孫 宏，吳逸飛，沈 琦，盧志超,2，姚曉紅，王 新，湯江武*

（1.浙江省農(nóng)業(yè)科學院植物保護與微生物研究所，浙江杭州 310021；2. 華中農(nóng)業(yè)大學農(nóng)業(yè)微生物國家重點實驗室，湖北武漢 430030）

在畜牧養(yǎng)殖業(yè)的規(guī)?；l(fā)展過程中，飼用抗生素在緩解仔豬早期斷奶應激、提高動物機體免疫力和促進生長性能方面發(fā)揮了重要作用，但近年來，抗生素大量使用所帶來的殘留及相關(guān)抗生素耐藥性問題日益突出，嚴重危害人類健康。因此，在畜禽養(yǎng)殖過程中尋找有效的飼用抗生素替代品成為當前研究熱點。

國內(nèi)外研究表明，微生態(tài)制劑可作為潛在的抗生素替代品，在緩解仔豬斷奶應激方面發(fā)揮積極作用。如植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）可調(diào)節(jié)仔豬腸道微生態(tài)平衡，提高動物生長性能和免疫功能[1-2]；解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）可產(chǎn)生包括抗菌肽、大環(huán)內(nèi)酯在內(nèi)的多種抑菌物質(zhì)，對病原菌有較好的抑制效果[3]；干酪乳桿菌（L. casei）可顯著提高斷奶仔豬的生長性能，促進其生長[4]。目前單一來源微生態(tài)菌劑的添加效果研究較多，但有關(guān)復合微生態(tài)菌劑在斷奶仔豬中的應用評價研究仍較為有限且結(jié)果差異較大[5-7]，特別是有關(guān)解淀粉芽孢桿菌和植物乳桿菌復合菌劑對仔豬影響仍未見報道。因此，繼續(xù)開展不同組合菌劑在仔豬上的應用效果研究仍具有重要意義。本試驗旨在評價不同乳酸菌復合菌劑（植物乳桿菌、干酪乳桿菌）、乳酸菌和芽孢桿菌復合菌劑（植物乳桿菌、解淀粉芽孢桿菌）對斷奶仔豬生長性能、血清生化指標及糞便微生物的影響，以期為上述復合菌劑在仔豬上的應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗所用菌劑由浙江省農(nóng)業(yè)科學院植物保護與微生物研究所提供，其中植物乳桿菌的活菌數(shù)≥ 3.0×109CFU/g、解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)≥1.0×109CFU/g、干酪乳酸菌的活菌數(shù)≥ 5.0×109CFU/g，以麩皮為載體制成。

1.2 試驗設計 采用單因素完全隨機設計，選擇體重、胎次接近的42日齡健康杜×長×大仔豬160頭（28日齡斷奶），平均體重為（15.04±1.40）kg，隨機分為4組，每組4個重復，每個重復10頭豬（公、母各半），單獨一欄。4個處理組包括對照（CON）組（飼喂不含抗生素的基礎日糧）、抗生素添加（PC）組（基礎日糧+50 mg/kg桿菌肽鋅）、植物乳桿菌與解淀粉芽孢桿菌復合菌劑（LB）組（基礎日糧+1 g/kg植物乳桿菌+1 g/kg解淀粉芽孢桿菌）、植物乳桿菌與干酪乳桿菌復合菌劑（LL）組（基礎日糧+1 g/kg植物乳桿菌+1 g/kg干酪乳桿菌）。試驗于2015年9—10月在浙江省嘉興市綠嘉園生態(tài)牧場進行，試驗期35 d。

1.3 試驗日糧及飼養(yǎng)管理 試驗基礎日糧為參照NRC（1998）配制玉米-豆粕型日糧，其基礎組成及營養(yǎng)成分見表1。

表1 試驗基礎日糧組成及營養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎）

試驗仔豬飼養(yǎng)在封閉式、全漏縫地板豬舍內(nèi)，通風良好，舍溫保持在20～25 。試驗采用自動料槽，粉料飼喂，仔豬自由采食，乳頭式飲水器自由飲水。整個飼養(yǎng)過程按照豬場常規(guī)程序進行免疫接種和管理。以欄為單位，每天記錄豬只采食量，觀察記錄試驗豬精神狀態(tài)、腹瀉等健康情況。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 生長性能 試驗第1天和第35天早晨空腹測量各仔豬體重，計算每頭仔豬的平均日增重（ADG）；準確記錄每個重復中仔豬的投料量和余料量，計算每頭仔豬的平均日采食量（ADFI）；ADFI與ADG之比為耗料增重比（F/G）。

