薛 紅 邵建國 卞兆連&

南通大學(xué)附屬第三人民醫(yī)院肝病科1(226006) 南通大學(xué)附屬第三人民醫(yī)院消化內(nèi)科 南通市肝病研究所2

背景：乙型肝炎病毒(HBV)感染是全球主要健康問題之一，其發(fā)病機制尚未完全明確，研究顯示細胞因子介導(dǎo)的免疫應(yīng)答在其中起關(guān)鍵作用。目的：檢測慢性HBV感染患者的血清白細胞介素-34(IL-34)水平，探討IL-34與疾病進程的相關(guān)性。方法：2015年8月—2016年8月在南通大學(xué)附屬第三人民醫(yī)院住院治療的90例慢性HBV感染患者[慢性乙型肝炎(CHB) 60例，乙型肝炎相關(guān)肝硬化30例]納入研究，30名同期健康體檢者作為對照組。采用ELISA法檢測血清IL-34水平，同時行血清生化和病毒學(xué)指標檢測，分析IL-34與生化、病毒學(xué)指標的相關(guān)性。結(jié)果：與對照組相比，CHB組和肝硬化組血清IL-34水平明顯升高(P<0.05)，肝硬化組較CHB組升高更為顯著(P<0.05)。Spearman相關(guān)系數(shù)分析顯示，CHB組血清IL-34水平與ALT、AST水平呈顯著正相關(guān)(rs=0.288,P=0.026; rs=0.385,P=0.002)，與HBV DNA水平呈顯著負相關(guān)(rs=-0.325,P=0.011)。結(jié)論：慢性HBV感染患者血清IL-34水平顯著升高并與疾病進程相關(guān)。IL-34可能成為治療慢性HBV感染的免疫學(xué)靶點。

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染目前仍然是全球主要健康問題之一，全球約有20億人曾感染HBV，其中2.4億人為慢性感染者[1]，給個人和社會帶來極大的經(jīng)濟負擔(dān)，每年約有65萬人死于HBV感染相關(guān)肝衰竭、肝硬化和肝細胞癌。HBV感染的發(fā)病機制迄今尚未完全明確，大量研究顯示細胞因子介導(dǎo)的免疫應(yīng)答在疾病進展和臨床轉(zhuǎn)歸中起關(guān)鍵作用[2]。白細胞介素(interleukins,ILs)作為一類重要的細胞因子，在慢性HBV感染中的作用受到越來越多的關(guān)注。

IL-34于2008年首次被發(fā)現(xiàn)，其為集落刺激因子-1受體(colony stimulating factor-1 receptor,CSF-1R)的另一個配體，即與巨噬細胞集落刺激因子(macrophage-colony stimulating factor,M-CSF)擁有共同受體。IL-34與M-CSF具有相似的生物學(xué)功能，能誘導(dǎo)細胞因子或趨化因子分泌，調(diào)節(jié)機體免疫功能，參與機體免疫炎癥反應(yīng)，在各種炎癥性和自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用[3-6]。既往研究發(fā)現(xiàn)，IL-34在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中表達明顯升高，并與疾病嚴重程度呈正相關(guān)[7]；在丙型肝炎病毒(HCV)感染相關(guān)肝纖維化中，血清 IL-34水平與纖維化程度呈正相關(guān)[8]；非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者亦存在血清IL-34水平升高[9]。

2017年國內(nèi)Cheng等[10]的研究首次發(fā)現(xiàn)慢性HBV感染患者血清IL-34水平和外周血單個核細胞中的IL-34 mRNA表達較健康人顯著降低，且血清IL-34水平與病毒載量和肝功能指標呈顯著負相關(guān)。本研究通過檢測慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)和乙型肝炎相關(guān)肝硬化患者的外周血IL-34水平并分析其與患者臨床參數(shù)的相關(guān)性，旨在進一步明確IL-34在慢性HBV感染患者中的表達情況及其與疾病進程的相關(guān)性。

對象與方法

一、研究對象

連續(xù)納入2015年8月—2016年8月首次因CHB或乙型肝炎相關(guān)肝硬化在南通大學(xué)附屬第三人民醫(yī)院住院治療的患者。診斷符合中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會于2015年修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[1]，并排除合并其他病毒性肝炎、人類免疫缺陷病毒感染以及自身免疫性疾病。正常對照組來自同期健康體檢人群。研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核批準，標本采集取得受檢者知情同意。

二、方法

采集入選CHB和肝硬化患者的病史資料。所有受檢者晨起抽取靜脈血5 mL，離心取血清，標本置于-20 ℃保存。采用ELISA法檢測血清IL-34水平，試劑盒為R&D Systems產(chǎn)品，操作按試劑盒說明書進行。江蘇鴻恩全自動生化分析儀檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBil)水平；邁瑞全自動血液細胞分析儀檢測血小板計數(shù)(PLT)；電化學(xué)發(fā)光法檢測甲胎蛋白(AFP)水平；Real-time PCR檢測HBV DNA水平。

三、統(tǒng)計學(xué)分析

結(jié) 果

一、一般資料

研究共納入120例受檢者，其中CHB組60例，肝硬化組30例，對照組30例。三組間性別構(gòu)成、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與對照組相比，CHB組、肝硬化組血清ALT、AST、TBil水平明顯升高，ALB水平降低，三組間總體差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1 CHB組、肝硬化組和對照組臨床參數(shù)比較

