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        某血站8種酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況調(diào)查

        2019-02-22 08:01:32秦小林
        關(guān)鍵詞:待查雅培血站

        秦小林

        酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來(lái)的一種酶聯(lián)免疫測(cè)定技術(shù),因其敏感度和特異度較高、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于疾病診斷、科研等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。目前血站使用ELISA法和核酸檢測(cè)法(nucleic acid testing,NAT)進(jìn)行血液篩查,并發(fā)布血液檢測(cè)的最終結(jié)果,醫(yī)院不再進(jìn)行復(fù)查。因此,為保障患者用血安全,血站應(yīng)重視試劑的選擇和檢測(cè)過(guò)程中關(guān)鍵控制點(diǎn)的掌握?,F(xiàn)將本站2017—2018年血液檢測(cè)待查標(biāo)本再檢情況報(bào)告如下。

        1 材料與方法

        1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集2017—2018年本站8種ELISA檢測(cè)試劑檢測(cè)的待查標(biāo)本1 402份,均為單邊陽(yáng)性標(biāo)本。兩種不同廠家試劑檢測(cè)同一項(xiàng)目時(shí),只要檢測(cè)結(jié)果不相符即判為待查標(biāo)本。

        1.2 儀器與試劑 全自動(dòng)酶聯(lián)免疫一體機(jī)Uranus AE180(深圳愛(ài)康生物科技有限公司),EVO全自動(dòng)加樣儀(瑞士TECAN公司),后處理FAME 24/20(煙臺(tái)澳斯邦生物工程公司);核酸檢測(cè)系統(tǒng)及其試劑盒(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司),核酸檢測(cè)系統(tǒng)及其試劑盒(蘇州華益美生物科技有限公司);乙型肝炎(乙肝)表面抗原〔(hepatitis B surface antigen,HBsAg),英國(guó)雅培和北京萬(wàn)泰〕,梅毒抗體(北京萬(wàn)泰和上海科華),丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗體(上??迫A和廈門英科新創(chuàng)),人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)抗體(法國(guó)伯樂(lè)和北京金豪),所有試劑均通過(guò)中國(guó)藥品生物制品檢定所批檢。

        1.3 方法 分析本站8種ELISA檢測(cè)試劑檢測(cè)待查情況,對(duì)相應(yīng)待查項(xiàng)目用同種試劑進(jìn)行兩孔再檢。只要有一孔呈反應(yīng)性即判為陽(yáng)性,兩孔均為無(wú)反應(yīng)性則判為陰性。對(duì)待查檢測(cè)陰性的標(biāo)本再采用熒光聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)方法進(jìn)行核酸8份標(biāo)本混樣檢測(cè)。

        2 結(jié)果

        2.1 HBsAg試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況 雅培HBsAg試劑總待查率高于萬(wàn)泰,其中雅培待查陽(yáng)性率低(15.77%),待查陰性率高(84.23%);萬(wàn)泰待查陽(yáng)性率高(64.69%),待查陰性率低(35.31%)。見(jiàn)表1。

        表1 某血站1 402份待查標(biāo)本HBsAg試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況

        2.2 抗-HCV試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況 科華抗-HCV試劑待查數(shù)約為新創(chuàng)HCV待查數(shù)的2倍,待查陽(yáng)性率相差不大。見(jiàn)表2。

        表2 某血站1 402份待查標(biāo)本抗-HCV試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況

        2.3 抗-HIV試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況 金豪抗-HIV試劑待查陽(yáng)性率高(67.57%),伯樂(lè)待查陽(yáng)性率較低(39.45%)。見(jiàn)表3。

        表3 某血站1 402份待查標(biāo)本抗-HIV試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況

        2.4 梅毒抗體試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況 萬(wàn)泰梅毒抗體試劑待查數(shù)是科華梅毒抗體試劑待查數(shù)的3倍,且待查陽(yáng)性率也比科華高。見(jiàn)表4。

