劉蓉蓉

（馬鞍山市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)中心，安徽馬鞍山 243000）

新城疫與禽流感都是由病毒引起的使禽類(lèi)發(fā)生高度接觸性的烈性傳染病[1]。禽流感病毒中的H5亞型能夠造成雞群高發(fā)病率和高死亡率，禽流感H7亞型病毒對(duì)人類(lèi)健康存在威脅[2]。新城疫和禽流感對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成的損失大、風(fēng)險(xiǎn)高，控制疫病的主要方法還是接種疫苗[3]。禽流感H5亞型一直被列入國(guó)家強(qiáng)制免疫計(jì)劃，2017年下半年，禽流感H7亞型也實(shí)施強(qiáng)制免疫措施。我市制定了《2018年全市動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃實(shí)施方案》，并在2018年6月和12月共抽選15個(gè)規(guī)?；仪蒺B(yǎng)殖場(chǎng)447份血清樣品，進(jìn)行新城疫、禽流感H5亞型、禽流感H7亞型免疫抗體監(jiān)測(cè)工作，評(píng)估免疫效果，旨在掌握馬鞍山市重點(diǎn)家禽疫情防控動(dòng)態(tài)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫情隱患，指導(dǎo)科學(xué)免疫，為科學(xué)防控提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

1 材料和方法

1.1 材料

春季待檢血清：2018年5月分別采集自馬鞍山市四個(gè)縣（區(qū)）的8個(gè)規(guī)模化家禽養(yǎng)殖場(chǎng)，每場(chǎng)30份血清。秋季待檢血清：2018年11月分別采集自馬鞍山市四個(gè)縣（區(qū)）的7個(gè)規(guī)?；仪蒺B(yǎng)殖場(chǎng)，其中6場(chǎng)每場(chǎng)30份，1場(chǎng)27份血清。

紅細(xì)胞混懸液：采集未免疫禽流感、新城疫疫苗的3只健康公雞血加入阿氏液混勻，用pH7.2的0.01mol/LPBS液離心洗滌3次，去掉上層白細(xì)胞，再用同-PBS液配制1%紅細(xì)胞混懸液并4℃冰箱保存。

檢測(cè)試劑：新城疫病毒血凝抑制試驗(yàn)抗原購(gòu)于哈爾濱國(guó)生生物，生產(chǎn)批號(hào)：2017052、2180607；禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原購(gòu)于哈獸研和哈爾濱維科生物，生產(chǎn)批號(hào)：2017001、2018003；禽流感病毒H7亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原購(gòu)于哈獸研和哈爾濱國(guó)生生物，生產(chǎn)批號(hào)：2017012、20180815。

1.2 儀器與耗材

Eppendorf移液器、96孔V型微量反應(yīng)板、微型振蕩器、普通高速離心機(jī)。

1.3 檢測(cè)方法

依據(jù)《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T16550-2008）、《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936-2003）中血凝抑制（AI）試驗(yàn)檢測(cè)。

1.4 結(jié)果判定

新城疫以完全抑制5個(gè)HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI效價(jià)。HI<5log2判定為陰性，HI≥5log2判定為陽(yáng)性。禽流感以完全抑制4個(gè)HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI效價(jià)。HI<4log2判定為陰性，HI≥4log2判定為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

對(duì)全年采集的15個(gè)規(guī)?；仪蒺B(yǎng)殖場(chǎng)共447份家禽血清進(jìn)行新城疫免疫抗體、禽流感H5亞型免疫抗體、禽流感H7亞型免疫抗體檢測(cè)。2018年春季免疫抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1和圖1，秋季免疫抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2和圖2。

根據(jù)圖表可知，春季集中免疫中，新城疫免疫抗體合格率達(dá)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（70%）有7家，其中合格率100%的有5家；禽流感H5亞型免疫抗體合格率全部達(dá)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，其中合格率100%的有6家；禽流感H7亞型免疫抗體合格率達(dá)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的有7家，其中合格率100%的有6家。全市平均抗體合格率分別是83%、95%、87%。各有一個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)沒(méi)有形成新城疫抗體和禽流感H7亞型抗體。

