王超 李尚穎 李瑩

【摘要】 采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定化妝品中氟喹諾酮類藥物。樣品以甲酸水和乙腈作為提取溶劑，經(jīng)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分離檢測(cè)。為消除不同化妝品基質(zhì)帶來(lái)的差異，采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。13種氟喹諾酮的線性范圍均在1～50 μg·g-1之間，檢出限為0.05 μg·g-1。對(duì)空白樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，回收率在84.3%～111.6%之間，測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）在0.5%～6.5%之間。

【關(guān)鍵詞】 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;氟喹諾酮;化妝品

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2019.04.003

Abstract： UPLC-MS/MS was used for the determination of fluoroquinolones in cosmetics. The sample was extracted with formic acid solution and acetonitrile. The fluoroquinolones were detected by UPLC-MS/MS and quantified by matrix calibration curves. The linear ranges of 13 kinds of fluoroquinolones were within 1～50 μg·g-1，the detection limit was 0.3 μg·g-1. Recovery rates measured by standard addition method were in the range of 84.3%～111.6% with RSD （n=6） in range of 0.5%～6.5%.

Key words：? UPLC-MS/MS;fluoroquinolones;cosmetic

氟喹諾酮類藥物是喹諾酮藥物發(fā)展到第三代的產(chǎn)物，是人工合成抗菌藥，具有廣譜性殺菌作用，其組織滲透能力強(qiáng)，因此廣泛應(yīng)用于細(xì)菌感染性疾病的臨床治療中[1-3]。一些不法商家可能故意在化妝品中添加該類物質(zhì)，以求達(dá)到宣稱的祛痘或除螨效果，進(jìn)而牟取暴利。在化妝品中添加氟喹諾酮類物質(zhì)可能會(huì)刺激皮膚，引起皮膚過(guò)敏或皮炎等諸多的不良反應(yīng)。

目前，針對(duì)化妝品中氟喹諾酮類物質(zhì)的檢測(cè)報(bào)導(dǎo)較少，主要是采用高效液相色譜法[4-5]，但液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于食品等[6-15]各種領(lǐng)域，成為氟喹諾酮類物質(zhì)檢測(cè)的主要方法。超高效液相色譜法具有分析時(shí)間短和高分離度的特點(diǎn)，三重四級(jí)桿質(zhì)譜具有高靈敏度的優(yōu)勢(shì)，兩種方法聯(lián)用可以實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜樣品的痕量定量和確認(rèn)。

化妝品基質(zhì)復(fù)雜、提取難度大，在分析中往往受到高背景的干擾而難于定量，本研究通過(guò)盡量簡(jiǎn)單的前處理方法，采用液體、半固體和固體三種不同的基質(zhì)分別進(jìn)行驗(yàn)證，從而滿足實(shí)際工作過(guò)程中大批量不同種類樣品的檢測(cè)要求。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

1）Waters XEVO TQ型三重四級(jí)桿超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀;BECKMAN Avanti J-E型離心機(jī);MILLI-Q Avantage A10型純水機(jī);METTLE TOLEDO XS105型電子天平;Sartorius BT224S型電子天平;Speader 2H-2型渦旋混合器;AS3120A型超聲波清洗儀。

2）13種氟喹諾酮類對(duì)照品純度不低于90%。

3）混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1 mg/mL，精密稱取13種氟喹諾酮類對(duì)照品各10.0 mg置入同一10 mL量瓶中，少量甲酸溶解，用乙腈定容。

4）系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（μg/mL）：10，25，50，100，250，500，用乙腈稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

5）微孔濾膜為0.22 μm有機(jī)相濾膜。

6）乙腈、甲醇、甲酸為色譜純，試驗(yàn)用水為超純水。

1.2 儀器工作條件

1）色譜條件

Waters BEH C18色譜柱（2.1×100 mm，1.7 μm），柱溫35 ℃;進(jìn)樣量為10 μL。流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水，B為甲醇-乙腈混合溶液（1+1），流速0.4 mL·min-1，梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

2）質(zhì)譜條件

電噴霧離子源正離子（ESI+）多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式;毛細(xì)管電壓：0.5 kV;脫溶劑氣溫度：650 ℃;脫溶劑氣流速：850 L/Hr;錐孔氣流速：50 L/Hr;碰撞氣流速：0.15 mL/min;定量、定性離子以及參數(shù)見(jiàn)表2。

1.3 試驗(yàn)方法

稱取樣品0.200 g，置10 mL比色管中，加入2%甲酸水5 mL，渦旋10 s后，加入乙腈3 mL，渦旋30 s，超聲提取30 min，加入乙腈定容至刻度，渦旋1 min，5000 rpm離心5 min，取上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾后，按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理及檢測(cè)條件的選擇

2.1.1 提取方法

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，大部分的氟喹諾酮類化合物在酸性水溶液中具有良好的溶解性，本方法研究時(shí)采用2%甲酸水作為提取溶液，但僅用甲酸水溶液進(jìn)行提取樣品易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象且不易于過(guò)濾，因此本方法采用乙腈作為定容溶液，這樣既有利于目標(biāo)化合物的提取又可以保證定容的準(zhǔn)確性。

2.1.2 流動(dòng)相

由于氟喹諾酮類藥物在酸性溶液中溶解性更好，并且加入適量的酸更有助于待測(cè)物質(zhì)離子化，因此流動(dòng)相中水相采用0.1%甲酸水，而甲醇-乙腈混合溶液（1+1）作為有機(jī)相明顯好于甲醇和乙腈，所以實(shí)驗(yàn)最終選擇0.1%甲酸水和甲醇-乙腈混合溶液（1+1）體系作為流動(dòng)相，采用梯度洗脫在盡量短的分析時(shí)間對(duì)13種化合物進(jìn)行分離。

