王景順

(漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校一附院(漯河市中心醫(yī)院)輸血科，河南 漯河 462000)

在進(jìn)行輸血前進(jìn)行不完全抗體的篩查以及鑒定，能夠有效避免由于輸入含有對應(yīng)抗原的紅細(xì)胞而導(dǎo)致受血者發(fā)生免疫反應(yīng)，因此輸血前的不完全抗體篩查鑒定是臨床安全輸血的一項(xiàng)重要保障措施[1，2]。不完全抗體為完全抗體的一些片段，與抗原結(jié)合后在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)現(xiàn)象，不完全抗體也是引起機(jī)體發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)、免疫性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病以及交叉配血不合的重要原因[3，4]。臨床報道，在我國由于血型抗原抗體免疫因素而引發(fā)的輸血反應(yīng)高達(dá)12.6%，明顯高于西方發(fā)達(dá)國家。目前對于不完全抗體的檢測常用方法包括微柱凝膠法、凝聚胺法、抗人球蛋白法、鹽水以及木瓜酶等方法，各種方法各有利弊[5]。微柱凝膠法作為一種新的血清學(xué)技術(shù)，近年來獲得了較快發(fā)展，為了探索更具有臨床價值的不完全抗體檢測方法，本研究對比分析凝聚胺法以及微柱凝膠法檢測不完全抗體的臨床價值，現(xiàn)報告如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年3月-2017年1月在我院手術(shù)備血和治療用血患者8136例，其中男性患者3964例、女性患者4172例，年齡12d～87歲，平均年齡（42.75±15.62）歲。

1.2 儀器與試劑 譜細(xì)胞以及不完全抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒均購于上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司；抗人球白蛋白微柱凝膠卡購于長春博訊生物技術(shù)有限公司凝聚胺試劑盒購于珠海貝孛生物科技有限公司。

1.3 檢測方法 抽取受試者靜脈血3ml，使用乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-K2）抗凝處理，檢測前離心，分離血清。

凝聚胺法：在檢測管中加入受試者50μl血漿，將其配成2～3%篩選紅細(xì)胞，加入0.65ml混勻的低離子溶液，混勻后將其靜置1min（室溫），滴加1滴凝聚胺，混勻后離心15s（3400r/min），將上清液倒出后可見明顯凝集，再加入1滴枸櫞酸重懸液，輕輕搖動1min，1min內(nèi)散開凝集且在低倍鏡下觀察紅細(xì)胞呈游離狀態(tài)為陰性，而1min內(nèi)凝集未散開為陽性。

微柱凝膠法：取抗人球蛋白微柱凝膠卡，操作嚴(yán)格按照使用說明書進(jìn)行，將I～Ⅲ號篩選譜細(xì)胞配制成為0.8～1.2%，然后分別在I～Ⅲ號標(biāo)記好的微柱凝膠中加入50μl篩選紅細(xì)胞及50μl血漿，在37℃孵育器內(nèi)孵育15min后進(jìn)行離心5min（900～1500r/min）。未與抗體相結(jié)合的游離紅細(xì)胞沉積于凝膠卡的底部為陰性；凝集在一起的紅細(xì)胞分散在凝膠中或懸浮于微柱凝膠的上層，而對照組管內(nèi)的紅細(xì)胞則沉積于凝膠卡的底部為陽性。

確證實(shí)驗(yàn)：凝聚胺法以及微柱凝膠法篩查出的不完全抗體陽性采用鹽水法和抗人球蛋白法進(jìn)行不完全抗體鑒定，根據(jù)鑒定結(jié)果確定抗體的特異性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，計(jì)量資料采用（）表示，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測方法對不完全抗體檢出陽性率比較凝聚胺法檢出不完全抗體26例，檢出陽性率0.32%，既往輸血史21例、腫瘤術(shù)后受血者3例、多次妊娠受血患者2例。微柱凝膠法檢測不完全抗體43例，檢出陽性率0.53%，其中既往輸血史29例、多次妊娠受血患者7例、腫瘤術(shù)后受血患者7例。經(jīng)比較，微柱凝膠法檢出不完全抗體陽性率顯著高于凝聚胺法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），見表 1。

表1 兩種檢查方法對不完全抗體檢出情況比較

2.2 不完全抗體特異性鑒定 對凝聚胺法檢出的26例不完全抗體以及微柱凝膠法檢出的43例不完全抗體患者均采用譜細(xì)胞進(jìn)行抗體特異性鑒定，其中抗 D患者 14（32.56%）例、抗 E患者 26（60.47%）例、抗 e患者 1（2.33%）例、抗 C 患者 2（4.65%）例，凝聚胺法以及微柱凝膠法均檢出的不完全抗體特異性均與鑒定結(jié)果相符合，見表2。

表2 不完全抗體特異性鑒定情況[n(%)]

