畢長(zhǎng)紅

（吉林省德惠市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，吉林 德惠 130300）

習(xí)慣上把體內(nèi)的抗原抗體反應(yīng)稱為免疫反應(yīng)，體外的抗原抗體反應(yīng)因?yàn)橹饕揽坑诖嬖谟谘逯械目贵w來進(jìn)行，所以稱為血清學(xué)反應(yīng)。

1 血清學(xué)反應(yīng)的特點(diǎn)

抗原抗體反應(yīng)具有比較嚴(yán)格的特異性。例如布氏桿菌的抗原只能與布氏桿菌的抗體發(fā)生反應(yīng)；破傷風(fēng)毒素只能與破傷風(fēng)抗毒素反應(yīng)等。

合適的比例。一定量的抗原只能與一定量的抗體結(jié)合才出現(xiàn)可見反應(yīng)。一般認(rèn)為抗原分子是多價(jià)的，可以結(jié)合多個(gè)抗體分子（一般可結(jié)合3～6 個(gè)抗體分子），而抗體分子是雙價(jià)的，可與兩個(gè)抗原分子結(jié)合，只有兩者比例合適，才能構(gòu)成較大的集團(tuán)，發(fā)生可見的凝集或沉淀反應(yīng)。

可逆性?？乖贵w結(jié)合是表面分子的結(jié)合，具有相對(duì)穩(wěn)定性。在某種情況下，能出現(xiàn)可逆反應(yīng)。例如毒素和抗毒素結(jié)合后仍可將其完整的分離開，并不影響毒素的毒性。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 直接凝集反應(yīng)（細(xì)菌凝集反應(yīng)）

有玻片法和試管法兩種。玻片法是將已知的免疫血清（或待檢血清）與未知的抗原（或已知的抗原）各1 滴，在玻片上混合，晃動(dòng)玻片1～2 min，出現(xiàn)可見的凝集現(xiàn)象者為陽性反應(yīng)。在獸醫(yī)實(shí)踐工作中，常用于傳染病的診斷，如布氏桿菌病及雞白痢等。此外，還可用于各型沙門氏桿菌的定性。試管法通常用已知抗原檢查待檢血清中相應(yīng)抗體的有無及其含量（凝集價(jià)）。在一系列試管中，將被檢血清用生理鹽水作倍比稀釋，各加入等量已知抗原，以最高稀釋度仍有明顯凝集現(xiàn)象者為該被檢血清的效價(jià)。本法也常用于布氏桿菌及馬副傷寒等病的診斷。

2.2 間接凝集反應(yīng)

可溶性抗原與其相應(yīng)的抗體不能發(fā)生肉眼可見的凝集反應(yīng)，若將其吸附在顆粒性物體表面（稱為致敏）再與相應(yīng)抗體結(jié)合，便可出現(xiàn)可見的凝集現(xiàn)象，稱為間接凝集反應(yīng)。若用紅細(xì)胞作為載體，便稱為間接血細(xì)胞凝集試驗(yàn)（簡(jiǎn)稱間接血凝）。本法敏感性極高，能測(cè)出極微量的抗體，獸醫(yī)工作中常用來檢查炭疽桿菌病、鉤端螺旋體病等多種畜禽傳染病的診斷和鑒定菌型的工作中。

2.2.1 紅細(xì)胞懸浮液的準(zhǔn)備

無菌采取綿羊脫纖維血，用pH 7.2磷酸鹽緩沖液洗滌3次，制成3%紅細(xì)胞懸浮液。為了提高紅細(xì)胞同抗原的結(jié)合能力，在敏化前先經(jīng)鞣酸處理或在致敏時(shí)加入重偶氮聯(lián)苯胺。為了延長(zhǎng)致敏紅細(xì)胞的保存時(shí)間，可在敏化之前或之后做醛化處理。

