范改煥,禹香菊,趙憲文
(鄭州市第九人民醫(yī)院,河南 鄭州 450053)
支氣管哮喘(bronchial asthma)又簡稱為哮喘,是臨床呼吸科常見的由多種細(xì)胞或細(xì)胞成分同時參與的呼吸道慢性炎癥疾病,當(dāng)患者接觸到刺激性因素時,可呈現(xiàn)出氣促、喘息、劇烈咳嗽、胸悶等氣道阻塞的癥狀[1,2]。隨著環(huán)境污染加重與全球氣候變化,臨床上支氣管哮喘病例明顯增多,而支氣管哮喘最常見于學(xué)齡期兒童,而研究顯示IgE分泌增多是導(dǎo)致哮喘的誘因之一[3],現(xiàn)筆者探究支氣管哮喘患兒血清IgE和痰液基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、TNF-α表達(dá)關(guān)系,旨在探討通過檢測患兒痰液MMP-9、TNF-α表達(dá)情況動態(tài)監(jiān)測患兒病情變化情況的臨床應(yīng)用可能。現(xiàn)報告如下:
1.1 一般資料 選取2016年1月-2017年8月我院收治確診為支氣管哮喘患兒60例,所有患兒均符合中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組.支氣管哮喘防治指南(2016年版)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4],并根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會呼吸學(xué)組兒童支氣管哮喘診斷與防治指南[5]按照不同發(fā)病程度分為哮喘發(fā)作組與哮喘靜息組各30例,入選標(biāo)準(zhǔn):⑴2~8歲;⑵無免疫性疾??;⑶無心肝腎腦等器官嚴(yán)重疾??;⑷患兒家屬均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):⑴除支氣管哮喘外,合并患有其他肺部疾病或肺部感染疾??;⑵入組前1周內(nèi)服用其他影響檢測質(zhì)變的藥物;⑶無法配合本實驗采樣的患兒。其中哮喘發(fā)作組患兒男 15 例,女 15 例,平均年齡(5.40±1.26)歲;哮喘靜息組患兒男16例,女14例,平均年齡(5.23±1.47)歲。本實驗經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。
1.2 方法
1.2.1 血液采集與IgE檢測方法 所有患兒均于入院時采取5ml晨起空腹靜脈血,3000r/min高速離心后取上清液,采用ImmunoCAP100 PhadiaAB Sweden分析儀分析患兒血清IgE水平并記錄。
1.2.2 患兒痰液MMP-9、TNF-α表達(dá)情況檢測方法 哮喘發(fā)作組患兒于入院后喘息發(fā)作24h內(nèi)進(jìn)行誘導(dǎo)痰,哮喘靜息組患兒則在臨床癥狀消失且未見哮鳴音消失后48h進(jìn)行誘導(dǎo)痰操作,所得痰液中挑取肉眼可見粘液的痰栓,收集至無菌器皿中,加入2倍痰量的1%二硫蘇糖醇(DTT)渦旋震蕩混勻后進(jìn)行水浴孵育,孵育結(jié)束后采用2000r/min離心,取上清液,采用ELISA法檢測其中的MMP-9、TNF-α 表達(dá)情況,其中 MMP-9、TNF-α 相關(guān)ELISA試劑盒均購自深圳晶美生物工程有限公司。
1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析,其中計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示并采用兩獨立樣本均數(shù)t檢驗進(jìn)行組間比較,采用Spearman相關(guān)分析法分析支氣管哮喘患兒痰液MMP-9、TNF-α表達(dá)水平與血清IgE水平的關(guān)系,以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
2.1 兩組患者血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α表達(dá)情況比較 哮喘發(fā)作組患兒血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α表達(dá)水平明顯高于哮喘靜息組患兒的(P<0.05),結(jié)果見表 1。
表1 兩組患者血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α 表達(dá)情況比較()
表1 兩組患者血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α 表達(dá)情況比較()
組別 例數(shù) 血清IgE水平(KU/L)MMP-9(ng/ml)TNF-α(ng/ml)哮喘發(fā)作組哮喘靜息組T值P值30 30 231.10±88.61 103.44±32.18 7.417 0.000 372.14±78.09 135.55±61.32 13.051 0.000 38.92±8.41 21.06±6.17 9.379 0.000
