王胤海，申 琦，譚奇敏，李曉紅，張 菡，崔海濱

（中糧新疆屯河加工番茄工程技術(shù)研究中心（有限公司），中糧屯河糖業(yè)股份有限公司（糖料和番茄質(zhì)量控制重點實驗室），新疆 昌吉 831100）

目前，我國番茄制品產(chǎn)量僅次于美國，是世界第二大加工番茄生產(chǎn)國，年出口量100×104t，成為我國五大出口蔬菜制品之一，占全球番茄醬的貿(mào)易總量已從1999年的7.7%上升到2016年的40%，是世界第一大番茄制品出口貿(mào)易國。

隨著加工番茄種植、采收模式的調(diào)整，各類殺蟲劑、殺菌劑在番茄種植過程中普遍使用，歐盟、日本等番茄制品主要進口國對番茄醬農(nóng)藥殘留限量制定了嚴(yán)苛的限量標(biāo)準(zhǔn)[1-4]。試驗采用QuEChERS前處理方法，充分利用分散固相萃取的技術(shù)原理，建立了適合番茄及番茄制品基質(zhì)99種農(nóng)藥的檢測方法，有效提高了工作效率，顯著降低了成本。該方法的精密度、靈敏度及方法檢出限能同時滿足歐盟、日本肯定列表和國標(biāo)的要求。

1 試驗部分

1.1 儀器

AL01型分析天平（0.1 mg），METTLER TOLEDO公司產(chǎn)品；超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀；UPLC-MSMS（WATERS）；氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（AGILENT 5973N，6890）；色譜柱：Waters ACQUITY UPLC HSST3 1.8μm（2.1 mm×50 mm）。

1.2 試劑

乙腈（HPLC級）、乙酸銨（HPLC級）、乙酸（HPLC級）、甲酸（HPLC級）、氯化鈉（AR級）、乙酸鈉（AR級）、無水硫酸鎂（AR級）、乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）、實驗室用水均為一級水。

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品包括甲基硫環(huán)靈、氧樂果、甲胺磷、敵敵畏等99項農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)量濃度均為100μg/mL。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別吸取99種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品200μL～10 mL容量瓶中，用乙腈定容，配置成2μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用空白樣品提取液配成不同質(zhì)量濃度的基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線?；|(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.4 樣品前處理

（1）樣品制備。取代表性樣品約500 g，勻漿攪拌后備用。

（2） 樣品提取。稱取5 g（準(zhǔn)確至0.01 g） 樣品于50 mL塑料離心管中（若樣品為番茄醬，則需要加入5 mL水），渦旋混勻，準(zhǔn)確加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的乙酸-乙腈20 mL、4 g氯化鈉和1 g乙酸鈉；使用恒溫振蕩器振蕩15 min，隨后放入超聲波發(fā)生器中超聲提取20 min，超聲過程中需控制水溫上升；超聲結(jié)束后以轉(zhuǎn)速8 000 r/min離心5 min。

（3）樣品除水。吸取全部離心后上清液于50 mL塑料離心管中，加入6.00 g無水硫酸鎂，放入恒溫振蕩器中振蕩15 min，以轉(zhuǎn)速8 000 r/min離心5 min。

（4） 樣品凈化。取12 mL上清液于50 mL塑料離心管中，準(zhǔn)確加入1.00 g無水硫酸鎂和0.250 g PSA（樣品若為番茄醬，則稱取0.400 g PSA），放入恒溫振蕩器中振蕩15 min，以轉(zhuǎn)速8 000 r/min離心5 min。

（5）樣品濃縮及上機。取上清液8 mL于玻璃氮吹管中，于35℃水浴中氮吹濃縮至1 mL以下，再用乙腈復(fù)溶至1 mL；渦旋混勻后過膜上機。

1.5 色譜及質(zhì)譜條件

（1）液相色譜條件。色譜柱為Waters ACQUITY UPLCHSST3 1.8μm（2.1 mm×50 mm Column），柱溫35℃，樣品溫度4℃，進樣體積3μL。流動相為乙腈和含0.1%甲酸的乙酸銨水溶液，流速為0.2 mL/min。

流動相梯度條件見表1。

表1 流動相梯度條件

（2）LCMMS條件。正離子模式（EI+），選擇離子掃描（MRM），毛細(xì)管電壓3.5 kV，錐孔電壓28 V，離子源溫度120℃，脫溶劑氣溫度450℃，碰撞氣流量700 L/hr，錐孔氣流量50.0 L/hr。

