劉 琛 賴珊珊

高泌乳素血癥（hyperprolactinemia，HPRL）是指血清泌乳素（prolactin，PRL）＞25ng/mL，臨床上青年女性多發(fā)，發(fā)病率為為0.4%[1-2]。西醫(yī)常規(guī)服用溴隱亭，但其胃腸道不良反應(yīng)甚至患者不能耐受。中醫(yī)基于經(jīng)絡(luò)、臟象理論認(rèn)為，該病多與肝脾密切相關(guān)，筆者在張仲景的疏肝健脾名方當(dāng)歸芍藥散的基礎(chǔ)上，經(jīng)過(guò)多年實(shí)踐，不斷優(yōu)化其配伍組成，形成加味當(dāng)歸芍藥散這一自擬方，并實(shí)踐于臨床治療HPRL患者，證實(shí)該自擬方具有明顯的療效及安全性。本研究在此基礎(chǔ)上，嘗試從經(jīng)典的信號(hào)通路cAMP-PKA，探討該自擬方治療大鼠高泌乳素血癥（HPRL）的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng) 物 Specefic pathogen Free（SPF）級(jí)SD雌性健康發(fā)育成熟且未孕大鼠96只，體質(zhì)量（214.13±31.35）g，福建省中醫(yī)藥研究院代購(gòu)，合格證：2017001601331，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)使用許可證（SYXK[閩]2017-0016），動(dòng)物居住場(chǎng)所：福建中醫(yī)藥研究院動(dòng)物房，自由飲食、飲水，籠內(nèi)溫度維持在22～26℃，空氣濕度維持在30～70%，安靜舒適控制聲音低于85分貝，通風(fēng)換氣8～12次/h，光照時(shí)間符合晝夜規(guī)律（7am～7pm）等正常的居住條件。

1.2 藥 品 中藥：加味當(dāng)歸芍藥散（出自于張仲景《金匱要略》基礎(chǔ)上予以加減經(jīng)驗(yàn)方）：當(dāng)歸、芍藥各15g，川芎 9g，茯苓 12g，白術(shù) 15g，澤瀉 9g，浙貝母12g，柴胡 9g，香附 12g，丹參 15g，炒麥芽 50g，神曲9g。煎煮方法：（1）浸泡：生藥用涼水沒過(guò)藥物表面并浸泡30min；（2）第一遍煎藥：生藥連同浸泡水放入砂鍋內(nèi)，文火煎煮1h，倒出藥液藥渣留在砂鍋內(nèi)；（3）第二遍煎藥：放入同量的涼水，繼續(xù)文火煎熬1h并倒出藥液，倒掉藥渣；（4）濃縮藥液：兩次藥液混合，大火煎煮，將藥液熬煮為300%濃度藥液（每1mL藥液含生藥3.0g），冷卻后放置冰箱備用。甲磺酸溴隱亭片(批號(hào) JX20000372，購(gòu)于 NovarfismaS Farma SPA公司）研磨成粉末，加入生理鹽水充分?jǐn)嚢?，制備成濃度?5%混懸液；鹽酸甲氧氯普胺注射液（批號(hào)20044996，上海現(xiàn)代哈森藥業(yè)有限公司）。

1.3 設(shè) 備 顯微鏡（OLYMPUS U-TOV.5XC）、圖像分析系統(tǒng)（Image-pro plus6．0）、qPCR 儀（Applied Biosystems，SimpliAMP）、梯度 PCR 儀（ABI公司）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Bio-Rad），洗板機(jī)、多功能酶標(biāo)儀（Tecan）、低速冷凍離心機(jī)（Eppendorf）、紫外可見分光光度計(jì)（杭州歐米儀器有限公司）、槍頭500μL、EP 管 2mL、PCR02mL（AXYGEN）、洗板機(jī)（Thermo）。

