楊彥玲，操玉平

（1.施慧達藥業(yè)集團（吉林）有限公司，上海 200433；2.吉林省康慧生物科技有限責(zé)任公司，白山 134300）

上世紀(jì)90 年代中期，我國開始規(guī)?；惖匾M國外優(yōu)良品種的種羊，從而促進了我國當(dāng)?shù)仄贩N的改良，提升了羊肉品質(zhì)。在優(yōu)良種畜的繁殖過程中，超數(shù)排卵技術(shù)能夠充分挖掘母畜的繁殖潛力，促進優(yōu)良種群的快速擴繁。促卵泡激素（FSH）是常用的超數(shù)排卵產(chǎn)品，是由腦垂體前葉嗜喊性細胞合成并分泌的高度糖基化蛋白，能夠刺激雌性動物多個卵泡發(fā)育，促進排卵［1］。目前國內(nèi)使用的獸用超數(shù)排卵產(chǎn)品FSH 均來源于垂體提取，由于受到提取來源和工藝的影響，產(chǎn)品的批次間均一性不好，即使同一批次產(chǎn)品，活性也往往存在差異［2-4］。而超數(shù)排卵較穩(wěn)定的加拿大進口產(chǎn)品Folltropin-v（付托平）價格昂貴，在科研和生產(chǎn)實踐中使用成本較高［5］。為解決目前獸用FSH 的質(zhì)量和價格問題，作者等通過基因工程技術(shù)在中國倉鼠卵巢細胞（CHO）中表達了rFSH，為確定rFSH 最佳給藥劑量及不同批次的穩(wěn)定性，本試驗在前期預(yù)實驗的基礎(chǔ)上對波爾山羊進行了不同劑量和不同批次的超數(shù)排卵研究，并與付托平進行了比較，以期為科學(xué)研究和大規(guī)模生產(chǎn)提供適宜的超數(shù)排卵方法。

1 材料與方法

1.1 供體動物選擇

經(jīng)檢查并選取處于繁殖期的健康波爾山羊母羊58只，年齡3～5 歲。

1.2 超數(shù)排卵藥品

rFSH，吉林省康慧生物科技有限責(zé)任公司；付托平（加拿大貝爾尼奇）；羊孕激素陰道栓劑（CIDR，Zoetis）等。

1.3 試驗分組設(shè)計

第1 批試驗選取28 只波爾山羊，將其隨機分成4組（均使用同一批次rFSH），即對照組（付托平）、低劑量組（每只200 IU）、中劑量組（每只400 IU）及高劑量組（每只600 IU）。

第2 批試驗選取30 只波爾山羊，隨機分成5 組（其中rFSH 為3 個不同批次），即A 批次組（每只400 IU）、B 批次組（每只400 IU）、C 批次組（每只400 IU）、付托平組和寧波三生FSH 組。

1.4 超數(shù)排卵處理和胚胎采集

1.4.1 處理程序 波爾山羊注射氯前列烯醇0.1 mg（第0 天），注射后即進行發(fā)情觀察，無論是否發(fā)情均于第8天陰道放置羊孕激素陰道栓劑（CIDR）預(yù)處理，第17 天上午開始采用FSH+PG 法進行超數(shù)排卵處理。

FSH+PG 法超數(shù)排卵程序：用FSH 包裝盒內(nèi)所附稀釋劑或用生理鹽水溶解FSH，每天上午7：00—8：00和19：00—20：00 各注射1 次，連續(xù)3 d 共注射6 次，首次劑量為總劑量的25%～30%，以后每次注射劑量遞減。在第6 次注射rFSH 的同時，注射氯前列烯醇0.1 mg，并撤除羊孕激素陰道栓劑。使用公羊進行試情，確認發(fā)情母羊，進入配種程序。

1.4.2 胚胎采集和鑒定 發(fā)情配種當(dāng)天計為第0 天，在第3 天可進行輸卵管采胚。將收集沖卵液的集卵杯放置在實體顯微鏡下靜置2～3 min，檢出胚胎，記錄胚胎數(shù)量。胚胎用沖卵液反復(fù)沖洗處理后，置于高倍顯微鏡下進行形態(tài)學(xué)鑒定。

1.5 生物統(tǒng)計

各組檢測數(shù)據(jù)使用JMP 9.0 軟件對各組卵泡數(shù)量、胚胎數(shù)量進行統(tǒng)計分析，并且進行方差分析處理，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同劑量rFSH 對波爾山羊超數(shù)排卵的影響

