張崇英，劉 偉，宋金秋

（1.重慶三峽職業(yè)學院，重慶 404155；2.重慶市云陽縣高陽鎮(zhèn)農(nóng)技服務中心，重慶 404507；3.湘西民族職業(yè)技術(shù)學院，湖南 416000）

在當前環(huán)保發(fā)展形勢下，我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)逐漸由傳統(tǒng)粗放養(yǎng)殖轉(zhuǎn)向集約化、環(huán)境友好化養(yǎng)殖方式轉(zhuǎn)變。但由于高密度的養(yǎng)殖產(chǎn)生大量殘餌糞便，引起養(yǎng)殖水質(zhì)惡化，從而導致水生動物疾病。傳統(tǒng)養(yǎng)殖往往采用消毒劑或抗生素來控制疾病爆發(fā)（楊移斌等，2014）。大量使用抗生素和消毒劑等增強動物耐藥性，并影響動物體內(nèi)菌落平衡，同時魚體藥殘會大大降低經(jīng)濟價值或達不到質(zhì)量標準（王玉堂，2012）。

益生菌（probiotic）泛指能在動物體腸道內(nèi)生存，對動物機體健康有益的微生物統(tǒng)稱。Fuller（1989）將益生菌定義為通過調(diào)節(jié)動物腸道菌落平衡而對生物體有益且可制作動物飼料添加劑的一種活性微生物。同樣Gatesoup（1999）將益生菌概括為一類具有活性的微生物飼料添加劑，能寄宿于畜禽腸道內(nèi)，且能有效增強動物機體免疫能力。而Verschuere 等（2000）在前人基礎(chǔ)上得出益生菌通過調(diào)節(jié)養(yǎng)殖動物體內(nèi)或其環(huán)境的微生物組成，進而提高餌料利用率，提高養(yǎng)殖動物的抗病能力。WHO 和FAO（2001 年）把益生菌定義為充足條件下對宿主有益的微生物。目前，在魚飼料中添加益生菌的研究報道較為常見，而將益生菌作為營養(yǎng)劑添加到蝦料中的應用研究較少。本試驗在大棚養(yǎng)殖環(huán)境下，分別在南美白對蝦（Penaeus vannamei）飼料中添加嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌及其混合菌作為試驗組，探討益生菌對大棚養(yǎng)殖白對蝦的生長效果及血液免疫指標的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗環(huán)境 試驗選址在云陽縣某水產(chǎn)養(yǎng)場，選取4 口規(guī)格相似的水泥池塘（塘深1.5 m，坡比1 ∶1.5，面積約450 m2/ 口）進行試驗。塘底設(shè)中央排污設(shè)施，同時設(shè)底部爆氣管和水面水車式增氧機。

1.2 試驗動物 蝦苗由某苗種公司提供的同一批蝦苗，規(guī)格在1 cm 左右。進苗暫養(yǎng)1 周后，于4 月14 日按每口池塘7 萬尾的密度投喂養(yǎng)殖91 d。

1.3 試驗飼料 基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)成分見表1，在基礎(chǔ)日糧中分別添加不同濃度（0.6%、1.2%、1.8%）的嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌混合物（質(zhì)量比1 ∶1），分別設(shè)置成試驗組A、試驗組B、試驗組C（有效活菌均為1010CFU/g）。每2 天換水一次，換水頻率以水渾濁程度適當調(diào)整。飼料投放量為蝦體重的10% ～12%，根據(jù)攝食量和外環(huán)境適當調(diào)節(jié)。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分 %

1.4 指標測定 從5 月5 日（養(yǎng)殖20 d）后開始，每隔10 d 分別從各池塘中隨機抽100 尾南美白對蝦，測量其體長和體重，取平均值。每隔20 d，每個池塘隨機取南美白對蝦40 尾，參照吳志新等（1997）的方法。用5 號針頭的1 mL 無菌注射器從蝦圍心腔內(nèi)抽血樣，將40 尾魚蝦的血液充分混合后在室溫下靜置凝固，然后置4℃冰箱保藏4 h后，4000 r/min 離心10 min，收集上層血清，4℃冰保存?zhèn)溆?。本試驗采用磷酸苯二鈉法測定酸性磷酸酶（ACP）和堿性磷酸酶（AKP）活性（王冬冬，2008），采用愈創(chuàng)木酚法測定過氧化物酶（POD）活性（李忠光等，2008）。

