張振宇 柴 磊 李 明

（1.濟源市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗中心，河南濟源 459000；2.焦作市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心，河南焦作 454001）

1 實驗部分

1.1 儀器

UPLC Xevo TQ MS超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（Waters公司）；MS 3 basic漩渦混合器（IKA公司）；高速冷凍離心機（香港力康公司）。

1.2 試劑與材料

乙腈、甲醇（fisher，色譜純60），標準品全部購自于阿爾塔科技有限公司，標準液濃度為100μg/ml。Oasis PRiME HLB 固相萃取柱（Waters公司，60 mg/3ml）。鹽包（安捷倫公司，4g無水硫酸鈉，1g氯化鈉）

1.3 色譜條件

色譜柱：CORTECS UPLC C18 Column，（1.6 μm，2.1 mm X 100 mm）；流動相A為乙腈；流動相B為0.2%甲酸水梯度洗脫；流速為0.4 ml/min；柱溫為40℃；進樣量為10μl。

1.4 質(zhì)譜條件

電離方式：除酰胺醇類采用電噴霧負離子模式，其他均為電噴霧正離子模式；多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）采集；毛細管電壓2.7kV離子源溫度為150℃；脫溶劑氣溫度為500℃；脫溶劑氣流量為1000 L/h。

1.5 樣品處理

稱取樣品2.00g，置于50ml離心管內(nèi)，加適量的內(nèi)標溶液，加鹽包，再加入0.2%甲酸乙腈10ml，渦旋0.5min后，超聲10min，震蕩提取15min。12000r/min離心5min，取5ml上清液，過Oasis PRiME HLB柱，用3 ml0.2%甲酸乙腈過柱，收集全部流出液，于50℃下用溫和氮氣吹至近干。并用1 ml10%乙腈溶解，渦旋過0.22μm濾頭后供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理優(yōu)化

2.1.1 脫水劑的確定

用無水硫酸鈉作為脫水劑，并加氯化鈉等鹽類，從而形成飽和鹽溶液和提取劑乙腈的有機相分層，促使待測物從水相轉(zhuǎn)移到有機相中。本研究優(yōu)化了無水硫酸鈉和氯化鈉的用量，經(jīng)過試驗，乙提取后再加4g無水硫酸鈉和1g氯化鈉。

2.1.2 樣品提取

實驗中采用0.2%甲酸、1%甲酸和2%甲酸三種不同比例酸化乙腈相結(jié)合的方式沉淀蛋白并提取目標物，使用無水硫酸鈉除去樣品和提取液中的水分。同時比較了乙腈和樣品比例為3：1、4：1 和5：1分別提取。用過實驗表明當其中采取2%甲酸乙腈和樣品比例為5：1 的蛋白質(zhì)沉淀效果最好，但在此條件下對磺胺類回收率較低。用0.2%甲酸乙腈、5：1 比提取并沉淀蛋白的條件，其回收率可大幅提高。所以本實驗選用該條件進行樣品提取。

2.1.3 樣品凈化

本研究采用Oasis MCX、Oasis HLB、Oasis PRiME HLB 三種固相萃取小柱進行樣品凈化處理比較。Oasis MCX和Oasis HLB萃取小柱要求大比例水相的上樣，這就要求把提取液中的乙腈置換成水相，而且各待測物在不同pH值下保留差異較大。而Oasis PRiME HLB 萃取小柱可以用提取液直接過柱，將干擾物被吸附于固相萃取柱中，對所有的待測物無吸附，同時在凈化過程中也省去了溶劑轉(zhuǎn)換的過程，簡化了操作步驟。本實驗采用Oasis PRiME HLB萃取小柱進行樣品的凈化。

2.2 方法學(xué)驗證

2.2.1 基質(zhì)標準曲線與檢出限

為降低基質(zhì)效應(yīng)影響，保證檢測結(jié)果可靠準確，采用基質(zhì)標準進行定量，喹諾酮類、磺胺類、β-激動劑、四環(huán)素類為0.5，1，5，10，20，50 ng/ml酰胺醇類為0.1，0.2，0.5，2，5，10 ng/ml一系列標準溶液，得到相應(yīng)的線性回歸方程。結(jié)果表明：在此質(zhì)量濃度范圍內(nèi)所有組分線性良好，相關(guān)系數(shù)R大于0.99。

2.2.2 回收率、精密度

制備1.0、5.0、10.0 μg/kg三個添加濃度的陽性生鮮乳，每個水平5 平行實驗，三個水平樣品的回收率在60～130%之間，RSD＜20%。方法的準確性和重復(fù)性良好。

3 結(jié)論

本文建立了無水硫酸鈉除水、0.2%甲酸乙腈溶液性提取及Oasis PRiME HLB柱凈化超高效液相色譜- 三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)同時測定生鮮乳中酰胺醇類、喹諾酮類、磺胺類、β-激動劑、四環(huán)素類26種獸藥殘留方法。該法與現(xiàn)行國家標準、行業(yè)標準相比在保證準確性、靈敏度同時，前處理方法更簡單快速。