醛化處理：紅細(xì)胞懸浮液100 mL，加甲醛溶液40 mL，置37 ℃水浴中90 min～2 h，取出用生理鹽水洗滌3～4 次，最后制成3%紅細(xì)胞懸浮液，。

鞣酸化處理：紅細(xì)胞懸浮液加等量的鞣酸生理鹽水溶液（1：30 000），置37 ℃水浴中15 min，取出用生理鹽水洗滌2～3次，最后制成3%紅細(xì)胞懸浮液。

2.2.2 紅細(xì)胞敏化

取抗原與3%紅細(xì)胞懸浮液（經(jīng)醛化和鞣化處理）等量混合，置37 ℃水浴中15 min，取出用磷酸緩沖液（加有1%兔血清，pH 7.2）洗滌3次，最后制成3%紅細(xì)胞懸浮液，即為致敏紅細(xì)胞液。

2.2.3 被檢血清

以常法獲得血清，以生理鹽水做1：5 稀釋，在56 ℃水浴中滅活30 min。

2.2.4 操作方法

取有凹孔的塑料板一塊（亦可用小試管）按規(guī)定將不同稀釋度的被檢血清加入各凹孔中，每孔加入已致敏的紅細(xì)胞懸浮液一滴，混勻，置37 ℃溫箱中1～2 h后觀察結(jié)果。

2.2.5 判定結(jié)果

紅細(xì)胞在孔底形成不規(guī)則的網(wǎng)狀凝集物為陽性反應(yīng)。紅細(xì)胞沉降于孔底呈圓點(diǎn)狀，無凝集現(xiàn)象為陰性反應(yīng)。

2.3 病毒的血細(xì)胞凝集和血細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn)

有些病毒（如流感病毒、雞新城疫病毒）與動(dòng)物紅細(xì)胞混懸液混合后能使紅細(xì)胞發(fā)生凝集，但這種凝集作用可為相應(yīng)的抗體所抑制。因此，可以用已知的免疫血清（抗體）鑒定未知的病毒（抗原）。亦可以用已知的病毒（抗原）來檢查病畜血清中的抗體和抗體的抑制價(jià)。前者稱為血細(xì)胞凝集試驗(yàn)，后者稱為血細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn)。獸醫(yī)工作中常用于診斷雞新城疫等病。

3 影響凝集反應(yīng)的因素

電解質(zhì)：凝集反應(yīng)必須有適量電解質(zhì)參加。實(shí)驗(yàn)中常用生理鹽水來稀釋血液或細(xì)菌懸液，但過多的鹽分能產(chǎn)生“鹽凝集”（氰化鈉增到一定濃度時(shí)，即使血液沒有抗體，亦能使細(xì)菌懸液發(fā)生凝集）。

酸堿度：凝集反應(yīng)以在pH 6～8 的環(huán)境中進(jìn)行最合適，若偏酸性，達(dá)到了細(xì)菌蛋白的等電點(diǎn)（pH 4.3）時(shí)，即或在無相應(yīng)抗體存在的情況下，細(xì)菌亦能發(fā)生凝集現(xiàn)象，稱為“酸凝集”。

溫度：不同的凝集反應(yīng)對(duì)溫度的要求亦不相同，有的在4 ℃，有的在室溫，有的在37 ℃下進(jìn)行反應(yīng)。一般情況下，溫度從0～30 ℃凝集反應(yīng)的速度隨溫度的升高而迅速增加，增高溫度可促進(jìn)抗原顆粒的分子運(yùn)動(dòng)，使抗原抗體的分子互相撞擊粘著的機(jī)會(huì)增多，因而加速凝集塊的形成。

振蕩：混合物的振蕩可增加抗原抗體分子間的撞擊，加快反應(yīng)速度。

抗原和抗體的比例：在凝集反應(yīng)中，抗原抗體的比例最適當(dāng)時(shí)，反應(yīng)出現(xiàn)最好。抗體濃度過高時(shí)反而不出現(xiàn)凝集，這種現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。