杜金娥，董志岷，王 貴

（河套學(xué)院，內(nèi)蒙古巴彥淖爾 015000）

玉米和豆粕是畜禽日糧中常用的谷物類(lèi)原料。谷物類(lèi)飼料原料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)估主要取決于其抗?fàn)I養(yǎng)因子的種類(lèi)和含量，如非淀粉多糖（Kocher 等，2003）。有研究報(bào)道，玉米中的非淀粉多糖含量為9%，而豆粕中非淀粉多糖的含量達(dá)29%（Mahagna 等，1995）。此外，植物性原料中所含有的磷通常是以植酸磷的形式存在，單胃動(dòng)物自身不能利用植酸磷。植酸酶、木聚糖酶、淀粉酶和纖維素酶是畜禽日糧中常用的幾種酶，它們可以對(duì)非淀粉多糖和植酸起到酶解作用，提高養(yǎng)分消化利用率和動(dòng)物的生長(zhǎng)性能。蛋白酶和淀粉酶可以提高蛋白和淀粉的消化利用率。有研究報(bào)道，日糧添加酶制劑可以提高蛋雞生產(chǎn)性能，提高雞蛋重量，改善料蛋比（Scheideler 等，2005 ；Mathlouthi 等，2003），但這些相關(guān)研究并未考慮選用的酶酶活力問(wèn)題。同時(shí)，多種酶結(jié)合使用比單一使用更能發(fā)揮酶的作用。Kannan 等（2008）、Liebert 等（2005）評(píng)估了外源性酶對(duì)蛋雞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用的影響。日糧組成會(huì)影響胰腺相關(guān)酶的分泌，外源添加酶制劑可以調(diào)控胰腺相關(guān)酶的分泌（Pinheiro 等，2004）。但目前關(guān)于外源性和內(nèi)源性酶的交互作用研究還不深，Ritz 等（1995）發(fā)現(xiàn)，外源添加淀粉酶和內(nèi)源性淀粉酶對(duì)公雞胰腺淀粉酶的分泌無(wú)顯著交互效應(yīng)，而Jiang 等（2008）的研究結(jié)果顯示，外源性添加淀粉酶降低了胰腺淀粉酶活力及基因mRNA 表達(dá)水平。由于肉雞和蛋雞有很大差異，不能將在肉雞上的研究結(jié)果應(yīng)用到蛋雞實(shí)際生產(chǎn)中。本試驗(yàn)在玉米- 豆粕型日糧中添加復(fù)合酶制劑（植酸酶、淀粉酶、木聚糖酶和纖維酶），研究其對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能、養(yǎng)分消化率、腸道內(nèi)容物消化酶活力及相關(guān)基因表達(dá)的影響，旨在為酶制劑的應(yīng)用提供更多的理論數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)選擇健康、產(chǎn)蛋性能一致的56 周齡海蘭褐殼蛋雞360 只，隨機(jī)分為兩組，每組5 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)36 只。對(duì)照組飼喂玉米- 豆粕型基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中添加0.1% 復(fù)合酶制劑（5000 IU/g 植酸酶、2000 IU 木聚糖酶、500 IU 淀粉酶和2000 IU 纖維素酶，購(gòu)自北京昕大洋生物有限公司），基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)進(jìn)行10 周。植酸酶活力為1 μmol 植酸酶單位時(shí)間在5.5 pH，37℃釋放1 μmol 無(wú)機(jī)磷，其他酶活力的評(píng)估與植酸酶類(lèi)似。蛋雞采用單雞單籠飼養(yǎng)，每個(gè)籠子裝一個(gè)飲水器，試驗(yàn)期間溫度控制在25℃左右，相對(duì)濕度為65% ～70%，每天光照16 h。試驗(yàn)期間每天收集蛋雞的產(chǎn)蛋個(gè)數(shù)，稱(chēng)量蛋重，每周統(tǒng)計(jì)1 次飼料用量，試驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算試驗(yàn)期間蛋雞的平均日采食量、產(chǎn)蛋率、蛋重和料蛋比。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（以風(fēng)干物質(zhì)計(jì)）

1.2 養(yǎng)分消化率 在試驗(yàn)結(jié)束前72 h，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇3 只蛋雞進(jìn)行代謝試驗(yàn)，連續(xù)收集蛋雞3 d 的糞便，加入5 mL 鹽酸進(jìn)行固氮，-20℃保存。在分析糞中養(yǎng)分前，將糞樣在65℃烘箱中烘48 h。所有養(yǎng)分的表觀(guān)消化系數(shù)參考Adeola 等（2008）的方法。

