趙瑞華，張旭輝，賀曉龍，宋 飛

(1.延安大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，陜西 延安 716000；2.陜西瑞福興生物科技有限公司，陜西 渭南 714000)

海鮮菇〔Hypsizygusmarmoreus(Peck)H.E.Bigelow〕又名玉蕈、蟹味菇，屬擔(dān)子菌門層菌綱傘菌目白蘑科玉蕈屬，形態(tài)美觀，味道鮮美，質(zhì)地脆嫩，是一種高蛋白、低脂肪和富含多種礦物質(zhì)與維生素的保健食品，具有平衡膳食、提高免疫力和延年益壽的功效，有“假松茸”之稱[1-9]。海鮮菇是我國重要的食用菌種植資源之一，深受消費者喜愛，產(chǎn)量正在逐年提高。但由于海鮮菇栽培周期較長，生長速度較慢，抑菌能力較差，栽培中的任何時期都有可能發(fā)生霉菌污染，尤其菌絲生長階段最易受到霉菌侵染，常見的競爭性霉菌有哈茨木霉(Trichodermaharzianum)、擬康氏木霉(Trichodermapseudoknoingii)、好食脈孢霉(Neurosporasitophila)、長枝木霉(Trichodermalongibrachiatum)、黑曲霉(Aspergillusniger)、產(chǎn)紅青霉(Penicilliumrubrum)、產(chǎn)黃青霉(Penicilliumchrysogenum)等，霉菌病害的發(fā)生嚴(yán)重影響海鮮菇的產(chǎn)量與品質(zhì)，對其產(chǎn)業(yè)發(fā)展造成不利影響[10-17]。目前，生產(chǎn)上常用化學(xué)藥劑(多菌靈和克霉靈)進(jìn)行防治，但對某些霉菌的防治效果不理想，且大多對人體健康有負(fù)面影響，給食品安全帶來很大的隱患[18]。因此，海鮮菇生產(chǎn)急需既可有效防控霉菌又不影響環(huán)境的綠色無污染抑菌活性物質(zhì)，從而減少化學(xué)藥劑的使用，保證食用菌產(chǎn)品的優(yōu)質(zhì)安全生產(chǎn)。

自然界中很多植物如黃芪、魚腥草、艾草、洋蔥、生姜及大蒜等都含有殺菌活性物質(zhì)，所以從植物中尋求抗霉菌藥物前景廣闊[19-21]。鑒于此，筆者用不同溶劑提取黃芪、魚腥草、艾草、洋蔥、生姜和大蒜等6種植物的活性物質(zhì)，研究其對海鮮菇栽培過程中常見競爭性霉菌的抑制效果及對海鮮菇菌絲生長的影響，旨在為海鮮菇競爭性霉菌病害的防治和生物農(nóng)藥的開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 霉菌菌株 哈茨木霉、擬康氏木霉、好食脈孢霉、長枝木霉、黑曲霉、產(chǎn)紅青霉、產(chǎn)黃青霉及海鮮菇菌種，均由延安大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院食用菌實驗室提供。

1.1.2 抑菌植物 黃芪、洋蔥、生姜、大蒜、艾草及魚腥草，從市場和醫(yī)藥商店購買。

1.1.3 試劑 乙醇、乙酸乙酯、丙酮及石油醚，均為分析純，市購；PDB培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基及海鮮菇栽培料，自制。

1.2 試驗方法

1.2.1 抑菌植物提取液的制備 將黃芪、洋蔥、生姜、大蒜、艾草和魚腥草放入40℃恒溫烘箱中烘干，粉碎過40目篩備用。每種粉末稱取4組各5 g分別裝入離心管中，然后向離心管中分別加入50 mL濃度均為 60%的乙醇、乙酸乙酯、丙酮和石油醚溶液充分混勻，20℃水浴超聲輔助提取40 min，離心收集上清液，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓濃縮，制成濃度為500 mg/mL的浸提液母液，低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 抑菌植物提取液對霉菌的抑菌效果 采用細(xì)菌過濾器(0.22 μm)將提取液過濾，然后與PDA培養(yǎng)基(121℃，滅菌30 min，冷卻至50℃)按1∶20混勻倒平皿，制成含抑菌植物提取液終濃度為2.5%的PDA平板備用。接種直徑0.6 cm的病原菌菌絲塊，28℃培養(yǎng)，待空白對照(陽性對照為200 mg/kg 50%多菌靈可濕粉劑，陰性對照為無菌水)菌落直徑達(dá)培養(yǎng)皿的2/3時，采用十字交叉法測量菌落直徑，3次重復(fù)。根據(jù)菌落直徑大小計算相對抑制率(%)。

相對抑制率={[(對照菌落直徑-0.6)-(處理菌落直徑-0.6)]/(對照菌落直徑-0.6)}×100%

1.2.3 抑菌植物提取液對海鮮菇菌絲生長的影響 將植物提取液與經(jīng)過滅菌的海鮮菇培養(yǎng)料混勻，無菌水為對照(CK)。接種海鮮菇栽培種，在溫度20～25℃，空氣相對濕度60%～65%條件下遮光培養(yǎng)50 d左右，每天通風(fēng)3～4次，30 min/次以上，期間觀察菌絲生長速度，3次重復(fù)。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)通過SPSS 17.0進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同海鮮菇競爭性霉菌對6種植物提取液的敏感度

