張鵬等

[摘要]目的：探索Tenascin C在瘢痕疙瘩組織的表達(dá)及其意義。方法：使用免疫組化方法對(duì)15例瘢痕疙瘩組織和正常皮膚組織成纖維細(xì)胞表達(dá)的Tenascin C表達(dá)進(jìn)行檢查。結(jié)果：與正常皮膚成纖維細(xì)胞相比，瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞高表達(dá)Tenascin C，具有顯著差異，P＜0.01。結(jié)論：瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞自分泌產(chǎn)生Tenascin C，在瘢痕疙瘩組織高表達(dá)，是瘢痕疙瘩組織的特異性標(biāo)志物。

[關(guān)鍵詞]瘢痕疙瘩；Tenascin C；成纖維細(xì)胞

[中圖分類號(hào)]R619+.6[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008-6455（2012）08-1330-03

瘢痕疙瘩是皮膚損傷后傷口愈合異常現(xiàn)象，其形成機(jī)制仍然未知[1]。肌腱蛋白C（Tenascin C）、XIV膠原蛋白和纖維連接蛋白均屬于細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白。胚胎發(fā)育過(guò)程中，間充組織含有豐富的Tenascin C，但在成人組織中的分布卻較少[2]。在皮膚的炎癥反應(yīng)、傷口愈合過(guò)程和增生性皮膚疾病中Tenascin C的表達(dá)水平較高，而正常皮膚組織含量很低[3]。XIV膠原蛋白纖維和纖維連接蛋白構(gòu)成人皮膚的真皮的主要成分，但是Tenascin C、XIV膠原蛋白和纖維連接蛋白在瘢痕疙瘩的表達(dá)卻未見(jiàn)報(bào)道。我們用免疫組化方法研究Tenascin C在瘢痕疙瘩和正常皮膚的成纖維細(xì)胞分泌的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白表達(dá)情況，為篩查瘢痕疙瘩特異性標(biāo)記物以及抗瘢痕疙瘩的發(fā)生、發(fā)展提供研究資料。

1材料和方法

1.1 試劑：胎牛血清（Gbico公司）。DMEM培養(yǎng)基（Hyclone公司）。青鏈霉素（杭州四季青生物公司）。兔抗人Tenascin C單克隆抗體、兔抗人纖維連接蛋白、堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗兔IgG（北京博奧森生物公司）。INT/BCIP堿性磷酸酶顯色試劑（上海生工生物工程公司）。

1.2 患者篩選以及皮膚組織的處理：取材自2009年8月～2010年12月期間，經(jīng)齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院整形美容科確診的15例瘢痕疙瘩患者為實(shí)驗(yàn)組，年齡19～41歲，其中男11例、女4例。術(shù)中切取患者全層瘢痕組織標(biāo)本；同例標(biāo)本瘢痕疙瘩周圍附帶的少量正常皮膚組織為對(duì)照組。

1.4 免疫組化染色：按照免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行堿性磷酸酶免疫組化染色，添加兔抗人Tenascin C單克隆抗體（1:50），4℃過(guò)夜，PBS清洗后，堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗兔IgG（1:1000）孵育1h，以INT/BCIP堿性磷酸酶顯色試劑顯色，蘇木精復(fù)染。

1.5 結(jié)果判斷：使用OLYMPUS BX5型顯微鏡觀察，將成纖維細(xì)胞免疫組以染色強(qiáng)度劃分為五個(gè)等級(jí)，從0到4分別對(duì)應(yīng)陰性，弱，一般，強(qiáng)和特強(qiáng)染色。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：使用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件，配對(duì)資料使用t檢驗(yàn)，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

3討論

Tenascin C由成纖維細(xì)胞或肌細(xì)胞等間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，Tenascin C強(qiáng)烈表示在多個(gè)器官胚胎發(fā)育過(guò)程中，參與上皮、間質(zhì)的相互作用，而成人皮膚中的表達(dá)和分布比較局限[2]。Tenascin C在皮膚炎癥或皮膚增生性疾病表達(dá)增高，被認(rèn)為皮膚惡變的標(biāo)志性物質(zhì)之一[4]。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)Tenascin C在痤瘡，硬皮病或過(guò)度增生性皮膚病等良性病變中表達(dá)也增高[5-6]。體外研究表明，Tenascin C調(diào)節(jié)細(xì)胞與纖維連接蛋白，而干擾成纖維細(xì)胞增殖、遷移和黏附，導(dǎo)致傷口收縮和誘導(dǎo)皮膚基因差異性表達(dá)[7]，Tenascin C促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞遷移，在傷口真皮層或傷口邊緣肉芽組織強(qiáng)烈表達(dá)。

本實(shí)驗(yàn)使用的瘢痕組織未進(jìn)行過(guò)其他治療措施，瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞表達(dá)Tenascin C增高，說(shuō)明瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞會(huì)自分泌高表達(dá)的Tenascin C。我們的研究結(jié)果證實(shí)，體外培養(yǎng)的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞是通過(guò)自分泌機(jī)制表達(dá)Tenascin C，這與以往學(xué)者觀察到的瘢痕疙瘩組織切片Tenascin C染色強(qiáng)度較高結(jié)果相似[8]，這可能是由于瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞會(huì)高表達(dá)TGF-β1，持續(xù)高表達(dá)的TGF-β1會(huì)促進(jìn)Tenascin C分泌，進(jìn)而促使XIV膠原蛋白和纖維連接蛋白的合成[9]。

盡管許多間質(zhì)細(xì)胞能夠表達(dá)Tenascin C，但瘢痕疙瘩中成纖維細(xì)胞是Tenascin C蛋白質(zhì)的主要來(lái)源，其表達(dá)能反映正在進(jìn)行的皮膚纖維化進(jìn)程。瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞是否需要外界刺激或以自分泌/旁分泌的方式產(chǎn)生Tenascin C的機(jī)制尚不知曉。我們研究發(fā)現(xiàn)，瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞不需要外界因素刺激，即可以上調(diào)Tenascin C表達(dá)。因此，我們認(rèn)為瘢痕疙瘩的成纖維細(xì)胞以自分泌機(jī)制分泌Tenascin C，同時(shí)通過(guò)Tenascin C對(duì)成纖維細(xì)胞自身的反饋機(jī)制，進(jìn)一步高表達(dá)Tenascin C，進(jìn)而導(dǎo)致持續(xù)化的的皮膚纖維化過(guò)程的啟動(dòng)或持續(xù)，這一假設(shè)，我們將在后繼實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行深入驗(yàn)證。

總之，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常皮膚相比，Tenascin C蛋白在瘢痕疙瘩組織中顯著分布，Tenascin C是一個(gè)很好的瘢痕疙瘩標(biāo)記物，闡明Tenascin C在瘢痕組織的表達(dá)或分布，將為診斷瘢痕疙瘩發(fā)生、發(fā)展提供檢驗(yàn)手段，同時(shí)也為以抗Tenascin C表達(dá)為手段，治療瘢痕疙瘩提供新手段。

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[收稿日期]2012-04-08 [修回日期]2012-06-27

編輯/張惠娟