1.4 試 劑 免疫組化：一抗試劑盒：多巴胺D1受體（dopamine D1 receptor，DRD1）抗體（Abcam，批號(hào)ab20066）；蛋白激酶 A（proteinkinase A，PKA）抗體（Abcam，批號(hào) ab211265）；多巴胺 D2受體（dopamine D2 receptor，DRD2）抗體（Ptgcn，批號(hào) 059103）；二抗、DAB顯色劑、PBS緩沖液由福建省中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院提供。酶聯(lián)反應(yīng)（Elisa）：環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosinemono phosphatec，cAMP） 試劑 盒（BIOVA-LUE，批號(hào)K371-100）；多巴胺（Dopamine receptor，DA）試劑（上海晶抗生物工程有限公司，批號(hào)JKEA00235）；PRL試劑盒（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，批號(hào) 40422a）。PCR：Trizol、cDNA 一鏈合成試劑盒（可同時(shí)去除DNA污染）、PCR Mix（PCR聚合酶）、YBR Green熒光定量試劑盒、DNA makerⅡ均購(gòu)自Vazyme；1mL槍頭（無(wú) RNA 酶）、200μL槍頭（無(wú)RNA酶）、10μL槍頭（無(wú)RNA酶）、1.5mLEp管（無(wú)RNA酶）均購(gòu)自Kirgen公司；Gelred（替代EB的核酸染料）購(gòu)自bio-ope公司；引物設(shè)計(jì)由invitrogen公司合成。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組與造模 依次將96只SD雌性大鼠稱重、編號(hào)之后，運(yùn)用隨機(jī)數(shù)字表將大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，分別為加味當(dāng)歸芍藥散高、中、低濃度組、空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組，每組16只，并進(jìn)行染色標(biāo)記，分籠，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)14天。除了空白組不予處理，其余五組進(jìn)行造模[2]：經(jīng)背部皮下注射鹽酸甲氧氯普胺注射液，每天2次，于上午10點(diǎn)，下午5點(diǎn)，1次給藥50mg/kg，連續(xù)5天。

2.2 給 藥 造模成功后，經(jīng)過(guò)體表面及藥物劑量換算，除了空白組不予處理，模型組按照0.833mg·kg-1·d-1生理鹽水灌胃。陽(yáng)性組予以按 0.833mg·kg-1·d-1給藥，相當(dāng)于臨床用藥的10倍。高濃度組按照60.0g·kg-1·d-1給藥相當(dāng)于臨床用藥的20倍、中濃度組按照30.0g·kg-1·d-1給藥相當(dāng)于臨床用藥的10倍、低濃度組灌胃15.0g·kg-1·d-1給藥相當(dāng)于臨床用藥的5倍。灌胃時(shí)間30d，末次灌胃后，立即處死取材。

2.3 組織標(biāo)本采集 （1）血液標(biāo)本：末次給藥后，立即麻醉，方式選擇腹腔注射，藥品采用10%水合氯醛，給藥劑量為0.3mL/100g，進(jìn)行全身麻醉后腹主動(dòng)脈采血，室溫下靜置2～3h后，高速離心機(jī)10min～15min（2500～3000r/rain），收集上層血清。（2）下丘腦標(biāo)本：采血后，老鼠立即處死斷頭，行“T”字形剪開皮膚后充分暴露頭部，用眼科剪由下（枕骨大孔處）向上（人字縫），后向兩邊剖離顱骨，充分暴露腦組織，取出下丘腦，每組8只大鼠下丘腦迅速放入EP管以備PCR檢測(cè)，另外8只大鼠下丘腦放入裝有10%福爾馬林溶液固定的標(biāo)本盒中。

2.4 指標(biāo)檢測(cè)

2.4.1 免疫組化 采用SP法：常規(guī)石蠟包埋，切片、貼片，需要檢查多巴胺D1受體（dopamine D1 receptor，DRD1）、D2 受 體 （dopamineD2receptor，DRD2）、蛋白激酶 A（proteinkinase A，PKA）三個(gè)指標(biāo)，每個(gè)指標(biāo)取3片，切片厚度5μm，烤片、脫蠟、脫水、孵育、PBS沖洗、滴加一抗、二抗、染色、蘇木素復(fù)染，脫水干燥后即可封片。設(shè)立陰性對(duì)照，其中D1、D2陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)膜呈棕黃色，PKA陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞核程棕黃色。運(yùn)用Image-pro plus6.0分析軟件，在顯微鏡下觀察每張切片，隨機(jī)選擇5個(gè)視野測(cè)定平均光密度。