1.4.2 血清指標 試驗第35 天，每個重復隨機選取1頭體重接近平均值（該重復）的仔豬，用無菌注射器于前腔靜脈采血10 mL置于促凝管中，3 000 r/min 離心20 min，分離血清，采用液氮速凍后，置于-20 保存，用于測定血清中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（UN）、肌酸酐（Cr）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）等含量和二胺氧化酶（DAO）活性。測試用試劑盒購自南京建成生物技術(shù)有限公司。

1.4.3 糞便微生物數(shù)量測定 于第35天上午稱重前，每欄選取1頭仔豬，采用無菌一次性塑料勺取直腸糞便樣品約5 g，用無菌取樣袋封存后4 冷藏，并及時回實驗室進行檢測。乳酸菌和大腸桿菌數(shù)量測定均采用稀釋平板法，計數(shù)培養(yǎng)基分別為MRS培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基[8]。微生物數(shù)量采用lg（CFU/g）表示。

1.5 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用平均值±標準差表示，并用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析（One-Way ANOVA）。多重比較采用Duncan's法，以P＜0.05為差異顯著性判斷標準。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼喂復合微生態(tài)菌劑對斷奶仔豬生長性能的影響 由表2可知，各組間斷奶仔豬的初始體重無差異（P＞0.05）；試驗后各組間的ADG、ADFI和F/G均無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 飼喂復合微生態(tài)菌劑對斷奶仔豬血清生化指標的影響 由表3可知，飼喂35 d后，LB組與LL組斷奶仔豬血清中DAO含量低于CON組和PC組（P＜0.05）；而IgA、IgM、IgG、ALB、UN、Cr和TP含量在4組間無顯著差異（P＞0.05）。

表2 飼喂復合微生態(tài)菌劑對斷奶仔豬的生長性能影響

表3 飼喂復合微生態(tài)菌劑對斷奶仔豬血清生化指標的影響

2.3 飼喂復合微生態(tài)菌劑對斷奶仔豬糞便微生物的影響由表4可知，LB組與LL組斷奶仔豬糞便中大腸桿菌的數(shù)量低于CON組（P＜0.05），而4組斷奶仔豬糞便中乳酸菌數(shù)量無顯著差異（P＞0.05）。

表4 飼喂復合微生態(tài)菌劑對斷奶仔豬糞便微生物含量的影響 lg（CFU/g）

3 討 論

3.1 飼喂復合微生態(tài)菌劑對斷奶仔豬生長性能的影響本試驗結(jié)果顯示，斷奶仔豬日糧中添加乳酸菌復合微生態(tài)菌劑及乳酸菌、芽孢桿菌的復合微生態(tài)菌劑對仔豬ADG、ADFI和F/G均無顯著影響，這與董曉麗等[8]采用添加地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和植物乳桿菌組成的復合微生態(tài)菌劑日糧飼喂37日齡斷奶仔豬的結(jié)果一致，表明日糧中添加復合微生態(tài)菌劑可替代抗生素。但張建梅等[9]研究發(fā)現(xiàn)，添加0.2%枯草芽孢桿菌和乳酸菌復合微生態(tài)菌劑可顯著降低斷奶仔豬的F/G。張麗等[10]采用酵母培養(yǎng)物與枯草芽孢桿菌組成的復合微生態(tài)菌劑飼喂保育豬，發(fā)現(xiàn)仔豬的ADG和F/G均顯著優(yōu)于未添加的對照組；而單獨添加芽孢桿菌則對仔豬ADG、ADFI和F/G均無影響。陳振等[11]研究發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌、丁酸梭菌和酵母菌組成的復合微生態(tài)菌劑可顯著提高斷奶仔豬的ADG并降低F/G。本試驗中仔豬生長性能未出現(xiàn)顯著差異，原因可能與菌種不同及添加量配比差異有關(guān)。研究表明，益生菌的適宜添加量是其發(fā)揮效果的一個重要因素，且不同種類菌劑在斷奶仔豬日糧中的最適添加量可能不同[12]。Hu等[13]研究發(fā)現(xiàn)，仔豬飼糧中添加芽孢桿菌的較優(yōu)終濃度為4×109CFU/kg。Liu等[14]研究發(fā)現(xiàn)，當日糧中乳酸桿菌終濃度達2.2×109CFU/kg時，斷奶仔豬ADFI和F/G顯著優(yōu)于對照組。本試驗結(jié)果提示，復合微生態(tài)菌劑的不同菌種組合方式和菌劑添加量可能對其在斷奶仔豬中益生作用的發(fā)揮有影響。此外，動物個體健康狀況也與其生長性能相關(guān)，當仔豬處于應激等狀態(tài)時可能更有利于益生菌劑發(fā)揮作用[5]。