        表4 某血站1 402份待查標(biāo)本梅毒抗體試劑檢測(cè)結(jié)果待查情況

        2.5 ELISA待查陰性標(biāo)本核酸檢測(cè)結(jié)果情況 雅培HBsAg試劑待查陰性標(biāo)本核酸檢測(cè)陽(yáng)性率最高(0.84%)。見(jiàn)表5。

        表5 HBsAg、抗-HCV、抗-HIV ELISA待查陰性核酸檢測(cè)情況

        3 討論

        相關(guān)調(diào)查顯示,我國(guó)乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)攜帶者約為1.2億,感染率高達(dá)60%,HBsAg攜帶者亦高達(dá)10%~15%[1]。本研究顯示,HBsAg總待查率達(dá)待查總數(shù)的70.61%,可能與我國(guó)是HBV高發(fā)區(qū)有關(guān)。8種ELISA檢測(cè)試劑檢測(cè)待查中雅培HBsAg試劑待查數(shù)最多,占待查總數(shù)的50.21%,但其再檢陽(yáng)性符合率僅15.77%;而金豪抗-HIV試劑、萬(wàn)泰HBsAg試劑和萬(wàn)泰梅毒抗體試劑再檢陽(yáng)性符合率均大于60%;新創(chuàng)抗-HCV、伯樂(lè)抗-HIV、科華抗-HCV和科華梅毒抗體試劑再檢陽(yáng)性符合率為30%~40%。雅培HBsAg試劑再檢符合率低可能與雅培檢測(cè)試劑盒的諸多影響因素有關(guān)。雅培試劑敏感度高,截?cái)嘀递^低(約0.090),洗板不干凈即可出現(xiàn)花板,其次加樣、孵育溫度和時(shí)間、顯色、試劑、環(huán)境、操作、類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體以及離心速度和時(shí)間等因素也會(huì)導(dǎo)致結(jié)果呈假陽(yáng)性和假陰性[2-3]。有研究表明,以3 600 r/min(2 898 g)離心10 min分離血清,血清中HBsAg含量假陽(yáng)性率為9.82%;以8 819 r/min(10 000 g)離心10 min分離血清,不會(huì)導(dǎo)致假陰性標(biāo)本出現(xiàn)[4]??梢?jiàn)同一批標(biāo)本可以通過(guò)提高標(biāo)本離心速度減少假陽(yáng)性結(jié)果,而本室常規(guī)ELISA檢測(cè)標(biāo)本的離心時(shí)間為5 min、速度為3 000 r/min,因此為減少HBsAg待查標(biāo)本數(shù),必須在檢測(cè)前將標(biāo)本以足夠的時(shí)間和速度離心。萬(wàn)泰HBsAg試劑、萬(wàn)泰梅毒抗體試劑和金豪抗-HIV試劑再檢陽(yáng)性率高可能還與試劑本身有關(guān),國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒的敏感度較進(jìn)口試劑盒稍差,但特異度和重復(fù)檢出率均高[5]。相關(guān)文獻(xiàn)顯示,ELISA篩查單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者中,潛在合適獻(xiàn)血者占較大比例,廣西南寧及河南新鄉(xiāng)地區(qū)的追蹤調(diào)查結(jié)果顯示,單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者中潛在合適獻(xiàn)血者比例分別為86.6%、58.3%[6-7]。也有文獻(xiàn)報(bào)道,ELISA檢測(cè)HBV、HCV單試劑陽(yáng)性,其假陽(yáng)性率較高,單試劑檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本及抗-HCV灰區(qū)標(biāo)本中均未檢出核酸反應(yīng)性標(biāo)本,171例HBsAg灰區(qū)標(biāo)本中檢出HBV-DNA反應(yīng)性標(biāo)本6例,247例HCV未檢出HCV-RNA反應(yīng)性標(biāo)本[8]。因而萬(wàn)泰HBsAg、萬(wàn)泰梅毒抗體試劑和金豪抗-HIV試劑存在假陽(yáng)性率較高的情況。新創(chuàng)抗-HCV、伯樂(lè)抗-HIV、科華抗-HCV和科華梅毒抗體試劑再檢陽(yáng)性符合率均在30%~40%,特異度比較符合本站血液篩查要求。另外,表5數(shù)據(jù)顯示,雅培HBsAg再檢陰性標(biāo)本核酸檢測(cè)陽(yáng)性率高達(dá)0.84%,而我國(guó)經(jīng)NAT法檢測(cè)后 HBsAg(-)NAT(+)檢出率約為 1:2 000,其中約80%為隱匿性乙肝病毒感染(occult hepatitis B virus infection,OBI),20% 為窗口期標(biāo)本[9-10]。本血站所用雅培HBsAg在再檢陰性標(biāo)本中,核酸檢測(cè)陽(yáng)性率遠(yuǎn)高于我國(guó) HBsAg(-)NAT(+)檢出率,因而在雅培HBsAg單邊待查標(biāo)本中極可能存在高風(fēng)險(xiǎn)OBI感染。有研究表明,乙肝核心抗體陽(yáng)性健康體檢人群中,HBV-DNA陽(yáng)性率為6.8%[11],盡管繼HBsAg檢測(cè)之后已引入NAT檢測(cè),但在抗-HBc(+)合格獻(xiàn)血者血液中仍有一定機(jī)率含微量HBV-DNA,故需進(jìn)一步提高核酸檢測(cè)的敏感度。

        血站實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血液篩查的目的是為防止通過(guò)輸血感染病原體,而非進(jìn)行診斷,故對(duì)檢測(cè)方法敏感度的要求高于特異度。然而敏感度和特異度本身就是一對(duì)矛盾的變量,兩者隨診斷臨界值的變化而變化,過(guò)高的檢測(cè)敏感度勢(shì)必會(huì)削弱其特異度,導(dǎo)致誤診率上升[12]。對(duì)血站而言,就會(huì)導(dǎo)致因假陽(yáng)性被屏蔽的獻(xiàn)血者數(shù)量增多,造成獻(xiàn)血人群的流失。而我國(guó)尚未要求對(duì)單邊陽(yáng)性或核酸陽(yáng)性的結(jié)果作進(jìn)一步驗(yàn)證,對(duì)于檢測(cè)出現(xiàn)的陽(yáng)性結(jié)果,本站未開(kāi)展確證試驗(yàn)而無(wú)法及時(shí)得到證實(shí)。單試劑假陽(yáng)性不僅直接導(dǎo)致了血液資源的浪費(fèi),削弱了無(wú)償獻(xiàn)血者的隊(duì)伍,還對(duì)因假陽(yáng)性結(jié)果遭拒的獻(xiàn)血者身心造成了傷害,對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血事業(yè)的健康發(fā)展造成了不利影響。因此,血站應(yīng)對(duì)ELISA檢測(cè)單邊陽(yáng)性或核酸陽(yáng)性獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤調(diào)查,為之后獻(xiàn)血者的歸隊(duì)問(wèn)題作出前瞻性統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析,避免上述情況的發(fā)生。

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