1.3 消化酶活力和基因表達(dá) 在試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇6 只蛋雞進(jìn)行屠宰，分離十二指腸、空腸和胰腺，用無(wú)菌EP 管收集十二指腸和空腸內(nèi)容物，-80℃保存。在冰上用0.1% 的生理鹽水對(duì)十二指腸和空腸內(nèi)容物進(jìn)行稀釋?zhuān)?℃12000 r/min 離心15 min。參考Jiang 等（2008）的研究結(jié)果設(shè)計(jì)胰蛋白酶和淀粉酶基因引物，采用熒光定量PCR 法分析基因的相對(duì)表達(dá)量，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和熔解曲線(xiàn)，采用2-ΔΔCt法，以β-actin基因作為內(nèi)參計(jì)算各基因的相對(duì)表達(dá)量，將對(duì)照組基因相對(duì)表達(dá)量歸一化。十二指腸、空腸內(nèi)容物及胰腺淀粉酶、胰蛋白酶、蛋白酶和脂肪酶的活力采用ELISA 法進(jìn)行測(cè)定，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程有限公司。

1.4 結(jié)果分析 所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)在EXCEL 里做平均值處理，結(jié)果代入SPSS 分析軟件，采用單因素方差分析，用T 檢驗(yàn)分析對(duì)照組和試驗(yàn)組的差異，P ＜0.05 表示對(duì)照組和試驗(yàn)組差異顯著，0.05 ＜P＜0.1 表示對(duì)照組和試驗(yàn)組具有差異顯著的趨勢(shì)，P ＞0.05 表示對(duì)照組和試驗(yàn)組差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 酶制劑對(duì)蛋雞生長(zhǎng)性能的影響 酶制劑對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率、蛋重、采食量和料蛋比的結(jié)果見(jiàn)表2。對(duì)照組與酶制劑組對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率、蛋重、平均蛋重、平均日采食量和料蛋比的影響均無(wú)顯著差異（P ＞0.05）。酶制劑組較對(duì)照組對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率和平均蛋重有提高，而蛋重和平均日采食量降低，但均無(wú)顯著差異（P ＞0.05）。

表2 酶制劑對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 酶制劑對(duì)蛋雞養(yǎng)分表觀(guān)消化的影響 酶制劑對(duì)蛋雞干物質(zhì)、粗脂肪、代謝能、鈣、磷和粗脂肪的表觀(guān)消化系數(shù)的影響見(jiàn)表3。酶制劑組較對(duì)照組提高了蛋雞干物質(zhì)、代謝能、鈣的表觀(guān)消化系數(shù)，但均無(wú)顯著差異（P ＞0.05）。與對(duì)照組相比，酶制劑組顯著提高了粗脂肪的表觀(guān)消化系數(shù)（P＜0.05）。

表3 酶制劑對(duì)蛋雞養(yǎng)分表觀(guān)消化消化系數(shù)的影響

2.3 酶制劑對(duì)蛋雞養(yǎng)分表觀(guān)消化的影響 酶制劑對(duì)蛋雞十二指腸和空腸內(nèi)容物及胰腺消化酶活力的影響見(jiàn)表4。由結(jié)果可知，對(duì)照組與酶制劑組對(duì)十二指腸內(nèi)容物淀粉酶、胰蛋白酶和蛋白酶活力的影響均無(wú)顯著差異（P ＞0.05），但酶制劑組較對(duì)照組有提高十二指腸內(nèi)容物脂肪酶活力的趨勢(shì)（P=0.09）。日糧添加酶制劑對(duì)空腸內(nèi)容物淀粉酶、胰蛋白酶和脂肪酶活力無(wú)顯著影響（P ＞0.05），但顯著提高了空腸內(nèi)容物蛋白酶的活力（P＜0.05）。對(duì)照組與酶制劑組對(duì)胰腺淀粉酶、胰蛋白酶、蛋白酶和脂肪酶活力的影響均無(wú)顯著差異（P ＞0.05）。

表4 酶制劑對(duì)蛋雞腸道內(nèi)容物和胰腺消化酶活力的影響 U/g

2.4 酶制劑對(duì)蛋雞胰腺淀粉酶和胰蛋白基因mRNA 相對(duì)表達(dá)的影響 由表5 可知，酶制劑組較對(duì)照組有降低胰腺胰蛋白酶基因mRNA 相對(duì)表達(dá)量的趨勢(shì)（P=0.08），但兩組對(duì)淀粉酶mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響無(wú)顯著差異（P ＞0.05）。基因的相對(duì)表達(dá)量，將對(duì)照組基因相對(duì)表達(dá)量歸一化。

