陳貞羽 龔 杰 莊晟堅 周 杰

1 浙江省杭州市下城區(qū)天水武林街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心 浙江 杭州 310003

2 浙江省杭州市蕭山區(qū)中醫(yī)院 浙江 杭州 311201

3 浙江省溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 浙江 溫州 325000

4 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院 浙江 杭州 310005

課題組前期發(fā)現(xiàn)2Hz、120Hz是電針治療慢性疼痛的有效頻率[1]；且電刺激頻率與波寬優(yōu)化組合可提高鎮(zhèn)痛效應(yīng)，即頻率為2Hz時，波寬為50μs鎮(zhèn)痛效果最好，而頻率為120Hz時，波寬為300μs鎮(zhèn)痛效果最好[2]，然而尚未確定疏密波是否具有更好的鎮(zhèn)痛效果。本研究選用經(jīng)典弗氏完全佐劑（CFA）致大鼠炎性痛模型，應(yīng)用Master-9電脈沖刺激器，模擬電針儀輸出頻率、波形、波寬、電流等電刺激參數(shù)，通過觀察炎性痛大鼠行為學(xué)變化和相關(guān)炎性因子檢測，篩選出電針治療炎性痛的有效電刺激參數(shù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物：清潔級健康雄性SD大鼠30只，體質(zhì)量160～200g［動物由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號：SCXK（滬）2014-0016］。飼養(yǎng)期間給予嚙齒類動物標準顆粒飼料及自由攝食與飲水，溫度25±2℃，濕度30%～40%，12h循環(huán)燈光。

1.2 儀器和試劑：脈沖電刺激器（以色列AMPI公司，型號Master-9）；電刺激隔離器（以色列AMPI公司，型號ISO-Flex）；Digital Von Frey測痛儀（法國Bioseb公司，型號BIO-EVF3）。弗氏完全佐劑（美國Sigma公司）；CFA（美國Sigma，批號：SLBM 9312V）；IL-β EIA kit（美國Abcam公司）；TNF-αEIA kit（美國Abcam公司）。華佗牌無菌針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司，規(guī)格0.25mm×13mm）。

1.3 分組與模型的制備：采用SPSS17.0軟件隨機分為空白組（N組）、模型組（M組）、2Hz組、120Hz組、2/120Hz組，每組各6只。大鼠俯臥位，于右后足墊底部碘伏消毒，75%酒精脫碘，取1ml注射器抽取適量CFA，按照0.1ml/只緩慢注射于右后足跖皮下（N組注射等量的生理鹽水），注射完成后用干棉球按壓以防止出血和CFA的滲出。

1.4 電刺激器參數(shù)設(shè)置：2Hz組波形：雙向?qū)ΨQ矩形波；頻率：2Hz；波寬：50μs；刺激強度和時間：1mA 15min，再2mA 15min，共30min。120Hz組波形：雙向?qū)ΨQ矩形波；頻率：120Hz；波寬：300μs；刺激強度和時間：1mA 15min，再2mA 15min，共30min。2/120Hz組波形：雙向?qū)ΨQ矩形波；頻率：2Hz持續(xù)3s，然后120Hz持續(xù)3s，兩者自動切換；波寬：2Hz時，波寬為50μs，120Hz時，波寬為 300μs；刺激強度和時間：1mA 15min，再 2mA 15min，共30min。

1.5 處理與治療：N組不做任何處理，自由活動。M組用特制的布套固定，不行針灸干預(yù)；其余各組均取右側(cè)足三里、昆侖穴，用特制布套固定，0.25mm×13mm針灸針刺激，導(dǎo)線分別連接Master-9針灸針和脈沖刺激器，刺激器參數(shù)如上。每天1次，連續(xù)10天。

1.6 PWTs測試：觸覺纖維絲檢測造模前，造模后24h，干預(yù)第1、3、5、7、9、10天，共8個時間點PWTs。

1.7 取材：大鼠干預(yù)第10天結(jié)束后統(tǒng)一處死，剪取大鼠患側(cè)即右后足跖炎癥組織，立即稱重后放入事先預(yù)冷的10ml離心管中，保存于-80℃的冰箱中待用。