3 討論

臨床關(guān)于輸血安全的保障日益受到了臨床工作者的重視，隨著臨床試劑以及檢測技術(shù)的不斷改進(jìn)，目前由于血型鑒定靈敏度所導(dǎo)致的嚴(yán)重輸血反應(yīng)已經(jīng)鮮見報道。但是人類紅細(xì)胞當(dāng)中共有29個血型系統(tǒng)，其中不完全抗體指的是血清當(dāng)中抗A、抗B之外的其他的血型抗體，由于不完全抗體所引起的遲發(fā)型輸血反應(yīng)較輕的患者可引起發(fā)熱、寒戰(zhàn)，影響臨床治療效果，而對于嚴(yán)重輸血反應(yīng)患者可危及患者的生命安全[6，7]。輸血前進(jìn)行常規(guī)不完全抗體篩查，一旦出現(xiàn)不完全抗體陽性，則應(yīng)選擇相應(yīng)抗原陰性、交叉配血相合的紅細(xì)胞進(jìn)行輸注，從而保障輸血安全[8]。尤其對于需要手術(shù)備血的患者，應(yīng)至少提前1天進(jìn)行抗體篩查，對于不完全抗體篩選陽性的患者，保證充足的時間進(jìn)行抗體特異性鑒定，從而安全地選擇相配合的血液制品，避免由于術(shù)中患者急需輸血而沒有適合的血源，從而保證手術(shù)的安全順利進(jìn)行[9]。

不完全抗體主要是由于妊娠、輸血等免疫刺激所產(chǎn)生的，大部分的不完全抗體均屬于免疫球蛋白G（IgG）類，而此類抗體在鹽水介質(zhì)中不會出現(xiàn)凝集，必須經(jīng)過一定的方法（如凝聚胺法、微柱凝膠法）才能使得致敏紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集反應(yīng)[10，11]。本研究對比分析凝聚胺法以及微柱凝膠法檢測不完全抗體的臨床價值。凝聚胺法是一種陽離子集團(tuán)，由4個胺聚合而成的高陽離子聚合體，這種陽離子集團(tuán)能夠中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，從而縮短紅細(xì)胞之間的正常距離，可引起紅細(xì)胞可逆性的非特異性聚集以及IgG類抗體直接凝集紅細(xì)胞；而向上述系統(tǒng)溶液中加入枸櫞酸重懸后，非特異性聚集由于電荷中和而消失，但是由于IgG類抗體所引起紅細(xì)胞凝集則不會消失，從而檢測不完全抗體的存在[12，13]。微柱凝膠法是紅細(xì)胞抗原在凝膠介質(zhì)中與相應(yīng)的抗體相結(jié)合，經(jīng)過低速離心后，未結(jié)合的紅細(xì)胞可沉于凝膠底部為陰性反應(yīng)，而與抗體相結(jié)合的紅細(xì)胞則位于凝膠上不為陽性反應(yīng)[14，15]。本結(jié)果顯示，凝聚胺法檢出不完全抗體26例，檢出陽性率0.32%，微柱凝膠法檢測不完全抗體43例，檢出陽性率0.53%，這與相關(guān)臨床報道的不完全抗體檢出陽性率0.48%基本接近[16]。同時，有學(xué)者提出凝聚胺法其檢測靈敏度低，存在一定漏診，且檢測操作不易標(biāo)準(zhǔn)化，而微柱凝膠法反應(yīng)靈敏度較高，可提高弱抗體IgG的檢出率，其凝集結(jié)果可肉眼直接觀察，易于自動化和標(biāo)準(zhǔn)化操作，從而可減少人為因素對檢測結(jié)果的干擾[17，18]。本研究進(jìn)一步證實(shí)了此觀點(diǎn)，采用微柱凝膠法可有效減少不完全抗體的漏檢，從而保證手術(shù)患者的輸血安全。凝聚胺法其漏診原因可能與人為操作因素影響有關(guān)，如離心機(jī)控制、加入試劑以及振蕩觀察等均可能帶來一定的人為誤差，且凝聚胺法對Kell血型系統(tǒng)檢查效果較差，因此容易引起漏診。本研究對不完全抗體檢出患者進(jìn)行了抗體特異性檢測，結(jié)果顯示，不完全抗體主要是Rh系統(tǒng)，且抗E抗體的頻率更高，其主要的原因是由于近些年來，RhD定性試驗(yàn)已經(jīng)成為了實(shí)驗(yàn)室的一項(xiàng)常規(guī)監(jiān)測項(xiàng)目，從而有效預(yù)防和減少了抗D抗體的產(chǎn)生[19]。而對于RhE抗原陰性者，由于妊娠或輸血接受RhE抗原刺激之后容易產(chǎn)生出E抗體，因此近年來陸續(xù)出現(xiàn)RhE抗體引起溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生報道[20]。

綜上所述，微柱凝膠法檢測不完全抗體靈敏度高于凝聚胺法，且操作簡便、結(jié)果穩(wěn)定，從而能夠有效保障輸血的安全，值得臨床推廣。