表5 酶制劑對(duì)蛋雞胰腺淀粉酶和胰蛋白酶基因mRNA 相對(duì)表達(dá)的影響

3 討論

3.1 日糧添加復(fù)合酶制劑對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和養(yǎng)分消化率的影響 本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，外源添加復(fù)合酶制劑對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率、蛋重、平均蛋重、平均日采食量和料蛋比的影響均無(wú)顯著差異，這與Hahn（2010）的研究結(jié)果一致，其發(fā)現(xiàn)日糧添加植酸酶、纖維素酶、淀粉酶和酸性蛋白酶對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響。Cowieson 和Adeola（2005）研究發(fā)現(xiàn)，在適宜代謝能和鈣磷水平日糧中添加植酸酶、木聚糖酶、淀粉酶和蛋白酶復(fù)合物可以顯著提高肉雞的生長(zhǎng)性能。結(jié)果差異可能與肉雞和蛋雞體型、日齡消化道發(fā)育和消化能力都存在差異有關(guān)。日糧磷水平足夠時(shí)（34 ～39 周齡2 g/kg或50 ～64 周齡1.5 g/kg），植酸酶的效果不明顯（Scheideler 等，2005）。因此，本試驗(yàn)中有效磷含量達(dá)0.45%，這也是復(fù)合酶對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響的原因。日糧添加酶制劑較對(duì)蛋雞干物質(zhì)、代謝能、鈣的表觀(guān)消化系數(shù)均無(wú)顯著影響，但與對(duì)照組相比，酶制劑組顯著提高粗脂肪的表觀(guān)消化系數(shù)，這與Um 和Paik（1999）的研究結(jié)果一致，其發(fā)現(xiàn)日糧添加植酸酶可以提高蛋雞脂肪的沉積，因?yàn)橹菜崦缚梢蕴岣吲c植酸相結(jié)合的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的生物利用率（Bedlford，2000）。

3.2 日糧添加復(fù)合酶制劑對(duì)蛋雞十二指腸、空腸內(nèi)容物和胰腺消化酶活力及相關(guān)基因表達(dá)的影響 玉米- 豆粕型日糧添加酶制劑對(duì)十二指腸內(nèi)容物淀粉酶、胰蛋白酶和蛋白酶活力的影響均無(wú)顯著影響，但顯著提高空腸內(nèi)容物蛋白酶的活力。十二指腸和空腸內(nèi)容物中酶的活力可以反映家禽腸道的消化能力，因?yàn)榇蟛糠值矸勖浮⒁鹊鞍酌负椭久阜置谑窃谑改c或空腸中（Osman，1982）。本試驗(yàn)中，酶制劑提高了空腸蛋白酶的活力，與外源添加的酶制劑與機(jī)體內(nèi)源酶發(fā)生疊加效應(yīng)有關(guān)（Ritz 等，1995），而十二指腸內(nèi)容物脂肪酶的提高與復(fù)合酶中植酸酶對(duì)日糧中植酸的降解有關(guān)（Liu 等，2010）。這些變化提示，外源添加復(fù)合酶制劑可能通過(guò)不同機(jī)制影響腸道的不同區(qū)域，進(jìn)而影響消化酶活性。然而，消化酶的活力在腸道中存在可變性，特別是在空腸中。胰腺分泌的消化酶對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化具有重要作用。胰腺中消化酶的活力可以反映組織中內(nèi)源性酶的水平和儲(chǔ)存量。Mahagna 等（1995）發(fā)現(xiàn)，在高梁型日糧中添加蛋白酶和淀粉酶降低了肉雞胰腺糜蛋白酶活力。Jiang 等（2008）研究也發(fā)現(xiàn)，外源添加淀粉酶會(huì)降低胰腺淀粉酶的活力。但本試驗(yàn)結(jié)果與上述研究存在差異，具體原因有待進(jìn)一步研究。酶制劑組較對(duì)照組有降低胰腺胰蛋白酶基因mRNA 相對(duì)表達(dá)量的趨勢(shì)，這與Jiang 等（2008）報(bào)道的結(jié)果類(lèi)似。

4 結(jié)論

玉米- 豆粕型日糧添加植酸酶、淀粉酶、纖維酶和木聚糖酶復(fù)合物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響，但復(fù)合酶制劑可以提高粗脂肪的表觀(guān)消化率及空腸和十二指腸內(nèi)容物蛋白酶和脂肪酶的活力。