2.4.2 PCR （1）組織總RNA提取：取約100mg動(dòng)物組織放于無(wú)RNA酶的1.5mL EP管內(nèi)，組織研磨、分離；RNA沉淀、漂洗；測(cè)得RNA的OD260/OD280值是為2.0；（2）RNA逆轉(zhuǎn)錄：用HiScriptⅡ Q RT SuperMix for qPCR（+gDNA wiper）進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)?；蚪M DNA 去除：4X gDNA wiper Mix 4μL，Oligo（dT）（50μm）1μL，Total RNA 1μg，RNase Free dH2O加至16μL。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件如下：反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)42℃30min，反轉(zhuǎn)錄酶失活反應(yīng) 85℃ 5min；（3）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)引物特異性：PCR管依次在管中加入（20μL反應(yīng)體系）：2×rTaq PCR SuperMix10u，上游引物（10μm）0.8μL，下游引物（10μm）0.8μL，cDNA 模板 1μL，Dd，H2O 加 20μL，引物設(shè)計(jì):D1受體上游引物5-GCGTCCATTCTGAACCTCTG-3；下游引物5-CGTCCTGCTCAACCTTGTG-3，長(zhǎng)度258bp；D2受體上游引物5-GGTCTACTCCTCCATTGTCTCA-3；下游引物5-CATCCATTCTCCGCCTGTTC-3，長(zhǎng)度245bp。擴(kuò)增條件：設(shè)定溫度94℃進(jìn)行預(yù)變性5 min、變形30s，后將溫度降至60℃退火 30s，上調(diào)溫度至72℃延伸20s，重復(fù)操作30個(gè)循環(huán)后再延伸7min。反應(yīng)完成后，將5μL擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)。（4）熒光定量PCR反應(yīng)：根據(jù)SYBR的熒光定量PCR步驟操作：AceQ qPCR SYBR Green Master Mix10μL，PCR Forward Primer（10uM）0.5μL，PCR Reverse Primer（10uM）0.5μL，Rox Reference DyeⅡ（50×）0.4μL，cDNA template1.0μL，ddH2O（滅菌蒸餾水）加至20μL。每個(gè)反應(yīng)重復(fù)3次，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照，配制反應(yīng)液時(shí)先配制總的反應(yīng)液，再各個(gè)分裝。選擇ABI7500PCR儀按以下程序進(jìn)行定時(shí)定量PCR 反應(yīng)。PCR 反應(yīng)程序設(shè)置為：（1）94℃ 30s；（2）94℃ 5s；（3）60℃ 34s（2～3 步 40 個(gè)循環(huán)）反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行結(jié)果分析：用軟件DataAssistTM v3.0 Software（ABI）用 2-△△Ct計(jì)算每個(gè)樣本 DRD1、DRD2、PKA的mRNA相對(duì)表達(dá)量。

2.4.3 Elisa 將大鼠腹主動(dòng)脈血液標(biāo)本室溫靜置2h后，充分高速離心 10min～15min（2500～3000r/rain），分層，移液槍收取上層血漿，根據(jù)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩兩之間的數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組大鼠下丘腦PKA表達(dá) PKA表達(dá)模型組最高，高濃度組最低；模型組PKA表達(dá)明顯高于空白組、陽(yáng)性組及各濃度組（P＜0.01）；各濃度組與空白組比較，中濃度PKA表達(dá)略低（P＜0.05）、高濃度PKA表達(dá)明顯偏低（P＜0.01）；與陽(yáng)性組比較，高濃度組PKA表達(dá)明顯偏低（P＜0.01），中、低濃度兩組PKA表達(dá)略低（P＜0.05），與高濃度組比較，低濃度組表達(dá)增高（P＜0.05）。見表 1。