由表1 可知，3 個不同劑量rFSH 超數(shù)排卵后沖胚獲得的平均胚胎數(shù)均在13 枚以上，大于或相當(dāng)于對照組。各組間獲得胚胎數(shù)無顯著差異（P>0.05）。rFSH 各劑量組的卵巢表面的平均卵泡數(shù)在4 個以下，卵巢表面的卵泡數(shù)量同樣低于對照組，各組間也無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。低劑量組（200 IU）山羊超數(shù)排卵后獲得胚胎的數(shù)量小于中劑量組（400 IU）和高劑量組（600 IU），中劑量組山羊的平均胚胎數(shù)16.8 枚，4 組中最高，說明超排效果最好。因此，為節(jié)約成本，驗證不同批次rFSH對波爾山羊超數(shù)排卵的影響，選用中劑量（400 IU）的rFSH 進行第2 批試驗。

表1 不同劑量rFSH 對波爾山羊超數(shù)排卵的影響

2.2 不同批次rFSH 對波爾山羊超數(shù)排卵的影響

由表2 可知，3 個批次rFSH 超數(shù)排卵處理后，獲得的平均胚胎數(shù)均在15 枚以上，且不同批次獲得的胚胎數(shù)量間均無顯著差異（P>0.05），卵巢表面卵泡數(shù)量與對照組付托平及寧波三生FSH 相比也無顯著差異（P>0.05）。

表2 不同批次rFSH 對波爾山羊超數(shù)排卵的影響

3 討論

3.1 不同劑量rFSH 對波爾山羊超數(shù)排卵的影響

前期預(yù)試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，rFSH 能夠有效促進波爾山羊的卵泡發(fā)育，可用于波爾山羊的超數(shù)排卵。并且600 IU給藥劑量的超數(shù)排卵效果與付托平組的效果相同，且卵巢沒有過度刺激現(xiàn)象。袁玉國等［6］研究了不同F(xiàn)SH劑量對山羊超數(shù)排卵效果的影響，結(jié)果顯示，240 IU 劑量和300IU 劑量超數(shù)排卵效果差異顯著（P<0.05）。為避免用藥過量和節(jié)約成本，本試驗探索了比預(yù)實驗更低劑量的rFSH 對于波爾山羊的超數(shù)排卵效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同劑量的rFSH 均有一定的超排效果，且獲得的平均胚胎數(shù)無顯著差異（P>0.05），但200 IU 劑量的rFSH 超數(shù)排卵后獲得胚胎的數(shù)量小于400 IU 劑量組和600 IU劑量組，400 IU 劑量的rFSH 超數(shù)排卵后獲得的胚胎數(shù)略高于600 IU 劑量組，這也與文獻［6］的研究結(jié)果相似，表明給予外源FSH 能夠促進山羊卵巢超數(shù)排卵，外源FSH 達到一定劑量才有最佳超排效果，且超數(shù)排卵效果并不隨著外源FSH 劑量的增加而增加。對照組加拿大付托平超排效果和文獻中通常報道的波爾山羊超排獲得的胚胎數(shù)一致［7-8］，3 個劑量組超數(shù)排卵獲得的胚胎數(shù)大于或等于對照組，表明3 個劑量組均可以獲得與對照組相同數(shù)量的胚胎數(shù)。而3 個劑量組的卵泡數(shù)均小于對照組，表明本次試驗藥物劑量未引起卵巢的過度刺激。

3.2 不同批次rFSH 對波爾山羊超數(shù)排卵的影響

有報道表明［9-10］，不同批號的國產(chǎn)FSH 的超排效果存在很大差異。為驗證不同批次rFSH 超數(shù)排卵的穩(wěn)定性，本試驗對波爾山羊進行了相同劑量不同批次的rFSH超數(shù)排卵處理試驗，結(jié)果表明，不同批次的rFSH 具有相同的超數(shù)排卵效果，說明不同批次的rFSH 超排效果穩(wěn)定。對照組（付托平）和寧波三生FSH 與文獻中通常報道的波爾山羊超排獲得的胚胎數(shù)一致［11-12］，rFSH 組與對照組相比超排效果也無顯著差異（P＞0.05）。波爾山羊經(jīng)3 個不同批次的rFSH 超數(shù)排卵后，卵巢表面卵泡數(shù)量與付托平組相比也無顯著差異（P＞0.05），說明未引起波爾山羊的卵巢過度刺激。

4 結(jié)論

200～600 IU 劑量的rFSH 對波爾山羊的超數(shù)排卵效果等同于加拿大進口產(chǎn)品付托平。不同批次注射用rFSH 對波爾山羊的超數(shù)排卵效果一致，因此可以確定不同批次注射用rFSH 是穩(wěn)定的。另外，在整個試驗過程中，波爾山羊超數(shù)排卵后卵巢表面的卵泡數(shù)較少，且與對照組相當(dāng)，說明注射rFSH 不會引起山羊卵巢的過度刺激，安全性較好。但是由于本試驗超數(shù)排卵的供體羊數(shù)量有限，還需要進一步擴大試驗驗證。