左麗，周鵬

(1.成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科，2.衰老與血管穩(wěn)態(tài)四川省高校重點實驗室，四川 成都 610500；3.川北醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科，四川 南充 637000)

冠心病(coronary heart disease，CHD)是我國近年來有增多的趨勢的常見病之一，其發(fā)生發(fā)展與動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)有很大關(guān)系，泡沫細(xì)胞的形成是動脈粥樣硬化形成、發(fā)展中的關(guān)鍵，其主要由血液中的單核細(xì)胞聚集黏附到血管內(nèi)皮，轉(zhuǎn)變成巨噬細(xì)胞攝取氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)后轉(zhuǎn)變而成。Swamura等[1]于1997 年首先在牛主動脈內(nèi)皮細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)了血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1，LOX-1)，它是ox-LDL的細(xì)胞表面受體，能結(jié)合、吞噬、降解Ox-LDL，主要在內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)。其表達(dá)增加會促進(jìn)單核源性巨噬細(xì)胞攝入ox-LDL，促使泡沫細(xì)胞形成，使粥樣核不斷增大，最終導(dǎo)致斑塊的破裂和急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome，ACS)的形成。LOX-1在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展的機(jī)制中可能起到重要作用。不同程度冠脈病變的患者血漿LOX-1和單核細(xì)胞的LOX-1mRNA的表達(dá)是否增高，它們之間是否存在相關(guān)關(guān)系，本研究將探討血漿LOX-1和LOX-1 mRNA的表達(dá)水平與冠脈病變中的可能機(jī)制及與冠脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 對象和分組

入選2017年3月至2018年3月于成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科住院并首次接受冠脈造影的患者共156例，根據(jù)造影結(jié)果分為冠心病組(n=113)及排除冠心病的對照組(n=43)，冠心病組再計算SYNTAX評分，根據(jù)評分結(jié)果分為：低分組0～22分(39例)；中分組23～32分(41例)；高分組≥33分(33例)。SYNTAX評分是基于2008年的SYNTAX研究[2]上產(chǎn)生的一種評分工具，是根據(jù)冠狀動脈造影(coronary angiography，CAG)的影像學(xué)結(jié)果對病變嚴(yán)重程度進(jìn)行評分，根據(jù)評分結(jié)果分為：低分組0～22分，中分組23～32分，高分組33分以上。分?jǐn)?shù)越高代表病變程度越重，風(fēng)險越高。許多研究顯示[3-5]，SYNTAX評分不僅可以作為復(fù)雜冠脈疾病的風(fēng)險分層工具，也可以預(yù)測復(fù)雜冠脈病變患者的臨床預(yù)后，是目前較先進(jìn)的危險分層工具。

1.2 主要試劑

人LOX-1 ELISA 試劑盒購于武漢BOSTER公司，RNAiso PLUS(Total RNA提取試劑)、SYBR Premix Ex TaqTM II、(Tli RNaseH Plus) 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、淋巴細(xì)胞分離液購于寶生物工程(大連)有限公司，2×Tag PCR MasterMix購于美國 Gibco 公司，2 000 bp DNA LANDDER購于中國北京天根生化科技有限公司，LOX-1上下游引物及ACTIN-B上下游引物均由BIONEER公司設(shè)計及合成。

1.3 觀察指標(biāo)及檢測方法

采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定測定血漿中LOX-1，采用熒光聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測外周單核細(xì)胞LOX-1 mRNA的表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床指標(biāo)的比較分析

(1)一般臨床指標(biāo)比較顯示：研究對象的性別、年齡、是否合并高血壓、是否合并糖尿病、吸煙與否、TG、VLDL以及HLDL的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。TC、LDLC之間的差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表1)；(2)冠心病與對照組之間的比較分析：冠心病組與對照組的LOX-1、外周血單核細(xì)胞LOX-1mRNA表達(dá)的比較，冠心病組患者血漿LOX-1水平以及外周血單核細(xì)胞LOX-1mRNA的表達(dá)均較正常對照組高，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)(表2，圖1-圖2)；(3)冠心病各組與正常組的比較：高分組LOX-1、LOX-1 mRNA表達(dá)較中分組、低分組和對照組均高；中分組LOX-1、LOX-1 mRNA的表達(dá)較低分組和對照組高；低分組LOX-1、LOX-1 mRNA的表達(dá)較對照組高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表3，圖3-圖4)。

表1 兩組臨床指標(biāo)的比較±s)

*P<0.05，與對照組比較。

表2 冠心病組與對照組LOX-1、外周血單核細(xì)胞LOX-1mRNA水平比較±s)

*P<0.05，與對照組比較。

表3冠心病各組及對照組間血漿LOX-1、hs-CRP、和外周血單核細(xì)胞LOX-1mRNA水平比較

指標(biāo)對照組(n=43)低分組(n=39)中分組(n=41)高分組(n=33)LOX-1mRNA0.286±0.7740.318±0.450?0.349±0.057#?0.421±0.069#?△LOX(pg/mL)104.712±14.850108.967±4.00?113.694±5.125#?118.398±3.829#?△