3.2 各組大鼠下丘腦組織DRD1、DRD2表達(dá) DRD1數(shù)量，空白組最高，模型組最低?？瞻捉MDRD1表達(dá)明顯高于模型組及中、低濃度組（P＜0.01）且略高于高濃度組（P＜0.05）；模型組DRD1表達(dá)明顯低于陽(yáng)性、高濃度組（P＜0.01），且略低于中濃度組（P＜0.05）；陽(yáng)性組DRD1明顯高于低濃度組（P＜0.01），略高于中濃度組（P＜0.05）；各濃度組中，低濃度組DRD1表達(dá)明顯低于高濃度組（P＜0.01）。DRD2數(shù)量，陽(yáng)性組最高，模型組最低；空白組DRD2表達(dá)明顯高于模型組、低濃度組（P＜0.01）；各組 DRD2數(shù)量，除了低濃度組數(shù)量略高于模型組（P＜0.05），其余DRD2表達(dá)均明顯高于模型組（P＜0.01）；陽(yáng)性組DRD2表達(dá)明顯高于低濃度組（P＜0.01），略高于中濃度組（P＜0.05）；各濃度組中，低濃度組DRD2表達(dá)明顯低于高濃度組（P＜0.01）。見表 2。

表1 各組大鼠下丘腦組織PKA表達(dá)水平比較（

表1 各組大鼠下丘腦組織PKA表達(dá)水平比較（

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01；與陽(yáng)性組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與高濃度組比較，★P＜0.05；PKA：蛋白激酶A；空白組不予處理；模型組采用0.833mg·kg-1·d-1生理鹽水灌胃；陽(yáng)性組采用 0.833mg·kg-1·d-1給藥；高濃度組以 60.0g·kg-1·d-1給藥；中濃度組以30.0g·kg-1·d-1給藥；低濃度組以15.0g·kg-1·d-1給藥

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表2 各組大鼠下丘腦組織DRD1、DRD2表達(dá)水平比較（

表2 各組大鼠下丘腦組織DRD1、DRD2表達(dá)水平比較（

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與陽(yáng)性組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與高濃度組比較，★★P＜0.01；與中濃度組比較，☆☆P＜0.01；DRD1：多巴胺 D1 受體；DRD2：多巴胺 D2 受體；空白組不予處理；模型組采用0.833mg·kg-1·d-1生理鹽水灌胃；陽(yáng)性組采用 0.833mg·kg-1·d-1給藥；高濃度組以 60.0g·kg-1·d-1給藥；中濃度組以 30.0g·kg-1·d-1給藥；低濃度組以 15.0g·kg-1·d-1給藥

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3.3 Elisa檢測(cè)血清 cAMP、PRL、DA 血清 PRL水平，模型組最高，空白組最低；與模型組相比，陽(yáng)性組、高濃度組和中濃度組大鼠PRL水平降低（P＜0.05）且陽(yáng)性組和高濃度組的PRL水平接近空白組，兩組療效相當(dāng)，而低濃度組療效與模型組相當(dāng)。血清cAMP水平情況與之相似，模型組最高，空白組最低，與模型組相比，陽(yáng)性組、高濃度組和中濃度組大鼠cAMP水平顯著性降低（P＜0.01）而陽(yáng)性組和高濃度組cAMP水平接近空白組，且兩組療效相當(dāng)。血清的DA檢測(cè)中情況則與之相反，空白組水平最高，模型組水平最低；與模型組相比，陽(yáng)性組、高濃度組和中濃度組大鼠DA水平升高（P＜0.05），且陽(yáng)性組和高濃度組DA水平與空白組接近，兩組療效相當(dāng)。見表3。

表3 各組大鼠血清PRL、cAMP、DA水平比較（

表3 各組大鼠血清PRL、cAMP、DA水平比較（

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；PRL：泌乳素；cAMP：環(huán)磷酸腺苷；DA：多巴胺；空白組不予處理；模型組采用0.833mg·kg-1·d-1生理鹽水灌胃；陽(yáng)性組采用0.833mg·kg-1·d-1給藥；高濃度組以 60.0g·kg-1·d-1給藥；中濃度組以 30.0g·kg-1·d-1給藥；低濃度組以 15.0g·kg-1·d-1給藥