2 結(jié)果與分析

2.1 大棚養(yǎng)殖效果 由表2 可知，本次研究中，大棚養(yǎng)殖南美白對蝦的平均產(chǎn)量達476.9 kg，平均成活率70.16%。試驗組池塘的餌料系數(shù)隨益生菌添加量的增加逐漸下降，降低幅度達到6.3% ；試驗組C 產(chǎn)量和成活率均顯著高于其他各組（P ＜0.05），因此，本試驗表明，添加益生菌試驗餌料利用率更好，且有利用效果更好的趨勢。2.2 生長指標 結(jié)合養(yǎng)殖過程觀察和圖1、圖2可知，5 月15 日前各組白對蝦生長無明顯差異，分析可能是雖然大棚養(yǎng)殖，但整體環(huán)境水溫較低，影響生長攝食；5 月15 ～25 日，隨季節(jié)環(huán)境升溫，白對蝦生長速度加快明顯，且各組間開始出現(xiàn)一定差異，而此時試驗組與對照組白對蝦的生長指標基本一致，體長保持在6.2 cm 左右，平均體重3.85 g ；5 月25 日后，試驗組南美白對蝦生長速度較對照組出現(xiàn)明顯提升。

表2 養(yǎng)殖效果對比

圖1 南美白對蝦平均體長動態(tài)變化

圖2 南美白對蝦平均體重動態(tài)變化

2.3 血清免疫指標

2.3.1 益生菌對南美白對蝦AKP 活性的影響 由圖3 可 以 看 出，從5 月5 日（養(yǎng)殖第20天）起，試驗組AKP 活性就已顯著高于對照組（P ＜0.05），且隨著益生菌含量增加，AKP 活性升高幅度明顯，3 個試驗組AKP 活性均顯著大于對照組（P ＜0.05），且對照組AKP 活性在整個試驗周期內(nèi)增長緩慢，而添加益生菌的試驗組活性升高明顯。整個試驗期間試驗組C 和試驗組B 均與試驗組A 有顯著差異（P ＜0.05），且添加益生菌試驗組一直顯著高于對照組（P ＜0.05）。

圖3 益生菌對南美白對蝦對蝦AKP 影響

2.3.2 益生菌對南美白對蝦ACP 活性的影響 圖4 可見，監(jiān)測初始（5 月5 日），添加益生菌的試驗組ACP 活性顯著大于對照組（P ＜0.05），試驗組B 活性最大，顯著大于除試驗組C 外的其他各組（P ＜0.05）。6 月15 日試驗組B 的ACP 活性活性達到最大。

圖4 益生菌對南美白對蝦對蝦ACP 影響

2.3.3 益生菌對南美白對蝦POD 活性的影響 圖5 所示，投喂初期益生菌試驗組對南美白對蝦POD 活性影響不明顯，各組未出現(xiàn)顯著差異（P ＞0.05）。隨著試驗的進行，試驗組POD 活性升高趨勢明顯，到5 月25 日（第41 天）試驗B 組和C 組的POD 活性顯著大于對照組（P ＜0.05），6 月15 日（第62 天）所有益生菌試驗組的POD活性均顯著高于對照組（P ＜0.05）。

3 討論與小結(jié)

圖5 益生菌對南美白對蝦對蝦POD 影響

在水產(chǎn)品及蝦類實際養(yǎng)殖生產(chǎn)中，成活率和生長速度是判斷養(yǎng)殖效益的重要指標。本試驗顯示，益生菌試驗組的南美白對蝦成活率均高于對照組，且試驗期間成活率的變化隨益生菌添加量的增加有增大趨勢。生長指標方面，益生菌試驗組相較于對照組南美白對蝦體長體重增加更快，餌料系數(shù)更低，實際生產(chǎn)中試驗組能提前上市，從而達到降低相關(guān)管理和飼料等成本，增加收益效果。同時本試驗在基礎(chǔ)日糧中添加益生菌后，其表現(xiàn)出的腥香味更加濃郁，這對動物飼料，尤其是水產(chǎn)飼料的誘食作用至關(guān)重要。