*P<0.05，與對照組比較；#P<0.05，與低分組比較；△P<0.05，與中分組比較。

2.2 冠心病LOX-1、外周血單核細(xì)胞LOX-1mRNA的相關(guān)性分析

冠心病LOX-1、外周血單核細(xì)胞LOX-1mRNA的相關(guān)性分析(圖5)。 以SYNTAX評分為應(yīng)變量，LOX-1、LOX-1mRNA的表達(dá)與其呈正相關(guān)(表4)，LOX-1、LOX-1mRNA是其獨立影響因素(表5)。

表4冠心病組SYNTAX評分與兩者的關(guān)分析

指標(biāo)r值P值LOX-10.620<0.01LOX-1mRNA表達(dá)0.560<0.01

表5 SYNTAX評分與兩者的多元逐步回歸分析

3 討論

Murohara等[6-7]研究發(fā)現(xiàn)ox-LDL在AS的發(fā)生發(fā)展起重要作用，它通過促使單核細(xì)胞黏附、促使泡沫細(xì)胞形成、刺激內(nèi)皮細(xì)胞釋放氧化自由基[8-9]等多種加速AS形成發(fā)展。LOX-1作為ox-LDL主要受體，能夠吞噬、降解ox-LDL。正常的生理狀態(tài)下LOX-1的表達(dá)量很少[10-11]，而在高血壓、高脂血癥等病理狀態(tài)下，其表達(dá)水平可明顯提高[12-13]。目前的研究認(rèn)為可溶性LOX-1可與血液循環(huán)中的ox-LDL結(jié)合，可減少其與膜蛋白結(jié)合的機(jī)會，從而減少其對內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用[14]。血液循環(huán)中可溶性LOX-1的水平升高，可反映細(xì)胞LOX-1表達(dá)水平升高。

本研究結(jié)果顯示冠心病組與對照組臨床資料比較，研究對象的性別、年齡、是否合并高血壓、是否合并糖尿病、吸煙與否的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，說明兩組間具有可比性。本研究結(jié)果還顯示血清LOX-1與人外周血單核細(xì)胞中LOX-1 mRNA在冠心病患者中呈高表達(dá)并且兩者隨冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的增高而增高。多元回歸分析顯示LOX-1和單核細(xì)胞LOX-1mRNA均可作為冠脈病變嚴(yán)重程度獨立影響因素。本研究與國內(nèi)外的一些相關(guān)研究[15-17]結(jié)果一致，均顯示LOX-1蛋白及基因的表達(dá)水平是冠脈病變程度的獨立影響因素。朱慧蓮等[18-19]研究用不同濃度的ox-LDL與內(nèi)皮細(xì)胞一起培養(yǎng)，結(jié)果證明ox-LDL可通過濃度、劑量依賴的方式上調(diào)LOX-1以及LOX-1mRNA的表達(dá)。在 Inoue 等[20]在apoE 基因敲除小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)，ox-LDL可通過LOX-1誘導(dǎo)各種炎癥因子和黏附分子的表達(dá)，促進(jìn)單核細(xì)胞在血管內(nèi)皮的黏附聚集，加速AS的發(fā)展。在本研究結(jié)果也顯示LOX-1和單核細(xì)胞LOX-1mRNA的表達(dá)均在冠心病患者中的表達(dá)與隨冠脈病變程度的增高而增高，且兩者相互之間呈正相關(guān)，LOX-1蛋白及基因的表達(dá)水平是冠脈病變程度的獨立影響因素。因此，可以推測在AS發(fā)生發(fā)展的早期，外周血中被氧化修飾的LDL濃度增多，可誘導(dǎo)LOX-1及其基因的表達(dá)上調(diào)。一方面，細(xì)胞上的LOX-1受體的增加可使血漿中可溶性的LOX-1隨之增加，作為清道夫受體清除血液中的ox-LDL，發(fā)揮保護(hù)血管內(nèi)皮的作用；另一方面，LOX-1受體的表達(dá)增加會加速單核細(xì)胞在血管內(nèi)皮的黏附、聚集，從而進(jìn)一步導(dǎo)致血管內(nèi)皮的損傷。Mehta等[21]研究發(fā)現(xiàn)阿司匹林可干預(yù)LOX-1表達(dá)，并且可能通過LOX-1途徑抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)。Li 等[22]研究以及國內(nèi)的研究報道[23]他汀類藥物能夠下調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞LOX-1的表達(dá)，降低ox-LDL誘導(dǎo)的細(xì)胞黏附分子表達(dá)。

綜上，增加血漿中LOX-1的水平和下調(diào)LOX-1mRNA的表達(dá)可以延緩AS發(fā)展過程，起到血管保護(hù)的作用。因此，在進(jìn)一步的實驗中，可以通過觀察在不同濃度的LOX-1和加入LOX-1mRNA抑制劑作用下的細(xì)胞表達(dá)水平變化進(jìn)一步證實猜想。LOX-1、單核細(xì)胞LOX-1mRNA表達(dá)可作為臨床上預(yù)測冠狀動脈病變程度的指標(biāo)，并可為成為冠心病的研究提供新方向。