2.1.3 質(zhì)譜條件

將氟喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液注入離子源，在正離子模式下對(duì)13種物質(zhì)分別進(jìn)行毛細(xì)管電壓、錐孔電壓、碰撞氣流速、碰撞能量等質(zhì)譜條件的優(yōu)化，使母離子與子離子的信號(hào)強(qiáng)度的響應(yīng)值達(dá)到最大，并挑選最強(qiáng)的兩個(gè)子離子作為定量離子和定性離子，最優(yōu)的質(zhì)譜條件見(jiàn)表2。13種氟喹諾酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見(jiàn)圖1。

由圖1可以看出13種物質(zhì)在4.16～9.16 min內(nèi)依次出峰且峰型良好。

2.2 方法特異性試驗(yàn)

分別取固體、半固體、液體三種不同化妝品基質(zhì)樣品，按試驗(yàn)方法前處理后進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，結(jié)果表明三種基質(zhì)中均未含有氟喹諾酮類物質(zhì)，以這三種基質(zhì)進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)無(wú)干擾。

2.3 工作曲線及檢出限

稱取三種空白基質(zhì)樣品0.200 g，置10 mL比色管中，分別加入系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液50 μL，按照試驗(yàn)方法步驟進(jìn)行前處理，得到質(zhì)量濃度（μg/g）為1，2.5，5，10，25，50的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，以定量離子色譜圖中各組分的峰面積定量，加權(quán)系數(shù)為1/X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明待測(cè)物1～50 μg·g-1范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表3。該方法檢出限為0.05 μg·g-1。

2.4 回收試驗(yàn)

分別在陰性的固體、半固體、液體三種不同化妝品基質(zhì)中添加2.5、10、25 μg·g-1三個(gè)濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按試驗(yàn)方法處理，分別平行測(cè)定6次，計(jì)算13種氟喹諾酮的平均加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）結(jié)果見(jiàn)表4。

2.5 樣品分析

按試驗(yàn)方法對(duì)80批市售宣稱具有祛痘功能的化妝水、乳液、潤(rùn)膚膏霜等不同類型的化妝品樣品進(jìn)行檢測(cè)，其中2批次檢出氧氟沙星。

3 結(jié)語(yǔ)

本工作建立了超高效液相色譜-串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜法測(cè)定喹諾酮類物質(zhì)的方法，針對(duì)不同化妝品基質(zhì)進(jìn)行了考察，方法前處理過(guò)程簡(jiǎn)單，分析時(shí)間短，定量準(zhǔn)確，可以滿足大批量樣品快速檢測(cè)的要求，可為化妝品市場(chǎng)監(jiān)管提供參考依據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】

[1] 薛磊.氟喹諾酮類藥物藥理作用及不良反應(yīng)淺述[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志，2018（27）：192-193.

[2] 陳木娟.臨床氟喹諾酮類藥的藥理分析[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2016（8）：271-272.

[3] 焦文君.氟喹諾酮類藥物的藥理特點(diǎn)及研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2015（32）：280-281.

[4] 徐萬(wàn)幫，張莉，劉亞雄，等.一步提取-HPLC檢測(cè)化妝品中氟喹諾酮類抗生素研究[J].廣州化工，2012（7）：128-129+135.

[5] 鄭艷明，郭新東，冼燕萍，等.化妝品中7種氟喹諾酮類藥物的反相高效液相色譜法測(cè)定[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2009（2）：235-238.

[6] Louise J，Targa M M，Bazzan A J，et al.An LC–ESI–MS/MS method for residues of fluoroquinolones，sulfonamides，tetracyclines and trimethoprim in feedingstuffs：validation and surveillance[J].Food Additives & Contaminants：Part A，2018：1-15.

[7] Ziarrusta H，Val N，Dominguez H，et al.Determination of fluoroquinolones in fish tissues，biological fluids，and environmental waters by liquid chromatography tandem mass spectrometry[J].Analytical & Bioanalytical Chemistry，2017（27）：6359-6370.

[8] Fabiano Barreto，Cristina B.D.Ribeiro，Rodrigo Barcellos Hoff，et al.Development and validation of a high-throughput method for determination of nine fluoroquinolones residues in muscle of different animal species by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry with low temperature clean up [J].Journal of Chromatography ，2017（27）：131-139.

[9] 張晶，王桂琴.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞蛋中7種氟喹諾酮類藥物的殘留量[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2018（8）：64-70.

[10] 羅靜，鄭良清，尚吟竹，等.基質(zhì)固相分散-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)雞蛋中14種氟喹諾酮類藥物殘留[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2018（5）：654-658.

[11] 許燕平.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)雞肉中氟喹諾酮類藥物殘留[J].食品安全導(dǎo)刊，2018（9）：92.

[12] 周鑫，張建雄，李繼豐，等.超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飼料中7種氟喹諾酮類藥物[J].養(yǎng)殖與飼料，2018（1）：4-6.

[13] 陳磊，吳赟琦，趙志勇，等.QuEChERS/超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定土壤中19種氟喹諾酮類抗生素殘留[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2019（2）：194-200.

[14] 楊路平，焦燕妮，邵立君，等.超高效液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定飲用水中14種氟喹諾酮類抗生素的殘留量[J].理化檢驗(yàn)（化學(xué)分冊(cè)），2016（4）：397-401.

[15] 錢卓真，梁焱，王麗娟，等.分散固相萃取-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定沉積物中氟喹諾酮類藥物殘留[J].漁業(yè)研究，2018（4）：286-294.