秋季集中免疫中，新城疫免疫抗體合格率全部達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，其中合格率100%的有5家；禽流感H5亞型免疫抗體合格率全部達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，其中合格率100%的有5家；禽流感H7亞型免疫抗體合格率達(dá)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)有6家，其中合格率100%的有5家。全市平均抗體合格率分別是97%、99%、86%。有一個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)沒(méi)有形成禽流感H7亞型抗體。

表1 春季家禽新城疫、禽流感H5亞型、禽流感H7亞型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

圖1 春季家禽新城疫、禽流感H5亞型、禽流感H7亞型免疫抗體合格率

表2 秋季家禽新城疫、禽流感H5亞型、禽流感H7亞型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

圖2 秋季家禽新城疫、禽流感H5亞型、禽流感H7亞型免疫抗體合格率

3 討論

開(kāi)展抗體監(jiān)測(cè)的目的不僅僅是診斷，更主要的是評(píng)價(jià)雞群的免疫狀況，并根據(jù)其監(jiān)測(cè)結(jié)果對(duì)免疫方案進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整或提供一些預(yù)警。本次對(duì)馬鞍山市四個(gè)縣（區(qū)）的15個(gè)規(guī)?；仪蒺B(yǎng)殖場(chǎng)共447份家禽血清進(jìn)行了集中檢測(cè)，初步掌握了2018年馬鞍山市新城疫、禽流感H5亞型、禽流感H7亞型的抗體水平和免疫狀況。

根據(jù)新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果可知，本次檢測(cè)的447份血清有47份抗體水平不合格，其中有30份均來(lái)自H場(chǎng)。新城疫不屬于強(qiáng)制免疫病種，該規(guī)模場(chǎng)沒(méi)有免疫新城疫疫苗，存在新城疫感染的風(fēng)險(xiǎn)和發(fā)病的可能。國(guó)內(nèi)曾發(fā)生過(guò)新城疫疫情[4]，建議該場(chǎng)加強(qiáng)免疫，防止疫情發(fā)生。

由禽流感H5亞型抗體檢測(cè)結(jié)果可知，15家規(guī)模場(chǎng)免疫抗體水平均達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，13家規(guī)模場(chǎng)免疫水平超過(guò)90%。表明禽流感H5亞型疫苗在我市家禽中免疫效果好，免疫程序有效，抗體水平較高，家禽受禽流感H5亞型病毒抗體保護(hù)。

由禽流感H7亞型抗體檢測(cè)結(jié)果可知，13家規(guī)模場(chǎng)免疫抗體水平超過(guò)90%，說(shuō)明政府提供的禽流感H5+7二聯(lián)苗是起到抗體保護(hù)作用的，楊澤林[5]等人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也驗(yàn)證了這一點(diǎn)。另外兩家規(guī)模場(chǎng)幾乎未產(chǎn)生禽流感H7亞型抗體，可能在新舊疫苗交替期間沒(méi)有免疫二聯(lián)苗。

秋季集中免疫與春季集中免疫抗體檢測(cè)結(jié)果對(duì)比可知，新城疫抗體水平和禽流感H5免疫抗體水平有所提升，可能與下半年免疫次數(shù)多，免疫周期長(zhǎng)等因素有關(guān)[6]。

檢測(cè)結(jié)果表明，我市對(duì)春秋兩季集中免疫工作重視程度較高，免疫效果較好。為了進(jìn)一步做好集中監(jiān)測(cè)工作，對(duì)于重點(diǎn)疫病要及時(shí)開(kāi)展免疫效果監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)，及時(shí)掌握免疫狀態(tài)，及時(shí)處理免疫不達(dá)標(biāo)、免疫失敗等情況。后期應(yīng)該擴(kuò)大監(jiān)測(cè)范圍，更科學(xué)地指導(dǎo)制定免疫程序，保障免疫效果[7]。