益生菌作為目前抗生素的主要替代品之一，其主要作用主要表現(xiàn)在防治動物消化道疾病、促進消化吸收和提高動物體免疫能力等方面（周國勤等，2006），近年來得到快速的推廣應用和發(fā)展（盧國民等，2014）。高進（2010）在大黃魚基日糧中添加不同梯度的益生菌后發(fā)現(xiàn)，益生菌能顯著提高大黃魚稚魚的存活能力和抗脅迫能力。類似結(jié)果也在對大菱鲆（高鳳祥等，2011）、草魚（沈文英等，2012）、青魚（沈斌乾等，2013）、吉富羅非魚（劉小玲等，2013）等水產(chǎn)品的飼料營養(yǎng)劑研究中得出。本試驗中，各試驗組南美白對蝦的成活率和生長性能均優(yōu)于對照組，與以往得出結(jié)論一致。

另外的研究也報道，養(yǎng)殖青魚的體增重和飼料系數(shù)未受到飼料中不同濃度的枯草芽孢桿菌的顯著影響（沈斌乾等，2013），養(yǎng)殖的吉富羅非魚增重和飼料系數(shù)也未在不同濃度的嗜酸乳酸菌下產(chǎn)生顯著變化（劉小玲等，2013），而枯草芽孢桿菌顯著提高凡納濱對蝦的生長性能（WGR、SGR），但未影響飼料系數(shù)（Zokaeifar 等，2012）。上述研究結(jié)果的差異可能是養(yǎng)殖環(huán)境、使用益生菌種類和添加量或試驗對象規(guī)格的不同引起（程遠等，2014）。過往研究得出益生菌促生長的機理主要在于進入動物消化道的益生菌易吸收，且富含優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)，其次益生菌能在水產(chǎn)動物消化道定植一段時間，從而能有效的對抗有害菌，保證腸內(nèi)菌群的平衡，有益于動物對飼料營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收（郭升偉，2010）。除此之外，腸道內(nèi)的益生菌在魚體腸道內(nèi)會分泌酶類，其中就有能將日糧中某些大分子營養(yǎng)物質(zhì)酶解成小分子，幫助魚類消化吸收。

酸性磷酸酶（ACP）、過氧化物酶（POD）和堿性磷酸酶（AKP）等非特異性免疫因子的水平在一定程度上反映甲殼動物機體免疫能力大?。ㄉ蛭挠?，2012）。過氧化氫酶（POD）是一種抗氧化酶，是對蝦重要的防御和識別系統(tǒng)（孫國銘，2002），其通過清除機體內(nèi)的超氧自由基來避免機體內(nèi)生物分子損傷。堿性磷酸酶（AKP）是一種膜結(jié)合酶，參與機體內(nèi)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運和代謝、轉(zhuǎn)化魚類骨骼發(fā)育所需的鈣（Blasco，1993）。酸性磷酸酶（ACP）也能催化磷酸單脂的水解，在動物體內(nèi)直接參與磷酸基團的運轉(zhuǎn)（劉樹青等，1999）。

試驗周期內(nèi)，試驗組的酸性磷酸酶（ACP）、過氧化物酶（POD）和堿性磷酸酶（AKP）均顯著高于對照組。說明本試驗中益生菌在南美白對蝦大棚養(yǎng)殖中的應用在一定程度上能改善白對蝦體內(nèi)微生物的平衡，起到提高南美白對蝦成活率和生長的作用；同時，益生菌通過自身成分來刺激非特異性免疫系統(tǒng)，提高養(yǎng)殖南美白對蝦抗應激和免疫能力，進一步提高南美白對蝦的養(yǎng)殖效益。