二、血清IL-34水平

ELISA法檢測顯示，CHB組、肝硬化組血清IL-34水平分別為(10.32±6.74) pg/mL和(16.73±11.64) pg/mL，兩組均明顯高于對照組的(8.41±2.84) pg/mL，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)，以肝硬化組升高更為明顯，與CHB組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)(圖1)。

圖1 CHB組、肝硬化組和對照組血清IL-34水平比較

三、CHB組血清IL-34水平與血生化、病毒學(xué)指標的相關(guān)性

Spearman相關(guān)系數(shù)分析顯示，血清IL-34水平與肝功能指標ALT、AST水平呈顯著正相關(guān)(rs=0.288,P=0.026;rs=0.385,P=0.002)(圖2A、2B)。進一步分析IL-34水平與代表病毒復(fù)制的HBV DNA水平[log10(HBV DNA)]的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)兩者間呈顯著負相關(guān)(rs=-0.325,P=0.011)(圖2C)。CHB組IL-34與ALB、TBil、AFP之間均無明顯相關(guān)性。

討 論

慢性HBV感染可導(dǎo)致包括肝炎、肝硬化、肝細胞癌等在內(nèi)的一系列肝臟疾病[11]，嚴重影響患者健康，甚至危及生命。已知HBV感染后肝臟炎癥的發(fā)生并不是由病毒直接導(dǎo)致，而是由宿主免疫反應(yīng)所引發(fā)[2]。越來越多的證據(jù)表明細胞因子介導(dǎo)的免疫應(yīng)答在HBV感染中起重要作用。

IL-34是近年發(fā)現(xiàn)的與M-CSF擁有共同受體、參與單核巨噬細胞分化、存活的細胞因子。研究[8]顯示在慢性HCV感染過程中，肝細胞產(chǎn)生的IL-34可介導(dǎo)單核細胞聚集并轉(zhuǎn)化為具有促纖維化特性的巨噬細胞，進而激活肝星狀細胞，誘導(dǎo)膠原合成，導(dǎo)致肝纖維化進展。而在非病毒性肝病的NAFLD患者中，血清IL-34水平亦隨纖維化進展逐漸升高，是肝纖維化的獨立影響因素[9]。本研究結(jié)果顯示，慢性HBV感染患者血清IL-34水平較健康對照者明顯升高，以肝硬化組升高更為顯著，結(jié)合既往研究發(fā)現(xiàn)，提示IL-34可能參與了肝纖維化的進展，與慢性HBV感染的疾病進程相關(guān)。

圖2 CHB組血清IL-34水平與ALT、AST、HBV DNA水平相關(guān)性分析

研究表明IL-34可通過與其受體CSF-1R結(jié)合，激活細胞合成、釋放炎癥因子，參與炎癥反應(yīng)，使炎癥持續(xù)或加重。Eda等[6]發(fā)現(xiàn)經(jīng)IL-34刺激的全血細胞可分泌促炎細胞因子IL-6以及趨化因子干擾素誘導(dǎo)蛋白-10(IP-10)/CXCL10、IL-8/CXCL8、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)/CCL2。另有研究發(fā)現(xiàn)IL-34 在某些條件下可誘導(dǎo)單核細胞分化為具有免疫抑制和免疫調(diào)節(jié)特性的M2型巨噬細胞[3-4]，后者可通過分泌細胞膜IL-1α(mIL-1α)，介導(dǎo)記憶T細胞向Th17細胞轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致組織局部持續(xù)性低度炎癥[3]。此外，IL-34還可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細胞(Treg細胞)分化、成熟，參與機體免疫耐受[12]。本研究中CHB患者血清IL-34水平與反映肝臟炎癥損傷的ALT、AST水平呈顯著正相關(guān)。推測在HBV感染過程中，IL-34可能通過誘導(dǎo)單核巨噬細胞增殖、分化，參與肝內(nèi)炎癥反應(yīng)。本研究還發(fā)現(xiàn)，CHB患者血清IL-34水平與HBV DNA水平呈顯著負相關(guān)，這與Cheng等[10]的研究結(jié)果相一致。Cheng等[10]通過體外和體內(nèi)實驗證實，在HBV感染過程中，IL-34對病毒復(fù)制具有抑制作用。本研究中CHB患者血清IL-34水平與病毒復(fù)制呈負相關(guān)，與肝內(nèi)炎癥呈正相關(guān)，提示在HBV感染過程中，IL-34表達異常及其引起的免疫功能紊亂參與了CHB的發(fā)生和進展。Cheng等[10]的研究發(fā)現(xiàn)慢性HBV感染患者血清IL-34 水平較健康人顯著降低，與本研究結(jié)果存在差異，可能與不同研究中研究對象病程、病情嚴重程度的差異有關(guān)，亦提示IL-34在肝臟慢性炎癥中可能發(fā)揮不同生物學(xué)作用。本研究中CHB患者血清IL-34水平與ALB、TBil、AFP之間均無明顯相關(guān)性，提示IL-34與肝臟的合成功能和膽紅素代謝能力無關(guān)。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)慢性HBV感染患者血清IL-34水平較健康人顯著升高，且與疾病進程相關(guān)。IL-34可能通過打破機體免疫平衡參與了CHB的發(fā)生和進展，可能成為治療慢性HBV感染的免疫學(xué)靶點。