楊國(guó)梅 寧耀貴，2 錢紅燕 陳世菊

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以慢性、進(jìn)行性、多發(fā)性、侵襲性，以關(guān)節(jié)滑膜炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)的自身免疫性疾病，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致患者功能障礙[1]。微小RNA（miRNA）是一種內(nèi)源性、長(zhǎng)度約22個(gè)核苷酸小型非編碼單鏈RNA，通過(guò)抑制信使RNA的翻譯起到轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)功能，參與機(jī)體重要的生理病理過(guò)程[2]。miR-155異常表達(dá)影響先天和適應(yīng)性免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致免疫性疾病的發(fā)展。本文針對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎人群中miR-155進(jìn)行Meta分析，分析miR-155與RA發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索

以 類 風(fēng) 濕 關(guān) 節(jié) 炎、Rheumatoid Arthritis、microRNA155、microRNA-155、miRNA-155、miR-155、hsa-mir-155及 miR-155-5p為檢索詞，在Pubmed、Embase、CNKI、萬(wàn)方、維普數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)和中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)檢索。檢索時(shí)間從建庫(kù)至2018年1月。同時(shí)手工搜索檢索文獻(xiàn)的參考文獻(xiàn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 同時(shí)符合以下條件的發(fā)表于英文期刊或者中文期刊的研究被納入。（1）研究對(duì)象：①患者滿足1987年American College of Rheumatology（ACR） 或 者 2010年 American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism（ACR/EULAR）類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)；②對(duì)照組為健康人群。兩組不論患者年齡、性別等。（2）研究類型：①病例對(duì)照試驗(yàn)；②評(píng)價(jià)miR-155與RA的相關(guān)性。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）研究對(duì)象非RA人群；（2）對(duì)照組非健康人群；（3）數(shù)據(jù)重復(fù)文獻(xiàn)；（4）綜述類文章；（5）統(tǒng)計(jì)方法不恰當(dāng)；（6）數(shù)據(jù)不全。

1.3 數(shù)據(jù)提取

由2名評(píng)價(jià)者獨(dú)立提取，資料提取表格內(nèi)容主要包括：第一作者姓名、出版年份、病例組及對(duì)照組年齡、性別、檢測(cè)樣本類型、種族、RA診斷標(biāo)準(zhǔn)、miR-155檢測(cè)方法及擴(kuò)增參照物。兩位評(píng)估者檢查提取的數(shù)據(jù)，并對(duì)所有數(shù)據(jù)達(dá)成了一致意見(jiàn)。2名評(píng)價(jià)者獨(dú)立提取資料，并進(jìn)行交叉核對(duì)，遇不同意見(jiàn)與第3名評(píng)價(jià)者討論解決。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Cochrane系統(tǒng)評(píng)價(jià)軟件RevMan5.3進(jìn)行Meta分析。本文對(duì)數(shù)據(jù)使用標(biāo)準(zhǔn)平均差（standardized mean difference，SMD）及其95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）效應(yīng)量表示。采用Z檢驗(yàn)，P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用I2統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)確定各研究之間的統(tǒng)計(jì)異質(zhì)性。當(dāng)研究具有明顯異質(zhì)性（I2＞50%）時(shí)，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行Meta分析[3]。通過(guò)敏感性分析評(píng)價(jià)各研究對(duì)結(jié)果穩(wěn)定性的影響。繪制漏斗圖來(lái)判斷發(fā)表偏倚，同時(shí)采用Egger檢驗(yàn)評(píng)價(jià)報(bào)告偏倚。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)基本情況

初檢共獲得文獻(xiàn)194篇，其中PubMed（n=29），Embase（n=138），萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)（n=6），維普數(shù)據(jù)庫(kù)（n=12），和CNKI數(shù)據(jù)庫(kù)（n=9）。文獻(xiàn)檢索過(guò)程見(jiàn)圖1。排除87篇重復(fù)文獻(xiàn)后剩余107篇，進(jìn)一步排除15篇無(wú)關(guān)研究，43篇綜述、摘要類文獻(xiàn)，以及14 篇?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)，最后35篇文獻(xiàn)查找全文進(jìn)一步篩查。排除27 篇文獻(xiàn)，其中26篇無(wú)法提取數(shù)據(jù)或數(shù)據(jù)不足，1篇研究的對(duì)照組為非健康人群，最后Meta分析共納入8篇文獻(xiàn)[4-11]，包括2篇英文文獻(xiàn)及5篇中文文獻(xiàn)，共計(jì)273例RA患者和183例對(duì)照人群。7項(xiàng)研究數(shù)據(jù)來(lái)自中國(guó)，包括1個(gè)維吾爾族和6個(gè)漢族，只有1項(xiàng)研究是來(lái)自高加索人群。有2項(xiàng)研究同時(shí)檢測(cè)了外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）和血漿樣本中miR-155表達(dá)[6-7]。納入文獻(xiàn)基本特征見(jiàn)表1。

2.2 Meta分析結(jié)果

MiR-155與RA相關(guān)性的Meta分析結(jié)果見(jiàn)圖2～4。不同的研究檢測(cè)miR-155水平時(shí)使用了不同的檢測(cè)標(biāo)本，包括外周血PBMC、WBC、血清和血漿。其中有2個(gè)研究[6-7]文中提到使用的外周血單核細(xì)胞，文中細(xì)胞提取方法提取的應(yīng)為外周血WBC，因此Meta分析時(shí)上述兩個(gè)研究樣本類型認(rèn)為是WBC?；跈z測(cè)樣本的不同，進(jìn)行亞組分析。