從表1可見，哈茨木霉、擬康氏木霉、好食脈孢霉、長枝木霉、黑曲霉、產(chǎn)紅青霉和產(chǎn)黃青霉對不同植物提取液的敏感度不同。

1) 長枝木霉。洋蔥乙酸乙酯提取液對長枝木霉的抑制作用最強，抑菌率達(dá)86.2%，顯著高于其余處理(洋蔥丙酮和石油醚提取液除外)對長枝木霉的抑制作用；洋蔥丙酮提取液和石油醚提取液的抑制作用其次，抑菌率分別為84.5%和81.2%，均顯著高于除大蒜乙酸乙酯、丙酮和石油醚提取液及魚腥草丙酮提取液外的其他處理。

2) 哈茨木霉。洋蔥乙酸乙酯提取液對哈茨木霉的抑制作用最強，抑菌率達(dá)91.3%，顯著高于其余處理；其次是大蒜石油醚提取液、洋蔥丙酮提取液和黃芪60%乙醇提取液，其抑菌率分別為85.2%、84.6%和84.2%，三者差異不顯著，但均顯著高于除黃芪石油醚提取液、洋蔥石油醚提取液及大蒜丙酮提取液外的其余處理。

3) 黑曲霉。大蒜石油醚提取液對黑曲霉的抑制作用最強，抑菌率達(dá)86.4%，與其余處理差異顯著；其次是大蒜丙酮提取液和洋蔥60%乙醇提取液，其抑菌率分別為73.5%和71.5%，二者差異不顯著，但與個別處理存在顯著差異。

4) 產(chǎn)紅青霉。大蒜丙酮和石油醚提取液、黃芪60%乙醇和石油醚提取液對產(chǎn)紅青霉的抑菌率為82.3%～83.4%，均>80%。其中，大蒜丙酮提取液對產(chǎn)紅青霉的抑制作用最強，抑菌率達(dá)83.4%；4種提取液的抑制作用差異不顯著，但均顯著高于其余處理。

表1 6種植物提取液對海鮮菇競爭性霉菌生長的抑制率Table 1 Inhibition rate of six plant extracts against growth of H.marmoreus competitive molds %

注："—"表示沒有抑制效果；同列不同字母表示差異顯著 (P<0.05)。
Note:“—”means no antifungal effect.Different letters in the same column indicate significance of difference atP<0.05 level.

5) 產(chǎn)黃青霉。黃芪60%乙醇和丙酮提取液、洋蔥60%乙醇提取液、大蒜乙酸乙酯和丙酮提取液對產(chǎn)黃青霉的抑菌率為81.8%～95.2%，均>80%。其中，黃芪60%乙醇提取液的抑菌率最高，達(dá)95.2%，與其余處理間存在顯著差異。

6) 擬康氏木霉。黃芪石油醚提取液和大蒜丙酮提取液對好食脈孢霉的抑制效果較好，其抑菌率分別為80.3%和79.2%，顯著高于其余處理。

7) 好食脈孢霉。黃芪丙酮、洋蔥石油醚和大蒜石油醚提取液對好食脈孢霉的抑菌率為78.2%～83.4%，其中，黃芪丙酮提取液的抑制效果較好，其抑菌率為83.4%；三者間差異不顯著，但黃芪丙酮和洋蔥石油醚提取液的抑菌率顯著高于除大蒜石油醚提取液外的其余處理。

2.2 6種植物提取液對不同海鮮菇競爭性霉菌生長的抑制作用

從表1還可見，所有植物提取液對海鮮菇競爭性霉菌均有抑制效果，但不同溶劑提取液其抑菌效果存在一定差異。黃芪60%乙醇提取液對哈茨木霉、產(chǎn)紅青霉和產(chǎn)黃青霉，丙酮提取液對產(chǎn)黃青霉和好食脈孢霉，石油醚提取液對哈茨木霉、產(chǎn)紅青霉和擬康氏木霉均有較好的抑制效果，抑菌率均>80%，而其乙酸乙酯提取液對霉菌的抑制效果較差，對哈茨木霉的抑菌率僅39.1%。洋蔥乙酸乙酯提取液對長枝木霉和哈茨木霉，60%乙醇提取液對產(chǎn)黃青霉，丙酮提取液對長枝木霉和哈茨木霉，石油醚提取液對長枝木霉、哈茨木霉和好食脈孢霉的抑菌率均>80%，但也有個別抑菌率<50%。大蒜所有提取液抑菌率均>50%，其乙酸乙酯提取液對產(chǎn)黃青霉，丙酮提取液對哈茨木霉、產(chǎn)紅青霉和產(chǎn)黃青霉，石油醚提取液對哈茨木霉、黑曲霉和產(chǎn)紅青霉的抑菌率也均>80%，60%乙醇提取液對擬康氏木霉的抑菌率為70.5%(圖1A)。與上述3種植物相比，生姜、艾草和魚腥草提取液的抑菌效果相對較差，生姜和艾草乙酸乙酯提取液對產(chǎn)黃青霉和哈茨木霉的抑菌率較高，分別為74.2%和76.5%；魚腥草60%乙醇提取液對產(chǎn)黃青霉的抑菌率最高，為76.4%；艾草乙酸乙酯提取液對長枝木霉的抑菌率為64.1%(圖1B)，其余大部分抑菌率在40%～60%。在該試驗濃度下，各溶劑提取液均可以防止霉菌污染。