3.2 飼喂復合微生態(tài)菌劑對斷奶仔豬血清生化指標的影響 血清生化指標可指示動物機體的能量代謝和營養(yǎng)消耗過程，從而間接反映機體健康狀況。血清中TP、ALB、UN和Cr等是指示動物蛋白和氨基酸營養(yǎng)相關(guān)代謝的主要指標[15]。本試驗結(jié)果表明，斷奶仔豬日糧中添加復合微生態(tài)菌劑對上述指標無顯著影響，這與柴建民等[6]在斷奶仔豬日糧中添加植物乳桿菌和非淀粉多糖復合酶的研究結(jié)果相一致。血清IgA、IgG和IgE是機體重要的體液免疫組成部分，在非特異性免疫防護機制中發(fā)揮了重要的免疫調(diào)節(jié)作用[8]。本研究中各組免疫球蛋白含量無顯著差異，顯示各組斷奶仔豬的免疫功能狀態(tài)較為接近。柴建民等[6]同樣發(fā)現(xiàn)，35日齡斷奶仔豬日糧聯(lián)合添加植物乳桿菌和非淀粉多糖酶對仔豬血清IgG含量無顯著影響。但張建梅等[9]研究發(fā)現(xiàn)，仔豬日糧中添加由乳酸菌、芽孢桿菌和酵母鋅、酵母硒組成的0.2%復合微生態(tài)菌劑可顯著提高血清中IgA和IgM含量。上述結(jié)果差異可能與本研究所采用的42日齡斷奶仔豬腸道免疫應激不顯著有關(guān)，也可能是由于復合微生態(tài)菌劑的添加量未達到可顯著影響血清免疫指標的水平所致。DAO是仔豬小腸黏膜上皮細胞內(nèi)特異性酶，當腸道黏膜受損時，血清DAO含量上升，可間接反映腸道屏障作用的損傷程度[16]。本研究表明，斷奶仔豬在飼喂含有乳酸桿菌和芽孢桿菌或不同乳酸菌組成的復合菌劑后，可顯著降低血清中DAO含量，提示其有利于斷奶后腸道細胞的保護，降低腸道屏障的應激損傷。

3.3 飼喂復合微生態(tài)菌劑對斷奶仔豬糞便微生物的影響腸道菌群與動物健康密切相關(guān)，當腸道正常微生物生態(tài)系統(tǒng)因各種應激因素被打破后，往往導致條件致病菌（如大腸桿菌）數(shù)量上升，影響動物的生長性能，采用新鮮糞便菌群可間接反映腸道菌群狀態(tài)[17]。本研究結(jié)果表明，飼喂含有復合微生態(tài)菌劑（LL組和LB組）斷奶仔豬的糞便中大腸桿菌數(shù)量顯著降低，但對乳酸菌數(shù)量無顯著影響，表明仔豬飼喂復合微生態(tài)菌劑可起到抑制宿主大腸桿菌數(shù)量的作用。同樣，張建梅等[9]研究表明，飼喂含乳酸菌和芽孢桿菌組成的復合微生態(tài)制劑日糧顯著降低了斷奶仔豬糞便中大腸桿菌數(shù)量，但對乳酸菌無顯著影響。本試驗所用的復合微生物菌劑對動物腸道微生物的影響可能包括2個方面：一是乳酸菌可通過產(chǎn)乳酸來調(diào)控腸道pH，抑制腸道內(nèi)大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量；二是芽孢桿菌可通過在腸道內(nèi)生長來消耗氧氣間接創(chuàng)造無氧環(huán)境，以適合于乳酸菌的生長繁殖，促進腸道菌群平衡[18-19]。此外，解淀粉芽孢桿菌還被報道具有產(chǎn)抗菌蛋白的作用，可進一步抑制腸桿菌的生長[3]。但在本研究中，斷奶仔豬糞便中乳酸菌數(shù)量未見顯著提高，這與柴建民等[6]利用植物乳桿菌和非淀粉多糖復合酶飼喂斷奶仔豬的研究結(jié)果一致，表明益生菌在動物腸道內(nèi)發(fā)揮功能可能受到日糧組成差異的影響。

4 結(jié) 論

在本研究條件下，由不同乳酸菌組成的復合菌劑及乳酸菌與芽孢桿菌組成的復合菌劑對斷奶仔豬生長性能無顯著影響，但可顯著降低仔豬糞便大腸桿菌數(shù)量，同時降低血清DAO含量，在一定程度上維護了斷奶仔豬的腸道健康。