王曉娜

（沈陽沈化院測試技術有限公司，遼寧沈陽 110000）

1 材料與方法

1.1 實驗動物

5周齡SPF等級小鼠80只，雌雄各40只。

1.2 實驗器材

采血針、酒精棉球、采血管、CO2麻醉罐、解剖板、手術剪、鑷子等。

1.3 麻醉方法

采用CO2麻醉法麻醉，將小鼠放入麻醉罐中，麻醉到適當深度（身體松弛，呼吸深而緩）后取出，取出后將其罩在麻醉面罩下。

1.4 消毒方法

將麻醉后的小鼠腹部朝上固定于解剖板上，用固定針固定其四肢，用0.9 %生理鹽水將動物腹部皮毛噴濕。

1.5 采血過程

采血時間選擇在上午空腹進行，拿取采血管，從生殖器上部至劍狀軟骨，用手術剪呈“V”字型開腹，右手取一張潔凈濾紙輕輕將腸管推向動物身體左側，充分暴露出中間粉紅色腹主動脈，將采血針針尖斜面朝下向心臟方向刺入腹主動脈，進針速度要迅速，進針手不可亂動，保持針尖水平防止?jié)L針，見采血針內(nèi)有回血左手立即將采血管插入采血針尾部，采血量達到檢測需求方可拔出采血針。依據(jù)檢測要求選擇相應的抗凝劑，含有抗凝劑的采血管在采血后應該立即上下顛倒混勻，若采集時間稍長則需要邊采血邊搖管，使血液與抗凝劑充分混合，防止血液凝固，注意動作要輕緩。采血過程中不斷觀察小鼠，麻醉面罩要根據(jù)小鼠狀態(tài)取下或罩上，采血后，用手術剪剪斷動物腹腔大血管，充分放血，將潔凈濾紙蓋在其上面防止血液亂濺。

2 注意事項

2.1 麻醉深度

觀察小鼠狀態(tài)，麻醉深度要掌握好（CO2濃度為50 %～80 %，O2濃度為20 %左右），因為CO2麻醉法容易蘇醒，所以根據(jù)麻醉程度和采血時間選擇是否需要持續(xù)麻醉，若需要，把面罩罩在動物口鼻處，持續(xù)通入CO2與O2的混合氣體。

2.2 掌握正確進針方法

小鼠動脈沒有大鼠清晰，所以進針一定要仔細，進針要平，勿要扎穿，若試驗需要檢測指標多并需要換采血管，換管要小心，勿將采血針帶出，帶抗凝劑的采血管要及時搖勻防止血液凝固。

3 結果

（1）80只小鼠平均每只采血量在2.0 ml左右；血常規(guī)與生化測試量足夠；

（2）每只小鼠大約采血時間在2min左右；

（3）測試指標滿足要求，動物發(fā)生溶血情況極少；

（4）小鼠臟器完整，不影響后期解剖。

4 討論

目前，小鼠常用的采血方法有眼眶后靜脈叢采血法、眼球摘除采血法、心臟采血法、剪尾 采血法等[2]，不同的采血方法適用于不同的實驗用途和所需血量。眼眶采血法采血量約為0.2～0.3 ml，可重復采血，但對眼球的損傷是巨大的，不利于后期病理診斷；眼球摘除采血法采血量一般約為0.3～0.4 ml，缺點是不可重復采血，嚴重可導致小鼠失明，并且容易發(fā)生感染的情況，可致小鼠死亡，不符合動物福利基本原則；心臟采血法采血量可達0.8 ml，但由于小鼠個體小、心臟小、心臟搏動快，采血時位置不易固定，所以操作難度系數(shù)加大；斷尾采血法，雖可以連續(xù)多次采血，但每次采血量極少，不到0.1 ml，不適于需要較多血量的實驗。

根據(jù)需要妥善地選擇采血方法是實驗成敗的關鍵環(huán)節(jié)，其方法的優(yōu)劣主要看采血的數(shù)量、質(zhì)量及操作的難易程度等。不同采集方法對血常規(guī)的檢驗結果有不同的影響[3]。而我們實驗室通過大量的試驗證明，腹主動脈采血法采血量大，無需多次采血，對血常規(guī)檢測、生化指標檢測、血凝檢測、血液涂片均有顯著性的意義，解決了因采血量不夠而導致所測指標無意義的現(xiàn)象。腹主動脈采血法即采即測，速度快，不費時間，對試驗后續(xù)解剖提供很大的幫助。

有相關工作的人員應該知道不當?shù)难翰杉椒赡軐е卵喝苎獜亩绊憴z測的結果，我認為這一般是與采血者的技術分不開的。通常來說眼眶、尾尖等采血方法很容易造成溶血；而頸動靜脈、斷頭、心、腹主動脈等方法采血則發(fā)生溶血概率較小。腹主動脈采血法唯一缺點就是對麻醉人員及采血人員的要求極高，不但能夠準確判斷出腹主動脈走向，更能夠通過觀察小鼠狀態(tài)立即判斷是否處于最佳采血狀態(tài)，深度麻醉將會導致小鼠死亡，麻醉過淺也將導致小鼠在采血過程中蘇醒過來，而我們也通過多次的臨床試驗證明血液測試結果滿足要求，不會出現(xiàn)因采血量不足而有指標測不出來的現(xiàn)象，所以在具備了專業(yè)的采血技術之后嘗試腹主動脈采血無疑是最佳的選擇。