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3.4 各組大鼠下丘腦DRD1mRNA、DRD2mRNA表達(dá)情況 DRD1mRNA表達(dá)情況空白組最高，模型組最低，與空白組比，模型組表達(dá)減少（P＜0.05）；各濃度組 DRD1mRNA 表達(dá)均無(wú)差異 （P＞0.05）。DRD2 mRNA表達(dá)情況，空白組最高，低濃度組最低；與空白組比，模型組、中濃度組、低濃度組表達(dá)減少（P＜0.05）；與高濃度組相比，低濃度組表達(dá)明顯減少（P＜0.05），且陽(yáng)性組與高濃度組表達(dá)量相當(dāng)（P＞0.05）。見表4。

表4 各組大鼠PCR D1RmRNA、D2RmRNA表達(dá)水平比較（

表4 各組大鼠PCR D1RmRNA、D2RmRNA表達(dá)水平比較（

注：與空白組比，*P＜0.05，與模型組比，△P＜0.05；DRD1 mRNA：多巴胺D1受體mRNA；DRD2：多巴胺D2受體mRNA；空白組不予處理；模型組采用 0.833mg·kg-1·d-1生理鹽水灌胃；陽(yáng)性組采用 0.833mg·kg-1·d-1給藥；高濃度組以 60.0g·kg-1·d-1給藥；中濃度組以 30.0g·kg-1·d-1給藥；低濃度組以 15.0g·kg-1·d-1給藥

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4 討論

高泌乳素血癥根據(jù)患者臨床表現(xiàn)歸屬于中醫(yī)“乳衄”、“月經(jīng)病”、“不孕癥”等范疇[3]。在經(jīng)絡(luò)學(xué)說(shuō)中，陽(yáng)明經(jīng)主支直行在缺盆處向下行至乳內(nèi)；厥陰經(jīng)迂回環(huán)繞并上行，過(guò)乳頭與肺經(jīng)相連[4]。經(jīng)乳同源于脾胃沖任[5]，均為氣血所化生，氣血?jiǎng)t得于精微化生，精微布散則得于脾土；脾土升陽(yáng)舉清則得助于肝木暢達(dá)；同時(shí)經(jīng)血排出有時(shí)、乳汁溢出有度則賴于肝氣和，氣血調(diào)，沖任充。若情志不暢，肝郁氣結(jié)，疏泄無(wú)序，加之脾土受損，清陽(yáng)不升，精微不布，血?？仗摬挥?，故無(wú)血可下，出現(xiàn)閉經(jīng)；若久郁化火，怒火攜氣血上行，化生乳汁，出現(xiàn)溢乳；若肝木抑郁，氣滯血壅，木旺乘土，脾為生痰之源，痰瘀互結(jié)，沖任受阻，則月經(jīng)失調(diào)，出現(xiàn)不孕?？梢娯?zé)之肝脾，虛實(shí)夾雜。治療上當(dāng)以肝脾為核心，以疏肝理氣、健脾助運(yùn)為主，兼以益氣養(yǎng)血，痰瘀并除為治則。

在《金匱要略》中，張仲景認(rèn)為，凡屬于肝病及脾、肝脾不調(diào)、肝木乘脾者，均可用疏肝健脾方之祖當(dāng)歸芍藥散[6]。根據(jù)臨床多年的辨證加減經(jīng)驗(yàn)，筆者在當(dāng)歸芍藥散的基礎(chǔ)上形成了自擬方治療肝郁脾虛之高泌乳素血癥。全方中白芍味酸能斂陰，入肝脾經(jīng)，為治肝之要藥，能平肝，柔肝，養(yǎng)肝；當(dāng)歸辛行補(bǔ)血兼能活血，為婦科調(diào)經(jīng)之要藥；川芎入血分，性辛香而擅行血，與當(dāng)歸均為“血中之氣藥”；柴胡性辛，條達(dá)肝臟之氣滯，清瀉厥陰之郁熱；丹參清血分之郁熱，化離經(jīng)之瘀血以助生新血；香附通達(dá)三焦，長(zhǎng)于疏調(diào)肝之氣機(jī)“氣病之總司”；以上諸藥補(bǔ)陰而不礙脾，活血而不傷正，氣血調(diào)順，血和養(yǎng)陰，氣疏柔肝。兼以白術(shù)、茯苓入脾經(jīng)而益中氣，祛水濕而助運(yùn)化，浙貝母、神曲祛痰濕清郁熱，澤瀉通利小便以除水濕，助脾之運(yùn)化、肝之疏泄。重用消食藥麥芽，歸脾胃主化積回乳，歸肝經(jīng)主瀉肝火而退乳消脹[7-8]?？v觀全方，組方嚴(yán)謹(jǐn)，養(yǎng)肝血行肝氣，健脾氣助運(yùn)化，痰瘀得除，血和氣暢，木能疏土，土木相安，臨床療效確切。