（3） 氣相色譜條件。進樣口溫度250℃，程序初始溫度80℃，保持1 min，以10℃/min升溫至280℃，保持5 min，再以20℃/min升溫至300℃，保持3 min。載氣為高純氮，流速為1.0 mL/min，不分流進樣，進樣量1μL。

（4）質(zhì)譜條件（GCMS）。電子轟擊電離源（EI），電離能量70 eV，四級桿溫度150℃，傳輸線溫度300℃，離子源溫度230℃，選擇離子掃描，溶劑延遲3 min。

2 結(jié)果與討論

2.1 基質(zhì)匹配曲線的配制

不同農(nóng)藥在pH值穩(wěn)定性的不同，配制含有多個農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作液都是由一定體積的儲備液經(jīng)適量的乙腈稀釋混合而成?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液的濃度應(yīng)足夠用于配制所需的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液?；|(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液須用空白樣品的提取液經(jīng)適當(dāng)稀釋配制，空白樣品基質(zhì)的用量不超過定容體積的20%，以避免樣品提取液與基質(zhì)匹配之間因基質(zhì)增強效應(yīng)引起的誤差。

2.2 提取溶劑的選擇

采用0.1%甲酸乙腈提取，是由于所檢測的農(nóng)藥大多為極性較大的農(nóng)藥。

2.3 凈化條件

制備均勻的樣品用乙腈提取。低水分含量的樣品（水分含量＜80%）在提取前需要加入5 g水。

在提取液中加入氯化鈉劇烈振搖后離心，使固相和液相分離。有機相用分散固相萃取法凈化，凈化過程中加入一定量的硫酸鎂去除有機相中殘留水分。浸提液中加入少量甲酸進行酸化后接著加入吸附劑（如PSA），酸化有助于保持農(nóng)藥的穩(wěn)定性，提高分析的靈敏度。

2.4 儀器條件的優(yōu)化

LC-MS/MS所有農(nóng)藥質(zhì)譜參數(shù)均采用流動注射的方式，通過調(diào)試尋找毛細(xì)管電壓、母離子、子離子、錐孔電壓、碰撞能等參數(shù)。GC-MS所有農(nóng)藥均直接采用Agilent數(shù)據(jù)庫中農(nóng)藥質(zhì)譜參數(shù)。

2.5 方法學(xué)考查

2.5.1 定性與定量

（1）定性方法。在相同試驗條件下進行樣品測定時，如果檢出的色譜峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)樣品相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且所選擇的離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)樣品的離子豐度比相一致（相對豐度＞50%，允許±20%偏差；相對豐度＞20%～50%，允許±25%偏差；相對豐度＞10%～20%，允許±30%偏差；相對豐度≤10%，允許±50%偏差），則可判斷樣品中存在該種農(nóng)藥或相關(guān)化學(xué)品。

（2）定量方法。使用響應(yīng)值較高的離子對為定量離子對，通過基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用外標(biāo)法定量。

2.5.2 方法的線性范圍與檢出限

使用空白番茄醬樣品的最終凈化液作為基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液，分別以99種農(nóng)藥的質(zhì)量濃度對應(yīng)的定量離子色譜峰的峰面積繪制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線，獲得相應(yīng)的線性方程及相關(guān)系數(shù)。99種農(nóng)藥化合物的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2＞0.98。

99種農(nóng)藥化合物的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線和相關(guān)系數(shù)見表2。

表2 99種農(nóng)藥化合物的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線和相關(guān)系數(shù)

續(xù)表2

2.5.3 回收率和精密度試驗

為驗證方法的可靠性和重復(fù)性，分別進行4個水平的添加回收率試驗，每個水平做6個平行樣品測定，該方法測定番茄醬中99種農(nóng)藥的平均回收率均在73.6%～118.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD） 小于16%。

34種農(nóng)藥（LC/MSMS） 的平均加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表3，65種農(nóng)藥（GC/MS） 的平均加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表4。

3 結(jié)語

采用了QuEChERS前處理方法，LC-MS/MS和GC-MS 2臺儀器測定了番茄及番茄醬中99項常見農(nóng)藥殘留。99種農(nóng)藥在0.01～0.50 mg/kg含量范圍內(nèi)線性良好，R2≥0.980，且平均回收率為 73.6%～118.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差≤16%。該方法操作簡單、快速、高效、成本較低，具有較好的靈敏度和精密度，適合在番茄及番茄制品相關(guān)生產(chǎn)加工企業(yè)中推廣。

表3 34種農(nóng)藥（LC/MSMS）的平均加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)

表4 65種農(nóng)藥（GC/MS）的平均加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)

續(xù)表4