(yǎng),適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

        1.3 實(shí)驗(yàn)分組與給藥:取SD大鼠24只,隨機(jī)分為4組各6只,空白對(duì)照組、冠心寧片組(生藥0.5g/kg)、氯吡格雷(5mg/kg)組及聯(lián)合治療組(冠心寧生藥0.5g/kg,氯吡格雷5mg/kg),雌雄各半。大鼠分別灌胃給藥生理鹽水、冠心寧片浸膏及氯吡格雷,給藥體積為0.5ml/100g。連續(xù)給藥7天。

        1.4 血小板聚集率測(cè)定:末次給藥60min后,腹腔注射2%的戊巴比妥鈉0.2ml/100g麻醉,腹主動(dòng)脈取血,采用3.8%的枸櫞酸鈉抗凝。然后抗凝全血首先1000rpm離心10min,制備富血小板血漿;剩余血漿再3000rpm離心15min,取上層清液即為貧血小板血漿,用貧血小板血漿調(diào)節(jié)富血小板血漿,配制血小板濃度為4.5×108個(gè)/ml的血小板懸浮液。在37℃恒溫條件下孵育5min,加入ADP。采用血小板聚集儀測(cè)定血小板聚集率,并計(jì)算抑制率。抑制率=(對(duì)照組血小板聚集率-受試物處理組血小板聚集率)/對(duì)照組血小板聚集率×100%。

        1.5 血小板內(nèi)磷酸腺苷含量測(cè)定:取腹主動(dòng)脈血,加入聚集誘導(dǎo)劑ADP誘導(dǎo)血小板聚集,5min后,加入10mM EDTA沸水浴5min終止反應(yīng)。冷卻后,4000rpm,離心10min,收集上清液。采用放射免疫法檢測(cè)環(huán)磷酸腺苷(cAMP)含量。

        2 結(jié)果

        2.1 冠心寧片對(duì)小劑量氯吡格雷抗血小板聚集的影響:小劑量氯吡格雷對(duì)血小板聚集率無(wú)顯著抑制作用,聯(lián)合冠心寧片后能有效抑制血小板聚集,聯(lián)合治療組血小板聚集率顯著低于小劑量氯吡格雷組(P<0.05)。見(jiàn)表1。冠心寧片、氯吡格雷、冠心寧聯(lián)合氯吡格雷對(duì)血小板聚集的抑制率分別為14.51%、14.91%和26.20%。

        2.2 冠心寧片對(duì)小劑量氯吡格雷促血小板cAMP表達(dá)的影響:小劑量氯吡格雷對(duì)血小板內(nèi)磷酸腺苷表達(dá)無(wú)促進(jìn)作用,聯(lián)合冠心寧片后能有效促進(jìn)血小板內(nèi)磷酸腺苷表達(dá),聯(lián)合治療組血小板cAMP表達(dá)水平顯著高于氯吡格雷組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

        表1 各組血小板聚集率和cAMP表達(dá)比較(-x±s)

        3 討論

        血小板的異常激活和聚集致血栓機(jī)制在心血管疾病的發(fā)病中具有重要地位,抗血小板藥物的研發(fā)也成為了目前醫(yī)藥界研究的重點(diǎn)。氯吡格雷在急性冠狀動(dòng)脈綜合征(ACS)和腦卒中患者的急救中發(fā)揮了重大作用,但是其存在口服起效較慢、基因多態(tài)性影響藥物代謝等不足,另外還有出血、嚴(yán)重粒細(xì)胞減少、胃腸道反應(yīng)等不良作用,不利于其臨床進(jìn)一步應(yīng)用。本研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)小劑量的氯吡格雷聯(lián)合冠心寧片使用后,能增強(qiáng)其對(duì)血小板聚集的影響,提高其對(duì)促血小板內(nèi)磷酸腺苷表達(dá)的作用,我們認(rèn)為在臨床上冠心寧片與氯吡格雷聯(lián)合使用或許能降低氯吡格雷的使用劑量,從而減輕氯吡格雷的毒副反應(yīng)和患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

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