臨床實(shí)踐中大多患者因出現(xiàn)月經(jīng)稀少、推遲甚至閉經(jīng)而就診，而近年來(lái)高泌乳素血癥因可造成女性不孕得到越來(lái)越受到關(guān)注，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)將其臨床表現(xiàn)概括為閉經(jīng)-泌乳綜合征[9]。PRL是具有晝夜節(jié)律的蛋白類激素，在下丘腦釋放的催乳素釋放因子（PRF）和催乳素抑制因子（PIF）的調(diào)控中取得一個(gè)平衡以維持人體正常PRL水平[10]。DA為目前發(fā)現(xiàn)在PIF中降低PRL水平作用最強(qiáng)，通過(guò)垂體門脈毛細(xì)血管系統(tǒng)，作用于泌乳素細(xì)胞表面DA受體發(fā)揮作用，而DA受體歸屬于G蛋白偶聯(lián)受體，分成D1、D2兩類作用相反的受體，G蛋白分為激活型和抑制型調(diào)節(jié)（Gs和 Gi）[11-12]。在通路 cAMP-PKA 中，泌乳細(xì)胞上的DRD1與相應(yīng)的細(xì)胞外信號(hào)結(jié)合后，通過(guò)Gs蛋白去激活腺苷酸環(huán)化酶（AC）使得ATP去磷酸化產(chǎn)生第二信使cAMP，產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)，包含激活能進(jìn)入細(xì)胞核中，磷酸化基因調(diào)控蛋白的PKA進(jìn)而增強(qiáng)PRL基因的表達(dá)，而DRD2則通過(guò)Gi蛋白，與DRD1起相反的效應(yīng)，使cAMP生成減少?gòu)亩档蚉RL水平，基于這一理論，高泌乳素血癥的臨床診治中，可以從這一信號(hào)通路機(jī)制中入手，通過(guò)血腦屏障，作用靶點(diǎn)選擇位于DRD2受體到達(dá)治療的目的，如西藥溴隱亭[13-14]。

本研究發(fā)現(xiàn)，空白組與溴隱亭組、高濃度組血清PRL、cAMP、DA水平相近，三組不同的給藥濃度中，給藥濃度越來(lái)越高，則PRL水平、cAMP含量越來(lái)越低，DA含量反之越來(lái)越高，不僅發(fā)現(xiàn)血清PRL分泌受到cAMP正向促進(jìn)和DA反向抑制，并且空白組的PRL水平低于模型組（P＜0.05），恰好反證實(shí)造模成功。各濃度組中下丘腦PKA表達(dá)與cAMP表達(dá)差異情況相似，隨著濃度增高，cAMP、PKA表達(dá)減少，這與DRD2在這一信號(hào)通路中的作用相似。從PCR的檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，DRD1mRNA、DRD2 mRNA的表達(dá)，雖然都是空白組最高、模型組最低，但是各濃度組中DRD1mRNA的差異小，而在DRD2mRNA的表達(dá)中高濃度組明顯高于模型組，且表達(dá)與陽(yáng)性組相當(dāng)；結(jié)合免疫組化結(jié)果分析，不難得知在各濃度組中，DRD2的表達(dá)明顯于DRD1。綜上所述，隨著給藥濃度的增加，DRD2表達(dá)也隨之增加，DRD1表達(dá)影響可忽略，由此可見加味當(dāng)歸散治療高泌乳素血癥大鼠應(yīng)該通過(guò)DRD2來(lái)發(fā)揮類似多巴胺的作用從而達(dá)到治療效果。