2.2.1 PBMC中miR-155與RA相關(guān)性 5個(gè)研究采用外周血PBMC細(xì)胞檢測(cè)miR-155表達(dá)水平[4，6-9]，共有179例RA患者及127例正常對(duì)照。異質(zhì)性檢驗(yàn)提示研究間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性（I2=93%，P＜0.000 01），采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行合并效應(yīng)量估計(jì)。Meta分析結(jié)果顯示RA患者PBMC中miR-155水平高于正常人群[MD = 1.10，95%CI（0.15，2.06）]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.02）（圖2）。

2.2.2 WBC細(xì)胞中miR-155與RA相關(guān)性 有2個(gè)研究采用WBC細(xì)胞檢測(cè)miR-155表達(dá)水平[9-10]，共有60例RA患者及40例正常對(duì)照。異質(zhì)性檢驗(yàn)提示研究間有統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性（I2=80%，P=0.03），采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。Meta分析結(jié)果提示W(wǎng)BC中miR-155表達(dá)水平不增加RA的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[MD = 0.34，95%CI（-0.65，1.34）]，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.50）（圖3）。

2.2.3 血漿miR-155與RA相關(guān)性 有2個(gè)研究同時(shí)檢測(cè)了血漿中miR-155[6-7]；共有77例RA患者及45例正常對(duì)照。異質(zhì)性檢驗(yàn)提示研究間有統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性（I2=87%，P=0.006），采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。結(jié)果顯示血漿miR-155表達(dá)水平不增加RA的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[MD = 0.24，95%CI（-0.83，1.31）]，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.66）（圖4）。僅有一篇文獻(xiàn)檢測(cè)血清中miR-155表達(dá)水平。

2.2.4 敏感性和發(fā)表偏倚分析 通過(guò)敏感性分析評(píng)價(jià)各研究對(duì)SMD和95% CI的影響，相應(yīng)的SMD無(wú)顯著性變化。通過(guò)Begg漏斗圖（P=0.858）或Egger回歸（P＞0.1）沒(méi)有發(fā)現(xiàn)miR-155與RA易感性之間的相關(guān)性存在發(fā)表偏倚（圖5）。

表1 納入文獻(xiàn)基本特征

表1 續(xù)表

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

圖2 PBMC中miR-155與RA風(fēng)險(xiǎn)Meta分析森林圖

圖3 WBC中miR-155與RA風(fēng)險(xiǎn)Meta分析森林圖

圖4 血漿miR-155與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎風(fēng)險(xiǎn)Meta分析森林圖

圖5 miR-155與RA相關(guān)性漏斗圖

3 討論

miRNA參與炎癥疾病致病機(jī)制，miR-155無(wú)疑是其中研究最為熱門的miRNA之一，對(duì)疾病的診斷和預(yù)測(cè)具有巨大的潛在價(jià)值[12]。功能分析顯示過(guò)表達(dá)miR-155或miR-155敲低都會(huì)導(dǎo)致自身抗體和促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生異常[13]，與關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。因此薈萃分析不同標(biāo)本來(lái)源的miR-155與RA的相關(guān)性有助于探討何種形式的miR-155是RA的風(fēng)險(xiǎn)因素，以及建議其作為一種診斷性生物標(biāo)志物的合適檢測(cè)標(biāo)本。

本文Meta分析273例RA病例和183例健康對(duì)照組中miR-155與RA的關(guān)系。根據(jù)檢測(cè)樣本不同，我們分別進(jìn)行PBMC、WBC和血漿亞組分析，僅PBMC 中miR-155與RA風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，提示其是RA的危險(xiǎn)因素。WBC、血漿標(biāo)本結(jié)果提示二者均沒(méi)有相關(guān)。miR-155異常表達(dá)于RA患者外周血多種樣本中，Meta結(jié)果提示檢測(cè)PBMC中的miR-155結(jié)果可能更為穩(wěn)定，外周血PBMC中miR-155可作為合適的檢測(cè)標(biāo)本。細(xì)胞外血漿容易受到凝血過(guò)程影響，從而影響血漿miRANs譜[12]，這可能部分解釋了血漿miR-155與RA之間的陰性關(guān)系。此外不同研究采用miR-155表達(dá)方式和內(nèi)參計(jì)算方法存在差異，也可能改變miRNA-155與RA相關(guān)性。本文納入研究樣本量少可能是另一個(gè)更為重要原因，今后需要更多的樣本來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證本文結(jié)論。

本人納入文獻(xiàn)研究對(duì)象主要是中國(guó)人群，包括漢族和維吾爾族，只有一項(xiàng)研究為高加索人。西方國(guó)家RA研究表明，miR-155在全血、血清、血漿、PBMC和Tregs表達(dá)均增高。有研究表明不同種族miRNA表達(dá)譜與循環(huán)miRNA濃度有關(guān)，這意味著miRNA譜特征在不同種族之間存在差異。

本文Meta分析存在一定局限性。首先納入研究數(shù)量偏少，樣本量也較小。亞組分析時(shí)血漿和WBC文獻(xiàn)少，僅一項(xiàng)研究檢測(cè)血清miR-155，無(wú)法得出相應(yīng)結(jié)論，理解WBC和血漿的陰性結(jié)論也需謹(jǐn)慎。其次，本文納入的研究以中文文獻(xiàn)為主，因此結(jié)論外推到其他種族時(shí)需謹(jǐn)慎理解?？傊疚腗eta分析結(jié)果提示外周血PBMC中miR-155是RA的危險(xiǎn)因素，今后需樣本量更大、種族更多的研究來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證二者風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系。