2.2 分析支氣管哮喘患兒血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α表達(dá)水平的關(guān)系 采用Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示,支氣管哮喘患兒痰液MMP-9、TNF-α表達(dá)水平與血清IgE水平呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.457,r=0.671,P<0.05)。
研究發(fā)現(xiàn)支氣管哮喘發(fā)病時主要的病理改變特征包括氣道炎癥和氣道重構(gòu),是一種多種細(xì)胞因子參與的慢性氣道炎癥性疾病,研究發(fā)現(xiàn)支氣管哮喘患兒多有特應(yīng)癥背景史,機(jī)體在接觸過各種自然過敏原后,機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生過敏原特異性IgE[6,7],當(dāng)機(jī)體再次接觸到過敏原時,哮喘患者氣道黏膜上的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生敏原特異性IgE并與DC細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合激活患者氣道黏膜上的嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等釋放炎癥活性介質(zhì),進(jìn)一步引發(fā)支氣管血管充血、支氣管痙攣、組織炎癥等一系列反應(yīng),導(dǎo)致哮喘急性發(fā)作[8,9]。歐陽長法等[10]通過比較支氣管哮喘患者與健康受試者之間總lgE及免疫分子表達(dá)的區(qū)別,發(fā)現(xiàn)支氣管哮喘患者系統(tǒng)變應(yīng)原過篩總陽性率94.7%,其中吸入變應(yīng)原陽性率70.8%,食物變應(yīng)原陽性率29.2%,吸入變應(yīng)原的致敏性較食物變應(yīng)原強(qiáng),且總lgE與血清IL-13水平呈正相關(guān)關(guān)系,總lgE與血清IL-2、IFN-γ水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。本實驗研究中,哮喘發(fā)作組患兒血清中IgE水平明顯高于哮喘靜息組患兒的,與上述觀點一致。
但通過檢測血清中IgE水平對患兒病情及發(fā)作程度進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測是不實際的,多次進(jìn)行抽血檢驗不僅對患兒身體傷害,也讓家屬產(chǎn)生抵觸心理,現(xiàn)筆者通過探究患兒痰液中MMP-9、TNF-α與患兒血清中IgE水平的關(guān)系,以期探尋一種更為有效簡便動態(tài)監(jiān)測患兒病情的途徑,本實驗結(jié)果顯示,哮喘發(fā)作組患兒痰液MMP-9、TNF-α表達(dá)水平明顯高于哮喘靜息組患兒的,且采用Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示,支氣管哮喘患兒痰液MMP-9、TNF-α表達(dá)水平與血清IgE水平呈正相關(guān)關(guān)系,說明通過監(jiān)測患兒痰液MMP-9、TNF-α表達(dá)水平亦可有效提示患兒病情程度,其中MMP-9是屬于基質(zhì)金屬蛋白酶家屬中的Ⅳ型膠原酶,主要有血管內(nèi)皮細(xì)胞或中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞合成分泌[11],在細(xì)胞外基質(zhì)的降解重建過程中起作用,哮喘患者發(fā)病過程中,炎癥反應(yīng)被激發(fā)后促進(jìn)了MMP-9的合成與分泌,導(dǎo)致氣道上細(xì)胞外基質(zhì)被過度降解,導(dǎo)致氣道重塑[12,13]。Barbaro MP 等[14]通過測量60名哮喘患者和20名健康對照者的呼氣中MMP-9,pH和NO水平以及痰中炎性細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)哮喘受試者呼出的MMP-9增加,且嚴(yán)重哮喘患者呼出氣MMP-9濃度明顯高于輕度至中度哮喘患者,提示了測量哮喘患者呼出氣中MMP-9識別哮喘的嚴(yán)重階段的可行性,但由于本院器材有限,故選取患兒痰液中MMP-9水平作為觀察指標(biāo)之一。TNF-α是一種多細(xì)胞合成分泌并具有廣泛生物活性的前炎癥因子之一[15],哮喘發(fā)生時可促進(jìn)炎性介質(zhì)的釋放,并加重哮喘病情,Hardyman MA等[16]研究發(fā)現(xiàn)TNF-α降低跨上皮電阻并增加熒光葡聚糖通透性,導(dǎo)致緊密連接處occludin和claudin的丟失,并增加內(nèi)源性IL-6,IL-1β,IL-8和促MMP-9釋放,導(dǎo)致支氣管上皮細(xì)胞屏障功能障礙。故筆者將這兩者作為觀察指標(biāo),研究表明支氣管哮喘患兒急性發(fā)作期血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α表達(dá)水平明顯升高,故檢測患兒痰液中MMP-9、TNF-α水平可作為一種更為有效簡便動態(tài)監(jiān)測患兒病情的途徑。