注：A，擬康氏木霉；左，陰性對照(無菌水)；中，大蒜(60%乙醇)；右，陽性對照(200 mg/kg 50%多菌靈可濕粉劑)。B，長枝木霉；左，陰性對照(無菌水)；中，艾草(乙酸乙酯)；右，陽性對照(200 mg/kg 50%多菌靈可濕粉劑)。Note: A, T.pseudoknoingii；Left, negative CK (sterile water); Middle, garlic (60% ethanol); Right, positive CK(50% Carbendazim.B，T.longibrachiatum；Left, negative CK (sterile water); Middle, Artemisia argyi (ethyl acetate); Right, positive CK(50% Carbendazim.圖 1 大蒜60%乙醇提取液和艾草乙酸乙酯提取液分別對擬康氏木霉和長枝木霉生長的抑制作用Fig.1 Inhibition effect of garlic extract (60% ethanol) and Artemisia argyi extract (ethyl acetate) on T.pseudoknoingii and T.longibrachiatum

2.3 植物提取液對海鮮菇菌絲生長的影響

從圖2看出，6種植物不同溶劑提取液對海鮮菇菌絲的生長均有影響。其中，培養(yǎng)18 d時，添加大蒜提取液的海鮮菇菌絲生長速度最快，分別為61 mm、57 mm、59 mm和56 mm，4種提取液對菌絲生長的促進(jìn)作用依次為乙酸乙酯、丙酮、60%乙醇和石油醚，分別較CK提高10.9%、7.3%、3.6%和1.8%；其次是添加洋蔥和生姜60%乙醇提取液，分別為57 mm和56 mm，較CK也提高3.6%和1.8%；而黃芪、艾草和魚腥草各提取方法的添加物均使菌絲生長速度下降，但各處理的菌絲生長與CK相比差異不明顯。

圖2 6種抑菌植物提取液處理海鮮菇的菌絲長度Fig.2 Effect of six plant extracts on mycelium growth of H.marmoreus

3 結(jié)論與討論

6種植物各提取液對海鮮菇生產(chǎn)中常見競爭性霉菌均有抑制作用，但因植物種類不同或提取溶劑不同，各提取液對霉菌的抑制作用存在差異。洋蔥的乙酸乙酯、丙酮和石油醚提取液對長枝木霉的抑菌率均>80%；黃芪、洋蔥和大蒜的部分溶劑提取液對哈茨木霉的抑制效果較好，其中洋蔥乙酸乙酯提取液的抑菌率達(dá)91.3%；大蒜石油醚提取液對黑曲霉的抑制效果較好，且與其余處理差異顯著；黃芪和大蒜的部分溶劑提取液對產(chǎn)紅青霉的抑菌率>80%，與其余處理差異顯著；黃芪60%乙醇提取液對產(chǎn)黃青霉的抑菌率高達(dá)95.2%，生姜和大蒜的部分溶劑提取液對其抑制效果也較好；黃芪和大蒜個別溶劑提取液對擬康氏木霉的抑菌效果較好，抑菌率分別為80.3%和79.2%；黃芪和洋蔥的個別溶劑提取液對好食脈孢霉的抑制率>80%。利用植物復(fù)方提取液對霉菌進(jìn)行防治可能會取得更好的效果。

6種植物提取液對海鮮菇的生長有不同的抑制或促進(jìn)作用，而且由于提取溶劑不同，同種植物不同提取液對海鮮菇菌絲生長的影響也存在差異，但加入各提取液的海鮮菇菌絲生長速度與對照相比無顯著差異。

該研究只檢測了提取液對海鮮菇菌絲生長的影響，對海鮮菇孢子萌發(fā)和子實體生長的影響有待進(jìn)一步研究。后續(xù)研究可以擴大抑菌植物的篩選范圍，或在此基礎(chǔ)上對抑菌植物進(jìn)行配伍，進(jìn)行抗真菌試驗。在食用菌生產(chǎn)中，由于抑菌植物活性物質(zhì)提取工藝簡單，操作方便，設(shè)備投資少，結(jié)合提取液對食用菌各生長階段的影響，選用合適的抑菌植物源可為食用菌生產(chǎn)開發(fā)高效、安全和經(jīng)濟的新型生物農(nóng)藥提供依據(jù)，但該類植物源抑菌劑在食用菌生產(chǎn)中適宜的劑型、濃度和施用方法有待進(jìn)一步深入研究。