1.8 指標檢測：ELISA檢測大鼠足跖炎癥組織白介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量。將事先凍存的足跖炎癥組織樣本于冰浴下解凍，將預(yù)配制的PBS溶液按照樣本重量以1∶9的比例加入離心管中，隨后在冰浴環(huán)境下使用組織勻漿機充分勻漿，置于落地高效冷凍離心機中離心，4℃，3000rpm，離心10min，后取上清液1ml于離心管中，-80℃凍存待測。

1.9 統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以-x±s表示，組間比較用單因素方差分析；組間兩兩比較，方差齊性時采用LSD檢驗，方差不齊時采用Dunnett’s T3檢驗。

2 結(jié)果

2.1 大鼠痛閾檢測結(jié)果：見圖1。造模后24h除N組外其余各組PWTs均顯著下降（P＜0.01），提示造模成功。與M組比較，電針干預(yù)后各時間點PWTs均提高（P＜0.01）。在電針干預(yù)后第7～10天，2/120Hz組痛閾高于2Hz組（P＜0.01或P＜0.05）；干預(yù)后第7、9天，2/120Hz組痛閾高于120Hz組（P＜0.01）。

圖1 各組大鼠痛閾檢測結(jié)果比較

2.2 大鼠足跖IL-1β含量：見表1。與N組比較，M組IL-1β含量顯著升高（P＜0.01）。2/120Hz組IL-1β含量顯著低于M組（P＜0.05）。

2.3 大鼠足跖TNF-α含量：見表2。與N組比較，M組TNF-α含量顯著升高（P＜0.01）。120Hz組和2/120Hz組TNF-α含量顯著低于 M組（P＜0.05）和2Hz組（P＜0.05，P＜0.01）。

表1 各組大鼠足跖炎癥因子IL-1β含量比較（-x±s）

表2 各組大鼠足跖炎癥因子TNF-α含量比較（-x±s）

3 討論

研究結(jié)果表明3種參數(shù)組合（2Hz/50μs，120Hz/300μs及2/120Hz）電針均有明顯鎮(zhèn)痛效果，且從電針治療起始終優(yōu)于模型組。在電針干預(yù)1周之內(nèi)，無論是低頻、高頻還是疏密波電刺激，均能提高模型大鼠的痛閾，三組之間無差異；而電針干預(yù)1周以后，發(fā)現(xiàn)2/1200Hz電針組大鼠痛閾不同程度優(yōu)于2Hz組和120Hz組?？梢姴〕淘?周以內(nèi)不同電針參數(shù)不影響療效，而治療后期應(yīng)該選2/120Hz疏密波來治療，這提示在臨床治療中炎性痛病程較長者應(yīng)選用疏密波電針來治療。

研究結(jié)果提示2/120Hz電針能抑制IL-1β、TNF-α兩種炎癥因子分泌，120Hz電針能抑制TNF-α分泌，而2Hz電針對炎性因子分泌無抑制作用，表明120Hz和2/120Hz電針較2Hz電針治療具有更好的抗炎作用。因此，筆者認為2/120Hz電針鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于2Hz電針可能與前者可以同時抑制兩種炎癥因子有關(guān)。

同時，考慮到疏密波可以降低實驗對象或患者對電針的耐受性，且疏密波可以讓多種內(nèi)阿片肽全部釋放，結(jié)合本研究結(jié)果看，建議電針治療炎性痛時選用2/120Hz電針，不推薦使用連續(xù)波電針治療。

4 參考文獻

[1]周杰，莊晟堅，龔杰，等.不同頻率電針對神經(jīng)病理痛模型大鼠鎮(zhèn)痛效應(yīng)觀察[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2016，40（12）：887-890.

[2]周杰,莊晟堅,龔杰,等.不同頻率和波寬組合電刺激對健康大鼠痛閾變化的研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2017，52(10)：764-766.